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TRIP-1抗体的制作及应用
1
作者
张宏玲
万骏
+4 位作者
董一辰
曹威
张新胜
张锦勰
黄来强
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期139-143,共5页
旨在制作TGF-β二型受体结合蛋白TRIP-1的抗体,以便推进对该蛋白在TGF-β信号通路以及癌症发生发展中的功能研究。首先克隆出人的TRIP-1基因,构建其原核重组表达载体pET-His-TRIP-1,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导获得TRIP-1蛋白,...
旨在制作TGF-β二型受体结合蛋白TRIP-1的抗体,以便推进对该蛋白在TGF-β信号通路以及癌症发生发展中的功能研究。首先克隆出人的TRIP-1基因,构建其原核重组表达载体pET-His-TRIP-1,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导获得TRIP-1蛋白,纯化后将其分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠(KM),免疫4次后取血清,并对抗血清进行效价和亲和力测定。通过Western blot和免疫荧光试验鉴定抗血清特异性。最后,利用proteinG初步纯化抗血清。结果表明,通过重组表达获得抗原蛋白,纯化后免疫新西兰大耳兔和昆明鼠可得到效价较高的抗TRIP-1的多克隆抗体,在稀释倍数较高的情况下仍可以用于Westernblot和免疫荧光试验,且有非常好的特异性。
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关键词
原核表达纯化
TRIP-1蛋白
动物免疫
抗血清
抗体鉴定
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职称材料
Ezrin多克隆抗体制作及应用
2
作者
张宏玲
万骏
+4 位作者
严飞
张新胜
曹威
陶伟
黄来强
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期129-133,共5页
构建Ezrin原核重组表达载体pET-28a(+)-ezrin,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导获得Ezrin蛋白,将经镍柱亲和层析纯化后的蛋白分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠(KM),获得抗血清,采用ELISA和Western blotting,免疫荧光测定其效价和特异...
构建Ezrin原核重组表达载体pET-28a(+)-ezrin,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导获得Ezrin蛋白,将经镍柱亲和层析纯化后的蛋白分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠(KM),获得抗血清,采用ELISA和Western blotting,免疫荧光测定其效价和特异性。ELISA对抗血清进行效价测定表明抗血清可与抗原发生特异性免疫反应;通过Western blotting对抗血清进行鉴定表明抗血清可以识别几种细胞株内的特异性条带,其相对分子量为82 kD,与预测分子量相符;免疫荧光试验表明抗血清可以识别细胞内的Ezrin蛋白,且定位情况与文献报道相符。最后通过protein G对抗血清进行了纯化。结果表明用该方法制备的Ezrin多克隆抗体有较高的特异性和灵敏度。
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关键词
原核表达纯化
EZRIN蛋白
动物免疫
抗血清
抗体鉴定
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职称材料
题名
TRIP-1抗体的制作及应用
1
作者
张宏玲
万骏
董一辰
曹威
张新胜
张锦勰
黄来强
机构
清华大学
生命
科学学
院
清华大学深圳研究生院生命与健康学部生物医药研究中心和基因与抗体治疗重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期139-143,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30570960
30900749)
深圳市重点实验室建设与提升计划
文摘
旨在制作TGF-β二型受体结合蛋白TRIP-1的抗体,以便推进对该蛋白在TGF-β信号通路以及癌症发生发展中的功能研究。首先克隆出人的TRIP-1基因,构建其原核重组表达载体pET-His-TRIP-1,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导获得TRIP-1蛋白,纯化后将其分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠(KM),免疫4次后取血清,并对抗血清进行效价和亲和力测定。通过Western blot和免疫荧光试验鉴定抗血清特异性。最后,利用proteinG初步纯化抗血清。结果表明,通过重组表达获得抗原蛋白,纯化后免疫新西兰大耳兔和昆明鼠可得到效价较高的抗TRIP-1的多克隆抗体,在稀释倍数较高的情况下仍可以用于Westernblot和免疫荧光试验,且有非常好的特异性。
关键词
原核表达纯化
TRIP-1蛋白
动物免疫
抗血清
抗体鉴定
Keywords
Prokaryotic expression and purification
TRIP-1
Animal immunization
Anti-serum
ntibody identification
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
Ezrin多克隆抗体制作及应用
2
作者
张宏玲
万骏
严飞
张新胜
曹威
陶伟
黄来强
机构
清华大学
生命
科学学
院
清华大学深圳研究生院生命与健康学部生物医药研究中心和基因与抗体治疗重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期129-133,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30570960
30900749)
深圳市重点实验室建设与提升计划
文摘
构建Ezrin原核重组表达载体pET-28a(+)-ezrin,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导获得Ezrin蛋白,将经镍柱亲和层析纯化后的蛋白分别免疫新西兰大耳兔和昆明小鼠(KM),获得抗血清,采用ELISA和Western blotting,免疫荧光测定其效价和特异性。ELISA对抗血清进行效价测定表明抗血清可与抗原发生特异性免疫反应;通过Western blotting对抗血清进行鉴定表明抗血清可以识别几种细胞株内的特异性条带,其相对分子量为82 kD,与预测分子量相符;免疫荧光试验表明抗血清可以识别细胞内的Ezrin蛋白,且定位情况与文献报道相符。最后通过protein G对抗血清进行了纯化。结果表明用该方法制备的Ezrin多克隆抗体有较高的特异性和灵敏度。
关键词
原核表达纯化
EZRIN蛋白
动物免疫
抗血清
抗体鉴定
Keywords
Prokaryotic expression and purification Ezrin Animal immunization Anti-serum Polyclonal antibody
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
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1
TRIP-1抗体的制作及应用
张宏玲
万骏
董一辰
曹威
张新胜
张锦勰
黄来强
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
在线阅读
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职称材料
2
Ezrin多克隆抗体制作及应用
张宏玲
万骏
严飞
张新胜
曹威
陶伟
黄来强
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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职称材料
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