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在人胚胎干细胞中高效表达PELO蛋白
1
作者
胡旭林
纪家葵
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期170-176,共7页
以PELO全长cDNA为模板,采用TOPO克隆的方法,将人的PELO基因克隆到pENTR-D-TOPO载体上,形成pENTR-D-PELO克隆载体。然后通过同源重组将含有EF1α启动子的pENTR-5’-EF1α和pENTR-D-PELO重组到表达载体p2k7上,形成EF1α-PELO-p2k7表达载...
以PELO全长cDNA为模板,采用TOPO克隆的方法,将人的PELO基因克隆到pENTR-D-TOPO载体上,形成pENTR-D-PELO克隆载体。然后通过同源重组将含有EF1α启动子的pENTR-5’-EF1α和pENTR-D-PELO重组到表达载体p2k7上,形成EF1α-PELO-p2k7表达载体。将构建好的PELO高表达载体在293FT细胞中制备成相应的慢病毒表达载体,并用慢病毒侵染人胚胎干细胞,最终成功实现在人胚胎干细胞中稳定且高效地表达PELO蛋白。
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关键词
PELO
高表达
胚胎干细胞
慢病毒
同源重组
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职称材料
男性原始生殖细胞中LIN28和OCT4的表达
被引量：
2
2
作者
汪亚芬
冯涵琪
+5 位作者
王兴玲
胡旭林
纪家葵
管一春
李丽
刘芳
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2015年第3期389-392,共4页
目的：分析LIN28在男性原始生殖细胞（PGCs）中的表达变化。方法：收集男性胚胎/胎儿,胎龄为7周、8周、9周、10周、11-12周、13-14周各3例。分离早期胚胎性腺组织,运用免疫荧光技术分析PGCs中LIN28和OCT4的表达。结果：6组睾丸组织中LI...
目的：分析LIN28在男性原始生殖细胞（PGCs）中的表达变化。方法：收集男性胚胎/胎儿,胎龄为7周、8周、9周、10周、11-12周、13-14周各3例。分离早期胚胎性腺组织,运用免疫荧光技术分析PGCs中LIN28和OCT4的表达。结果：6组睾丸组织中LIN28和OTC4阳性细胞百分数比较,差异均有统计学意义（F=15.651,6.501,P均〈0.05）。胎龄第7-14周,OCT4一直定位于PGCs的细胞核中;胎龄第8-9周时,OCT4在PGCs中的表达低于第7周,第10-12周OCT4表达再次升高,而在第13周后,OCT4表达逐渐降低。从胎龄第7周开始直至第14周,PGCs中LIN28蛋白的表达逐渐增强,在胎龄第13-14周达到最高峰。在定位上,在胎龄第7周时LIN28表达于PGCs胞核内;在胎龄第8-9周时,PGCs胞核和胞质中均可观察到LIN28的表达;而在胎龄第10周以后,部分PGCs仅胞质中表达LIN28;在胎龄第11-14周时LIN28均定位于PGCs的胞质中。结论：LIN28可能是一个可行的、比较稳定的雄性生殖细胞标记因子。
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关键词
原始生殖细胞
LIN28
OTC4
男性
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职称材料
人类卵母细胞报告系统的构建
3
作者
罗梦圆
纪家葵
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期251-256,共6页
体外分化培养干细胞得到成熟生殖细胞具有重要的科学价值和临床意义,构建出人类胚胎干细胞体外分化为卵细胞的报告系统,旨在能为这一研究提供有效的工具。ZP2是组成哺乳动物卵细胞周围透明带的重要蛋白之一,其蛋白只能在卵细胞中表达,...
体外分化培养干细胞得到成熟生殖细胞具有重要的科学价值和临床意义,构建出人类胚胎干细胞体外分化为卵细胞的报告系统,旨在能为这一研究提供有效的工具。ZP2是组成哺乳动物卵细胞周围透明带的重要蛋白之一,其蛋白只能在卵细胞中表达,具有很高的组织特异性。将人ZP2基因300 bp和2 500 bp启动子片段分别与e GFP荧光蛋白基因连接,利用Gateway系统构建出重组质粒ZP2-300-e GFP和ZP2-2500-e GFP,在WI38、未分化的人胚胎干细胞H9和小鼠卵母细胞中验证其荧光蛋白表达组织特异性。结果表明,ZP2-2 500-e GFP报告系统可以特异启动荧光报告基因在小鼠的卵母细胞中的表达。
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关键词
报告系统
ZP2
卵母细胞
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职称材料
题名
在人胚胎干细胞中高效表达PELO蛋白
1
作者
胡旭林
纪家葵
机构
清华大学医学院干细胞与再生医学中心
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期170-176,共7页
基金
清华大学自主科研计划(2010THZ03)
文摘
以PELO全长cDNA为模板,采用TOPO克隆的方法,将人的PELO基因克隆到pENTR-D-TOPO载体上,形成pENTR-D-PELO克隆载体。然后通过同源重组将含有EF1α启动子的pENTR-5’-EF1α和pENTR-D-PELO重组到表达载体p2k7上,形成EF1α-PELO-p2k7表达载体。将构建好的PELO高表达载体在293FT细胞中制备成相应的慢病毒表达载体,并用慢病毒侵染人胚胎干细胞,最终成功实现在人胚胎干细胞中稳定且高效地表达PELO蛋白。
关键词
PELO
高表达
胚胎干细胞
慢病毒
同源重组
Keywords
PELO, Overexpression, Embryonic stem cells ,Lentivirus ,Homologus recombinant
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
男性原始生殖细胞中LIN28和OCT4的表达
被引量：
2
2
作者
汪亚芬
冯涵琪
王兴玲
胡旭林
纪家葵
管一春
李丽
刘芳
机构
郑州
大学
第三附属医院生殖
医学
科
清华大学医学院干细胞与再生医学中心
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2015年第3期389-392,共4页
基金
河南省科技厅国际合作项目124300510011
文摘
目的：分析LIN28在男性原始生殖细胞（PGCs）中的表达变化。方法：收集男性胚胎/胎儿,胎龄为7周、8周、9周、10周、11-12周、13-14周各3例。分离早期胚胎性腺组织,运用免疫荧光技术分析PGCs中LIN28和OCT4的表达。结果：6组睾丸组织中LIN28和OTC4阳性细胞百分数比较,差异均有统计学意义（F=15.651,6.501,P均〈0.05）。胎龄第7-14周,OCT4一直定位于PGCs的细胞核中;胎龄第8-9周时,OCT4在PGCs中的表达低于第7周,第10-12周OCT4表达再次升高,而在第13周后,OCT4表达逐渐降低。从胎龄第7周开始直至第14周,PGCs中LIN28蛋白的表达逐渐增强,在胎龄第13-14周达到最高峰。在定位上,在胎龄第7周时LIN28表达于PGCs胞核内;在胎龄第8-9周时,PGCs胞核和胞质中均可观察到LIN28的表达;而在胎龄第10周以后,部分PGCs仅胞质中表达LIN28;在胎龄第11-14周时LIN28均定位于PGCs的胞质中。结论：LIN28可能是一个可行的、比较稳定的雄性生殖细胞标记因子。
关键词
原始生殖细胞
LIN28
OTC4
男性
Keywords
primordial germ cell
LIN28
OCT4
male
分类号
R714.1 [医药卫生—妇产科学]
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职称材料
题名
人类卵母细胞报告系统的构建
3
作者
罗梦圆
纪家葵
机构
清华大学医学院干细胞与再生医学中心
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第11期251-256,共6页
文摘
体外分化培养干细胞得到成熟生殖细胞具有重要的科学价值和临床意义,构建出人类胚胎干细胞体外分化为卵细胞的报告系统,旨在能为这一研究提供有效的工具。ZP2是组成哺乳动物卵细胞周围透明带的重要蛋白之一,其蛋白只能在卵细胞中表达,具有很高的组织特异性。将人ZP2基因300 bp和2 500 bp启动子片段分别与e GFP荧光蛋白基因连接,利用Gateway系统构建出重组质粒ZP2-300-e GFP和ZP2-2500-e GFP,在WI38、未分化的人胚胎干细胞H9和小鼠卵母细胞中验证其荧光蛋白表达组织特异性。结果表明,ZP2-2 500-e GFP报告系统可以特异启动荧光报告基因在小鼠的卵母细胞中的表达。
关键词
报告系统
ZP2
卵母细胞
Keywords
reporter system
ZP2
oocyte
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R321.1 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
在人胚胎干细胞中高效表达PELO蛋白
胡旭林
纪家葵
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
男性原始生殖细胞中LIN28和OCT4的表达
汪亚芬
冯涵琪
王兴玲
胡旭林
纪家葵
管一春
李丽
刘芳
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2015
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
人类卵母细胞报告系统的构建
罗梦圆
纪家葵
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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职称材料
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