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米曲霉异源表达合成虫草素 被引量:1
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作者 闫欢欢 尚怡彤 +4 位作者 王丽红 田学琴 廖海艳 曾斌 胡志宏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期290-298,共9页
【目的】通过米曲霉中异源表达虫草素合成关键基因,构建米曲霉工程菌株合成虫草素。【方法】以米曲霉尿苷/尿嘧啶和组氨酸双营养缺陷型菌株AoΔpyrGΔHisB为背景菌株,利用农杆菌介导的转化方法对虫草素合成关键基因CmCns1-CmCns3进行过... 【目的】通过米曲霉中异源表达虫草素合成关键基因,构建米曲霉工程菌株合成虫草素。【方法】以米曲霉尿苷/尿嘧啶和组氨酸双营养缺陷型菌株AoΔpyrGΔHisB为背景菌株,利用农杆菌介导的转化方法对虫草素合成关键基因CmCns1-CmCns3进行过表达;通过荧光显微镜观察CmCns1和CmCns2在米曲霉中的亚细胞定位;利用高效液相色谱法(HPLC)测定转基因米曲霉虫草素含量,同时对米曲霉发酵液添加合成虫草素的前体甘氨酸和腺嘌呤,探究其在米曲霉中对合成虫草素的影响。【结果】蛹虫草CmCns1和CmCns2在米曲霉中定位于脂滴;并且米曲霉中单独过表达CmCns1、共表达CmCns1和CmCns2以及共表达CmCns1-CmCns3均能合成虫草素,发酵48 h虫草素胞外产量最高达到37.74 μg/mL;向米曲霉发酵液添加甘氨酸和腺嘌呤,不能有效提升虫草素的含量。【结论】成功在米曲霉异源表达合成虫草素。 展开更多
关键词 虫草素 米曲霉 异源表达 亚细胞定位 腺嘌呤 甘氨酸
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化学原理驱动的光生物不对称催化研究进展 被引量:1
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作者 付雨 钟芳锐 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第5期1021-1049,共29页
手性选择性的调控一直是合成化学的重要研究主题。酶是绿色、高选择性的天然手性催化剂,但在绿色生物合成中的应用受限于进化形成的分子结构和催化机制,光催化通过捕获光子能量实现底物分子的化学键活化,是引发自由基反应的重要策略,融... 手性选择性的调控一直是合成化学的重要研究主题。酶是绿色、高选择性的天然手性催化剂,但在绿色生物合成中的应用受限于进化形成的分子结构和催化机制,光催化通过捕获光子能量实现底物分子的化学键活化,是引发自由基反应的重要策略,融合光化学和酶的光生物催化正成为不对称催化合成的新兴合成工具。利用蛋白质改造、定向进化等先进分子生物学技术,基于光化学的化学原理挖掘辅酶的非天然催化功能,探索光催化剂与酶的协同耦合作用新模式,理性设计人为定义功能的人工光酶,能突破天然酶催化的底物谱和反应类型,有效弥补天然光酶的稀缺性,拓展生物催化的化学边界和合成空间。本文综述了化学原理驱动光生物催化不对称反应的最新研究进展,依据光和酶之间的耦合模式和催化机制,将文献分为外源光催化剂与天然酶耦合、电子供体-受体复合物激发驱动的光酶催化、辅酶直接光氧化还原和光酶能量转移催化四种不同类型,分别详细探讨其分子活化机制和立体化学调控的化学原理。此外,本文也对光生物不对称催化存在的辅酶类型单调、催化效率低等挑战进行了总结,并从天然酶库的深度挖掘、人工光酶类型的拓展、酶的从头设计和全细胞催化等角度展望了未来的发展方向,通过化学和生物融合实现高价值功能分子的绿色生物制造,推动合成化学的可持续发展。 展开更多
关键词 光生物催化 不对称催化 人工光酶 定向进化 手性合成
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基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法测定α/β-二羰基类化合物与标准瓜氨酸化肽段之间的衍生化反应活性
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作者 李雁凤 周丹丹 +7 位作者 陈旭飞 赵娟娟 高春丽 邱兴泰 唐紫超 邓楠 赵伟宁 边阳阳 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期711-720,共10页
蛋白质瓜氨酸化是一种由生物酶调控的不可逆翻译后修饰,其与免疫相关疾病、癌症、神经系统性疾病和老年痴呆症等重大疾病的发生和发展密切相关。蛋白质的瓜氨酸化修饰丰度低、缺乏亲和标签、m/z变化小且易受同位素及脱酰胺化作用干扰,... 蛋白质瓜氨酸化是一种由生物酶调控的不可逆翻译后修饰,其与免疫相关疾病、癌症、神经系统性疾病和老年痴呆症等重大疾病的发生和发展密切相关。蛋白质的瓜氨酸化修饰丰度低、缺乏亲和标签、m/z变化小且易受同位素及脱酰胺化作用干扰,因此对蛋白质的瓜氨酸化修饰进行质谱分析面临着巨大挑战。通过对瓜氨酸侧链脲基进行化学衍生反应,可以提高瓜氨酸化肽段的m/z差值,引入亲和富集标签,可有效提高瓜氨酸化分析的灵敏度和精准度。本研究以标准瓜氨酸化肽段为研究对象,以基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)为检测手段,对一系列二羰基类化合物与瓜氨酸化肽段之间的化学反应活性进行测定。在对α-二羰基类化合物的考察中发现,苯乙二醛、丙酮醛、1,2-环己二酮和1,10-邻二氮杂菲-5,6-二酮对瓜氨酸化肽段的衍生化效率很高,并且能够生成单一的衍生化产物;2,3-丁二酮、乙二醛与瓜氨酸化肽段之间的反应效率也很高,但会生成一系列副反应产物。在对β-二羰基类化合物的考察中发现,1,3-环己二酮、2,4-戊二酮在与瓜氨酸化肽段进行反应后,均可以产生单一的衍生化产物,但反应效率很低,不适用于瓜氨酸化肽段的化学衍生反应。实验结果表明,α-二羰基结构是实现高效、特异性瓜氨酸化肽段化学衍生反应的基础,α-二羰基类化合物中不同的侧链结构又决定了衍生化产物的结构、衍生化效率及副产物的生成。通过进一步合成含有亲和标签的α-二羰基类化合物,可以实现瓜氨酸化肽段的特异性富集和精准鉴定,有助于瓜氨酸化蛋白质及其位点鉴定的新方法开发。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱 二羰基结构 瓜氨酸化肽段 化学衍生
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米曲霉尿嘧啶营养缺陷型突变体筛选及转化体系建立 被引量:2
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作者 秦坤海 刘琪聪 +2 位作者 黄慧 曾斌 胡志宏 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2023年第1期51-56,共6页
米曲霉(Aspergillus oryzae)是一种十分重要的工业微生物,但由于其菌丝体和孢子均含有多个细胞核,并且对多种抗性药物具有抗性,导致其遗传转化和分子生物学研究较其他模式丝状真菌困难。目前米曲霉遗传转化主要采用营养缺陷型作为筛选... 米曲霉(Aspergillus oryzae)是一种十分重要的工业微生物,但由于其菌丝体和孢子均含有多个细胞核,并且对多种抗性药物具有抗性,导致其遗传转化和分子生物学研究较其他模式丝状真菌困难。目前米曲霉遗传转化主要采用营养缺陷型作为筛选标记。尿嘧啶营养缺陷型是米曲霉转化中最常用的一种营养缺陷型标记,其筛选标记基因pyrG编码乳清酸核苷-5′-磷酸脱羧酶为尿嘧啶的前体尿苷合成所必需。本研究以米曲霉3.042为背景,利用紫外线诱变和5-氟乳清酸(5-FOA)胁迫筛选获得5株尿嘧啶营养缺陷型菌株,经DNA测序5株菌株均为pyrG基因不同位点突变,确定为尿嘧啶营养缺陷型。以筛选到的尿嘧啶营养缺陷型菌株为背景,利用农杆菌介导的米曲霉转化系统,成功构建了米曲霉尿嘧啶营养缺陷型为筛选标记的农杆菌转化体系。 展开更多
关键词 米曲霉3.042 尿嘧啶营养缺陷型 农杆菌转化 紫外线诱变 5-氟乳清酸
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辣木籽提取物对高脂血症小鼠血脂及肝脏的影响 被引量:7
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作者 王宏 刘月 +5 位作者 饶露 蔡荣珊 宋婷婷 贺震旦 徐应淑 熊永爱 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期66-70,共5页
通过向高脂血症模型小鼠灌胃辣木籽提取物,研究辣木籽提取物对高脂血症小鼠血脂及肝脏的影响。将60只KM小鼠按体质量随机分为正常组,模型组,辛伐他汀组(1 mg/kg),辣木籽提取物低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组,每组10只... 通过向高脂血症模型小鼠灌胃辣木籽提取物,研究辣木籽提取物对高脂血症小鼠血脂及肝脏的影响。将60只KM小鼠按体质量随机分为正常组,模型组,辛伐他汀组(1 mg/kg),辣木籽提取物低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组,每组10只。除正常组饲喂基础饲料外,其余各组小鼠以高脂饲料连续喂养。实验第6周开始,除正常组和模型组外,其余各组小鼠灌胃给予相应药物,连续3周。实验结束后测定各组小鼠血清HDL-C、LDL-C、 TG、TC水平;剖取肝脏,测定肝脏指数并进行病理形态学观察;采用免疫组化法检测肝脏组织法尼酯X受体(FXR)蛋白的表达水平。结果表明:低、中、高剂量辣木籽提取物可显著降低高脂血症小鼠血清TG、TC及LDL-C水平(p<0.05),极显著升高HDL-C水平(p<0.01),改善小鼠肝脏病理形态,极显著降低小鼠肝脏病理评分(p<0.01);低剂量辣木籽提取物可显著降低小鼠肝脏指数,低、中剂量辣木籽提取物可显著降低肝脏FXR蛋白的表达(p<0.05)。因此,一定剂量的辣木籽提取物对高脂血症小鼠具有显著的治疗作用,其作用机制可能与下调FXR蛋白表达有关。 展开更多
关键词 高脂血症 辣木籽提取物 血脂 肝脏 法尼酯X受体
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铁皮石斛西洋参颗粒对过度训练小鼠的抗疲劳作用及其机制
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作者 寇卫兵 刘巧慧 +6 位作者 姚大红 郭亚萍 王航宇 张珂 王金辉 李涵 邵丹 《吉林大学学报(医学版)》 2025年第5期1165-1176,共12页
目的:探讨铁皮石斛西洋参颗粒(DPQG)对过度训练小鼠的抗疲劳作用,并阐明其可能的作用机制。方法:48只小鼠随机分为对照组(等体积蒸馏水)、低剂量DPQG组(400 mg·kg^(-1) DPQG)、中剂量DPQG组(800 mg·kg^(-1) DPQG)和高剂量DPQG... 目的:探讨铁皮石斛西洋参颗粒(DPQG)对过度训练小鼠的抗疲劳作用,并阐明其可能的作用机制。方法:48只小鼠随机分为对照组(等体积蒸馏水)、低剂量DPQG组(400 mg·kg^(-1) DPQG)、中剂量DPQG组(800 mg·kg^(-1) DPQG)和高剂量DPQG组(1600 mg·kg^(-1) DPQG),DPQG灌胃干预35 d,末次给药30 min后各组小鼠进行转棒实验和游泳耐力实验。采集各组小鼠血清、肝组织与肌肉组织,采用ELISA法检测各组小鼠血清中乳酸(LAC)水平和乳酸脱氢酶(LDH)活性及肌肉组织中丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及肌糖原和肝糖原水平,采用HE染色观察小鼠肌肉组织病理形态表现。利用转录组学与代谢组学技术鉴定对照组和高剂量DPQG组小鼠肌肉组织中关键基因与代谢产物并分析差异表达基因(DEGs)与差异代谢物的相关性。结果:与对照组比较,各剂量DPQG组小鼠转棒时间明显增加(P<0.05),高剂量DPQG组小鼠游泳力竭时间明显增加(P<0.05)。与对照组比较,中和高剂量DPQG组小鼠LDH、SOD和GSH-Px活性升高(P<0.01)。与对照组比较,中和高剂量DPQG组小鼠MDA和肝糖原水平明显降低(P<0.01)。转录组学测序,DPQG主要作用于Trib3和Olfr495等DEGs;基因本体(GO)功能富集分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,DEGs主要富集于嗅觉相关过程与信号通路;代谢组学KEGG分析,差异代谢物主要富集于炎症介质对色氨酸(TRP)的调节通路上;转录组学与代谢组学联合分析,piezo1基因与差异代谢物β1-卡茄碱(r=-1,P<0.05)和椴树碱(r=1,P<0.05)相关度较高。结论:DPQG通过调节LAC代谢和糖原平衡以及维持体内氧化/抗氧化平衡对过度训练小鼠发挥一定的抗疲劳作用,其作用机制与Olfr495和piezo1基因以及炎症介质对TRP的调节通路有关。 展开更多
关键词 铁皮石斛西洋参颗粒 抗疲劳 转录组学 代谢组学 氧化 抗氧化 乳酸
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