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miR-20a-5p在肺结核外周血单核细胞中的表达及临床价值 被引量:11
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作者 李观强 张娟娟 +5 位作者 梁娟 林士军 刘智 李国保 曾常春 张国良 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期1739-1742,1748,共5页
目的:探讨结核菌感染过程中单核细胞miR-20a-5p的表达变化情况及其与肺结核诊断、治疗的关系。方法:选取健康人群(HD)、结核菌潜伏感染(LTBI)、活动性肺结核(PTB)各5例,采集外周血并分离外周血单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠分选外周血C... 目的:探讨结核菌感染过程中单核细胞miR-20a-5p的表达变化情况及其与肺结核诊断、治疗的关系。方法:选取健康人群(HD)、结核菌潜伏感染(LTBI)、活动性肺结核(PTB)各5例,采集外周血并分离外周血单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠分选外周血CD14+单核细胞,提取总RNA并采取miRNA芯片检测,将肺结核差异表达最为显著的miRNA分子筛选出来,采用定量PCR技术在大样本人群中进行验证(每组各10例),并对5例活动性肺结核患者进行动态随访,利用定量PCR技术检测抗结核治疗前、治疗3个月后、6个月后miR-20a-5p分子的表达情况。利用结核菌强毒株H37Rv、弱毒株H37Ra以及BCG分别感染分化的人单核细胞进行体外实验验证。结果:miRNA芯片显示PTB人群与LTBI、HD人群表达谱存在显著差异,TB人群中共发现14个下调的miRNA分子,包括miR-20a-5p。定量PCR技术证实miR-20a-5p分子在TB人群中的表达水平显著低于HD和LTBI,当服用抗结核药后,其表达水平逐渐上调。用H37Rv、H37Ra及BCG在MOI=10时感染分化的人单核细胞,不同菌株均显著下调miR-20a-5p表达,而以弱毒株下调最为明显。结论:无论是体内还是体外,结核菌感染均下调单核细胞miR-20a-5p表达,而抗结核治疗则显著逆转这种抑制状态。 展开更多
关键词 肺结核 微小RNA 单核细胞
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飞行时间质谱与TaqMan探针技术在结核病易感性相关基因单核苷酸多态性筛选中的应用 被引量:4
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作者 汪文斐 张国良 +5 位作者 杨帆 杨辉 赵丽芳 徐发圣 张明霞 陈心春 《中国防痨杂志》 CAS 2014年第6期434-439,共6页
目的 对比分析飞行时间质谱技术(MALDI-TOF)和TaqMan探针筛选与结核病易感性相关单核苷酸多态性(SNP)位点的结果,以及联合应用的方法学和效果评价.方法 选取2010年10月至2011年4月在深圳市第三人民医院收治并确诊的结核病患者400例... 目的 对比分析飞行时间质谱技术(MALDI-TOF)和TaqMan探针筛选与结核病易感性相关单核苷酸多态性(SNP)位点的结果,以及联合应用的方法学和效果评价.方法 选取2010年10月至2011年4月在深圳市第三人民医院收治并确诊的结核病患者400例为结核病组,对照组为同时期收集的健康体检者300名,利用MALDI-TOF对选取的7个SNP位点(rs2227476、rs1800795、rs56077270、rs1800797、rs2227484、rs2227472和rs2227473)同时进行基因分型,初步筛选易感SNP位点;与结核病易感相关的单个SNP位点,采用基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR对同样的标本再进行基因分型,比较两种方法的准确性与敏感度;以rs2227473位点为实例对分型结果的基因频率进行分析,确定肺结核的易感SNP.结果 MALDI-TOF分型成功率为99.7%(698/700),TaqMan探针技术为98.4%(689/700);在基因分型过程中,MALDI-TOF与TaqMan探针方法对1例标本的分型结果不一致,经过对此分型结果进行了测序验证,MALDI-TOF的分型结果正确,MALDI-TOF在准确性和敏感度比TaqMan法稍高.位点rs2227473基因频率分析中,结核病组G等位基因频率(90.3%,722/800)明显高于对照组(82.5%,495/600)(x2=6.911,P=0.009).结论 上述肺结核易感基因的筛选方法是可行的;实例分析中,将两种方法联合应用,发现了IL-22基因rs2227473位点等位基因G可能与肺结核发病相关,两位点中等位基因A可能为保护性基因. 展开更多
关键词 结核 多态性 单核苷酸 白细胞介素类 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离 DNA探针 疾病遗传易感性
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结核分枝杆菌感染对Ⅰ型干扰素受体基因表达的影响及其在结核病患者外周血表达的意义 被引量:2
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作者 张国良 詹森林 +5 位作者 钟红剑 林巧 汪文斐 金晓菲 张明霞 陈心春 《中国防痨杂志》 CAS 2014年第6期482-486,共5页
目的 研究结核分枝杆菌感染对工型干扰素受体(IFNAR)基因表达的诱导作用及其在结核病患者外周血中表达的临床意义.方法 选取2013年1月至2013年5月在深圳市第三人民医院确诊的痰菌阳性的肺结核患者(TB组)15例;结核分枝杆菌潜伏感染(... 目的 研究结核分枝杆菌感染对工型干扰素受体(IFNAR)基因表达的诱导作用及其在结核病患者外周血中表达的临床意义.方法 选取2013年1月至2013年5月在深圳市第三人民医院确诊的痰菌阳性的肺结核患者(TB组)15例;结核分枝杆菌潜伏感染(latent tuberculosis infection,LTBI)者(LTBI组)15例、健康对照(HC组)15例,均为同期医院体检人员.应用免疫磁珠从健康人外周血单个核细胞(PBMCs)中分选CD14+单核细胞,在巨噬细胞集落刺激因子(M CSF)刺激下诱导分化为巨噬细胞,随后感染不同毒力结核分枝杆菌(H37Ra、H37Rv),应用实时定量PCR检测巨噬细胞中IFNAR1和IFNAR2基因表达情况,以2-△△Ct值表示IFNAR1和IFNAR2基因拷贝数.观测HC组、LTBI组、TB组患者各15例,分析不同人群PBMCs中IFNAR基因表达的差异.采用GraphPad 4.0软件对数据进行统计处理.多组计量资料数据首先进行齐性检验以判断是否符合正态分布,若符合正态分布,则用-x±s表示,并通过方差分析进行两两比较,从而计算q值.计数资料进行“行×列”表x2检验,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 经H37Rv刺激后,IFNAR1基因表达水平(5.95±0.41)显著低于空白对照(7.53±0.41),差异有统计学意义(q=4.15,P<0.05);而H37Ra刺激后IFNAR1基因表达水平为(6.54±0.33),与空白对照(7.53±0.41)、H37Rv感染(5.95±0.41)相比差异均无统计学意义(q值分别为2.56、1.57,P值均>0.05);而IFNAR2基因在H37Ra和H37Rv刺激后表达水平分别为(8.81±0.85)、(8.84±0.80),均显著低于空白对照组(12.67±1.15),差异具有统计学意义(q值分别为4.10、4.13,P值均<0.05);而H37Ra和H37Rv刺激后IFNAR2的基因表达差异无统计学意义(q=0.02,P>0.05).IFNAR1基因在TB、LTBI、HC三组人群之间表达水平分别为(5.39±0.64)、(6.59±0.86)、(7.08±1.10),两两比较差异均无统计学意义(TB vs HC,q=1.91;TB vs LTBI,q=1.53;HC vs LTBI,q=0.87;P值均>0.05),而TB患者IFNAR2基因相对表达量为(5.96±0.58),显著低于健康对照组(10.01±1.58),差异有统计学意义(q=3.67,P<0.05).结论 结核分枝杆菌感染可以诱导巨噬细胞IFNAR基因表达下调,且与菌株毒力无关.在结核病患者外周血中IFNAR2基因表达下调,具有潜在诊断价值. 展开更多
关键词 结核 分枝杆菌 结核 受体 干扰素αβ 基因表达调控 巨噬细胞
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不同毒性Mtb菌株对Ⅰ型干扰素基因的诱导作用及其在结核病患者外周血中的表达
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作者 詹森林 张国良 +5 位作者 钟红剑 金晓菲 林巧 张明霞 陈心春 周伯平 《中国防痨杂志》 CAS 2015年第1期35-39,共5页
目的研究不同Mtb菌株对Ⅰ型干扰素基因的诱导作用及其在结核病患者外周血中的表达。方法从2012年2月至2012年8月在深圳市第三人民医院健康体检者中利用随机数字表法抽取30名健康人外周血标本,并提取单个核细胞中分选出CD14^+细胞,用... 目的研究不同Mtb菌株对Ⅰ型干扰素基因的诱导作用及其在结核病患者外周血中的表达。方法从2012年2月至2012年8月在深圳市第三人民医院健康体检者中利用随机数字表法抽取30名健康人外周血标本,并提取单个核细胞中分选出CD14^+细胞,用重组人巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)刺激,诱导分化为人巨噬细胞,并分别感染Mtb减毒株H37Ra和Mtb标准株H37Rv,应用实时定量PCR(real—time PCR)检测2种菌株感染后Ⅰ型干扰素基因IFNB和IFNA的相对表达量2^-ΔΔCt值。此外使用上述方法对同期选取的结核病组(15例)、健康对照组(15例)、Mtb潜伏感染组(15例)的Ⅰ型干扰素基因的相对表达量进行检测。采用GraphPad4.0软件对数据进行统计处理,两组均数间比较采用t检验,三组均数间比较采用方差分析,以P〈0.05为差异有统计学意义。结果经H37Rv感染的健康人巨噬细胞的IFNB基因相对表达量2^-ΔΔCt值(10.38±2.24)显著高于空白对照组(6.26±3.42),差异有统计学意义(t=2.47,P=0.026);经H37Ra感染的巨噬细胞的IFNB基因相对表达量2^-ΔΔCt值(8.92±0.85)与空白对照组(6.26±3.42)比较差异无统计学意义(t=1.84,P=0.09);IFNA相对基因表达量2^-ΔΔCt值在H37Rv感染组(5.11±2.31)、H37Ra感染组(5.17±3.40)及空白对照组(4.41±1.69)之间差异无统计学意义(F=0.16,P=0.85)。结核病组IFNB基因表达(4.32±1.22)显著高于健康对照组(2.73±1.23),差异有统计学意义(t=3.55,P=0.0014);IFNA基因在健康对照组(3.91±0.75)、Mtb潜伏感染组(4.25±1.03)、结核病组(4.73±1.44)之间表达差异无统计学意义(F=1.93,P=0.064)。结论Mtb的感染可以诱导Ⅰ型干扰素基因的表达,在结核病患者中IFNB基因表达上调显著。 展开更多
关键词 结核 干扰素Ⅰ型 基因表达
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单中心尿毒症透析人群的隐性结核感染相关因素分析 被引量:2
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作者 何雯 张洁云 +3 位作者 廖玉梅 何艳 熊祖应 熊子波 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期230-234,共5页
目的:本研究横断面调查了北京大学深圳医院肾内科接受血液透析(HD)和腹膜透析(PD)尿毒症人群中隐性结核感染(LTBI)患病率,并探讨影响尿毒症透析人群LTBI的危险因素.方法:选择接受长期(≥3个月)HD和PD患者270例.排除活动性结核病、HIV感... 目的:本研究横断面调查了北京大学深圳医院肾内科接受血液透析(HD)和腹膜透析(PD)尿毒症人群中隐性结核感染(LTBI)患病率,并探讨影响尿毒症透析人群LTBI的危险因素.方法:选择接受长期(≥3个月)HD和PD患者270例.排除活动性结核病、HIV感染、恶性肿瘤、接受糖皮质激素或免疫抑制剂治疗的患者,使用酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测患者的外周血单个核细胞(PBMCs)的数值,无结核活动相关症状(发热、盗汗、消瘦等)的ELISpot阳性,影像学检查排除活动性结核者为LTBI,通过对LTBI患病率研究,以获得可能导致LTBI的危险因素.结果:270例(122例PD和148例HD)中,47例(17.4%)为ELISpot阳性,223(82.6%)为ELISpot阴性.HD组(18.9%)患者LTBI患病率略高于PD组(15.6%),差异无统计学意义(P=0.575).LTBI的危险因素为年龄(OR:0.97[0.95,0.99]每年增量),结核病史(OR:4.78[1.03,21.9])和吸烟史(OR:2.89[1.15,7.32]).结论:尿毒症透析人群LTBI患病率为17.4%,与健康人群LTBI患病率相似;不同透析方式LTBI患病率的比较差异无统计学意义;老年人、吸烟行为及结核病史为独立危险因素. 展开更多
关键词 尿毒症 透析 隐性结核感染 γ-干扰素释放试验(IGRA) 酶联免疫斑点试验(ELISpot) 风险因素
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