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SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化被引量：3: 1; 作者雷明军吴少庭 +7 位作者戴五星秦莉潘晖榕袁仕善黄达娜高世同张仁利林绮萍《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1100-1102,1067,共4页; 目的克隆SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建原核重组表达质粒pET23a-M,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达、纯化。表达产物用Western Blot检测其抗原性。方法RT-PCR扩增M编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体pMD-18T载体并转化大... 展开更多; 关键词 SARS M蛋白基因表达蛋白纯化免疫印迹; 在线阅读下载PDF 职称材料

弓形虫RH株膜表面抗原2全长基因的高效表达与抗原性分析被引量：1: 2; 作者雷明军吴少庭 +6 位作者戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期91-,共1页; 　　构建原核重组表达质粒pET23a-SAG2,并在大肠埃希菌中实现高效表达,以及检测表达产物的抗原性.PCR扩增SAG2编码基因目的片段,琼脂糖凝胶电泳回收纯化,克隆至pMD18-T载体,转化大肠埃希菌DH5α.测序后亚克隆至表达质粒载体pET23a,构建... 展开更多; 在线阅读下载PDF 职称材料

弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定: 3; 作者雷明军吴少庭 +6 位作者戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期92-93,共2页; 　　克隆弓形虫RH株膜表面抗原2(SAG2)编码基因,构建原核重组表达质粒PET23a-SAG2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达及纯化SAG2蛋白.PCR扩增503bp的SAG2编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH5α.限制... 展开更多; 在线阅读下载PDF 职称材料

SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化: 4; 作者雷明军吴少庭 +7 位作者戴五星秦莉潘晖榕袁仕善黄达娜高世同张仁利林绮萍《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期51-,共1页; 　　克隆SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建原核重组表达质粒PET23a-M,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达、纯化.表达产物用WesternBlot检测其抗原性.RT-PCR扩增M编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH... 展开更多; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化被引量：3: 1; 作者雷明军吴少庭戴五星秦莉潘晖榕袁仕善黄达娜高世同张仁利林绮萍; 机构华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系深圳市疾病预防控制中心分子生物室华南农业大学动物医学系; 出处《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1100-1102,1067,共4页; 文摘目的克隆SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建原核重组表达质粒pET23a-M,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达、纯化。表达产物用Western Blot检测其抗原性。方法RT-PCR扩增M编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH5α。序列测定后亚克隆至表达质粒载体pET23a,构建重组体pET23a-M,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,以限制性酶切分析鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达产物。结果PCR扩增出约675bp的特异性片段,与预期片段大小相符,测序鉴定无有义突变;所构建的pET23a-M重组体阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物约27kD;表达产物经金属螯和层析纯化;免疫印迹表明表达产物能被混合的SARS病人恢复期血清识别。结论成功克隆了SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建了pET23a-M表达质粒,诱导表达并纯化出了SARS冠状病毒M蛋白,并以免疫印迹鉴定。本研究的成功为进一步进行SARS病毒诊断试剂与疫苗的开发奠定了基础。; 关键词 SARS M蛋白基因表达蛋白纯化免疫印迹; Keywords SARS membrane protein gene expression protein purification western bolt; 分类号 R373.1 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名弓形虫RH株膜表面抗原2全长基因的高效表达与抗原性分析被引量：1: 2; 作者雷明军吴少庭戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利; 机构华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系深圳市疾病预防控制中心分子生物室华南农业大学动物医学系广东医学院微生物学教研室; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期91-,共1页; 文摘　　构建原核重组表达质粒pET23a-SAG2,并在大肠埃希菌中实现高效表达,以及检测表达产物的抗原性.PCR扩增SAG2编码基因目的片段,琼脂糖凝胶电泳回收纯化,克隆至pMD18-T载体,转化大肠埃希菌DH5α.测序后亚克隆至表达质粒载体pET23a,构建重组表达质粒pET23a-SAG2,转化大肠埃希菌DH5α.筛选阳性克隆,经限制性酶切分析鉴定后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与免疫印迹分析表达产物.PCR扩增出约500bp的SAG2编码基因目的片段,与预期片段大小相符,经测序鉴定无基因突变;所构建的pET23a-SAG2重组表达质粒阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致;含有pET 23a-SAG2重组质粒的大肠埃希菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物约Mr 19 000;免疫印迹结果表明表达产物具有良好的抗原性.成功构建了pET 23a-SAG2表达质粒,实现了全长成熟SAG2蛋白在大肠埃希菌中的高效表达;表达产物具有良好的抗原性.……; 分类号 R5 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定: 3; 作者雷明军吴少庭戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利; 机构华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期92-93,共2页; 文摘　　克隆弓形虫RH株膜表面抗原2(SAG2)编码基因,构建原核重组表达质粒PET23a-SAG2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达及纯化SAG2蛋白.PCR扩增503bp的SAG2编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH5α.限制性酶切分析及测序鉴定后以限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ双酶切pMD-18T-SAG2质粒与表达质粒载体Pet23a的BamHⅠ和SalⅠ多克隆位点,构建重组体Pet23a-SAG2,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,以限制性酶切分析鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.表达产物经金属鏊合层析纯化.用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达与纯化产物.PCR扩增出约503bp的SAG2编码基因目的片段,与预期片段大小相符;所构建的PET23a-SAG2重组体阳性克隆经双酶切与测序鉴定,与预期结果一致.SDS-PAGE与免疫印迹显示,表达产物约18kD.成功构建PET23a-SAG2表达质粒,诱导表达并纯化出了弓形虫RH株SAG2蛋白,并以免疫印迹鉴定.……; 分类号 R5 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化: 4; 作者雷明军吴少庭戴五星秦莉潘晖榕袁仕善黄达娜高世同张仁利林绮萍; 机构华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系深圳市疾病预防控制中心分子生物室华南农业大学动物医学系; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期51-,共1页; 文摘　　克隆SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建原核重组表达质粒PET23a-M,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达、纯化.表达产物用WesternBlot检测其抗原性.RT-PCR扩增M编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH5α.……; 分类号 R5 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化	雷明军吴少庭戴五星秦莉潘晖榕袁仕善黄达娜高世同张仁利林绮萍	《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心	2005	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	弓形虫RH株膜表面抗原2全长基因的高效表达与抗原性分析	雷明军吴少庭戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2004	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定	雷明军吴少庭戴五星潘晖榕林绮萍温见翔黄达娜高世同张仁利	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2004	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化	雷明军吴少庭戴五星秦莉潘晖榕袁仕善黄达娜高世同张仁利林绮萍	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2004	0	在线阅读下载PDF 职称材料