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引起猪腹泻的病毒分离鉴定 被引量:8
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作者 林庆燕 陈书琨 +14 位作者 孙洁 唐金明 陈兵 卢体康 刘建利 廖立珊 曾少灵 祁振强 阮周曦 吕建强 杨俊兴 曹琛福 张彩虹 花群义 秦智锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第10期75-79,共5页
为了对近年来引起仔猪腹泻的主要病毒进行分离鉴定,进而为疫苗的研发奠定基础,自2011年开始,从华南地区猪场连续3年检测出多个引起猪腹泻症状的病毒。其中2011年采用MA-104细胞系从临床样品小肠内容物中分离到猪流行性腹泻病毒(PEDV)和... 为了对近年来引起仔猪腹泻的主要病毒进行分离鉴定,进而为疫苗的研发奠定基础,自2011年开始,从华南地区猪场连续3年检测出多个引起猪腹泻症状的病毒。其中2011年采用MA-104细胞系从临床样品小肠内容物中分离到猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒A(PRoVA),临床样品为2种病毒的混合感染。2012年分离到PEDV、PRoVA和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)3种病毒,临床样品为3种病毒混合感染。2013年从临床样品中只分离到PEDV 1种病毒。通过在Vero-76传代细胞系中前3代加入胰酶和猪胰酶,自第4代仅加入胰酶的方法,成功克服了PEDV的细胞毒性,实现了连续传代,并在第8代出现了细胞病变(CPE)。通过采用IgY抗体对PEDV和PRoVA混合感染的MA-104细胞培养液连续中和和传代,成功分离纯化到猪轮状病毒A。对9个猪场的3年猪腹泻病毒性疾病流行病学调查表明,2011年—2013年主要是以PED流行为主。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 分离纯化 流行病学调查
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猪流行性腹泻病毒分离鉴定与实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 唐金明 陈书琨 +14 位作者 林庆燕 黄新亚 卢体康 孙洁 阮周曦 曾少灵 祁振强 吕建强 杨俊兴 曹琛福 张彩虹 刘建利 廖立珊 花群义 秦智锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第8期31-35,共5页
采用Vero-76细胞系从临床样品小肠内容物中分离到1株猪流行性腹泻病毒(PEDV),通过RT-PCR进行了鉴定。针对PEDV,参照保守的M基因序列设计了特异性引物和探针,建立了针对PEDV特异性的实时荧光定量RT-PCR检测方法(PEDV-rRT-PCR)。所建立的... 采用Vero-76细胞系从临床样品小肠内容物中分离到1株猪流行性腹泻病毒(PEDV),通过RT-PCR进行了鉴定。针对PEDV,参照保守的M基因序列设计了特异性引物和探针,建立了针对PEDV特异性的实时荧光定量RT-PCR检测方法(PEDV-rRT-PCR)。所建立的方法特异性强,与传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、猪细小病毒等猪主要病原体无交叉反应;方法灵敏度高,检测灵敏度达到重组质粒10-8稀释度(约20cop);重复性好,组内变异系数≤0.26%。20份田间样品检测结果表明,所建立的PEDV-rRTPCR方法快速、灵敏,检测结果准确可靠,适合用于PEDV的快速检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 病毒分离 实时荧光定量RT-PCR
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水疱性口炎病毒免提取核酸荧光定量PCR鉴别检测方法的建立 被引量:3
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作者 张彩虹 林彦星 +6 位作者 杨俊兴 曹琛福 吕建强 黄超华 祁振强 林庆燕 花群义 《动物医学进展》 北大核心 2018年第11期25-29,共5页
为建立可快速鉴别水疱性口炎病毒印第安纳型(VSV-IND)和新泽西型(VSV-NJ)免提核酸的荧光定量PCR检测方法,根据VSV-IND和VSV-NJ两种血清型相对保守的L基因序列,设计2对特异性引物和2条探针,探针用不同的荧光基团进行标记。经过对各反应... 为建立可快速鉴别水疱性口炎病毒印第安纳型(VSV-IND)和新泽西型(VSV-NJ)免提核酸的荧光定量PCR检测方法,根据VSV-IND和VSV-NJ两种血清型相对保守的L基因序列,设计2对特异性引物和2条探针,探针用不同的荧光基团进行标记。经过对各反应条件的优化,建立了直接从样品中鉴别VSV-IND和VSV-NJ的荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性和敏感性进行分析。结果显示,该直扩荧光定量PCR能准确鉴别VSV-IND和VSV-NJ,两者没有交叉反应现象,对其他几种相似病原的灭活抗原,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪水疱病病毒(SVDV)、蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)等检测均呈阴性。对10倍系列稀释的水疱性口炎灭活病毒液的检测敏感性可达10-5,与传统的荧光定量PCR的检测敏感性相当。该方法无需提取核酸,可在2h内完成对样品的检测,结果准确、快速、灵敏,为印第安纳型和新泽西型水疱性口炎病毒的特异性鉴别提供了一种切实可行的方法。 展开更多
关键词 水疱性口炎病毒 直扩荧光定量PCR 鉴别检测
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两种复合型卵黄免疫球蛋白粉对仔猪腹泻病防治效果的研究 被引量:3
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作者 彭姣 徐丁 +2 位作者 白挨泉 卢超 祁振强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第5期1361-1367,共7页
试验旨在开发能够有效预防和治疗仔猪细菌性腹泻和病毒性腹泻的卵黄免疫球蛋白粉相关产品,将卵黄抗体的先进技术更好地应用于畜牧养殖中.采用两种复合型卵黄免疫球蛋白粉对人工感染细菌(ETEC)和病毒(PEDV和TGEV)的21日龄断奶仔猪进... 试验旨在开发能够有效预防和治疗仔猪细菌性腹泻和病毒性腹泻的卵黄免疫球蛋白粉相关产品,将卵黄抗体的先进技术更好地应用于畜牧养殖中.采用两种复合型卵黄免疫球蛋白粉对人工感染细菌(ETEC)和病毒(PEDV和TGEV)的21日龄断奶仔猪进行预防和治疗试验.将复合型卵黄免疫球蛋白粉Ⅰ型按0.4%添加至仔猪断奶日粮中,攻毒后仔猪没有出现死亡情况,只有5头仔猪在攻毒初期出现轻微腹泻情况,随着饲喂的继续,5头仔猪腹泻很快得到控制,而攻毒对照组仔猪全部死亡;对21日龄仔猪攻毒,攻毒24 h内仔猪陆续出现腹泻症状.在攻毒24 h后采用复合型卵黄免疫球蛋白粉Ⅱ型产品以1:3的比例配以葡萄糖生理盐水进行灌服治疗,经3d治疗后仔猪腹泻情况得到很大的改善,5d后腹泻仔猪基本痊愈,治愈率可达84%~88%.对存活仔猪进行带毒检测,结果显示,预防组存活仔猪带毒水平较其他组更低,治疗组其次,而药物治疗对照组带毒情况严重. 展开更多
关键词 复合型卵黄免疫球蛋白粉 仔猪腹泻 攻毒试验
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猪流行性腹泻病毒双抗夹心ELISA的建立 被引量:3
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作者 雷利 彭姣 +2 位作者 祁振强 秦智峰 卢超 《中国动物检疫》 CAS 2014年第12期65-69,共5页
用猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫蛋鸡后提取抗猪流行性腹泻病毒的特异性卵黄抗体为捕获抗体,鼠抗猪流行性腹泻病毒多克隆抗体为检测抗体,建立了猪流行性腹泻病毒病原检测的双抗夹心ELISA,其最适包被抗体浓度为1:4000(12.35μg/m L),鼠抗... 用猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫蛋鸡后提取抗猪流行性腹泻病毒的特异性卵黄抗体为捕获抗体,鼠抗猪流行性腹泻病毒多克隆抗体为检测抗体,建立了猪流行性腹泻病毒病原检测的双抗夹心ELISA,其最适包被抗体浓度为1:4000(12.35μg/m L),鼠抗猪流行性腹泻病毒的多克隆抗体最佳浓度为1:6000(10.25μg/m L),样品反应时间为30min,酶标抗体工作浓度为1:6000,并以OD450≥0.130作为阳性判断标准。该方法与猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒、猪流感病毒、大肠杆菌K88、K99、987P、F41等病原无交叉反应。对经猪流行性腹泻病毒PCR检测的100份粪便样本进行检测表明,8份PCR检测阳性样本中6份为本法阳性;PCR阴性者本法全部阴性。实验结果表明该方法具有良好的特异性和敏感性,可用于猪流行性腹泻病毒的快速检测。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 卵黄抗体 双抗夹心ELISA
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共表达K88/987p菌毛产肠毒素性大肠杆菌的分离鉴定及其卵黄抗体的制备 被引量:4
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作者 彭姣 李职 +1 位作者 祁振强 卢超 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期303-308,共6页
为制备针对一些大型养猪场产肠毒素性大肠杆菌(enterotrxigenic Escherichia coli,ETEC)分离株的特异性卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,IgY),试验对从这些养殖场分离的ETEC分离株菌毛基因类型进行了PCR鉴定,纯化该分离株的菌毛蛋白... 为制备针对一些大型养猪场产肠毒素性大肠杆菌(enterotrxigenic Escherichia coli,ETEC)分离株的特异性卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,IgY),试验对从这些养殖场分离的ETEC分离株菌毛基因类型进行了PCR鉴定,纯化该分离株的菌毛蛋白免疫蛋鸡制备IgY,对该IgY的效价、特异性和体外抑菌效果进行了检测。结果表明,该分离株具有K88和987p两种菌毛基因,纯化后的分离株菌毛具有较强的免疫原性,经3次免疫后产生的IgY对K88和987p全菌和菌毛的效价可达到1∶64 000,分离株菌毛IgY能特异地与K88和987p反应,与K99、F41无交叉反应,5mg/mL分离株菌毛IgY在体外具有很好的抑菌效果。 展开更多
关键词 K88 987p 共表达 菌毛蛋白 卵黄抗体 体外抑菌
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