目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Der f 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法 ,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f2重组蛋白并通过亲和层析纯化,...目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Der f 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法 ,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f2重组蛋白并通过亲和层析纯化,再免疫小鼠,利用间接ELISA筛选获得McAb杂交瘤细胞株并纯化、鉴定抗体的特异性;用一株单抗包被酶标板,同时用生物素标记另一株单抗,从而建立双单抗体夹心ELISA法;并用此法测定粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量。结果成功地获得了一株单抗3B12与屋尘螨抗原具有交叉反应,另外一株单抗3G7与屋尘螨抗原没有交叉反应,并建立了双单抗夹心ELISA方法测定Der f2的含量,其方法的检测限为0.5ng/mL,并在6.25ng/mL-300ng/mL范围内线性良好;标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量为100ng/10000BAU。结论成功制备了高效价抗Der f 2单抗,并建立了双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有很高的灵敏度,可以测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量,为临床应用奠定基础。展开更多
目的:研究痤疮患者病灶及外周血中Toll样受体(toll like receptors,TLRs)家族的表达量及其对炎症介质合成的调节作用。方法:选择2013年6月~2016年7月期间在我院就诊的60例寻常型痤疮患者作为痤疮组,同期在我院接受清创缝合的48例外伤患...目的:研究痤疮患者病灶及外周血中Toll样受体(toll like receptors,TLRs)家族的表达量及其对炎症介质合成的调节作用。方法:选择2013年6月~2016年7月期间在我院就诊的60例寻常型痤疮患者作为痤疮组,同期在我院接受清创缝合的48例外伤患者作为对照组。收集痤疮病灶组织及清创后的皮肤组织并测定TLRs及炎症介质的表达量,采集外周血单个核细胞并测定TLRs的表达量。结果:痤疮组患者皮肤组织及外周血单个核细胞中TLR2、TLR4的蛋白表达量显著高于对照组(P<0.05),TLR3、TLR5、TLR7、TLR9的蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);TLR2和TLR4高表达的痤疮组织中白介素(IL)-1α、IL-1β、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量显著高于TLR2和TLR4低表达的痤疮组织(P<0.05)。结论:痤疮患者病灶及外周血中TLR2、TLR4呈高表达趋势且对炎症介质的合成具有促进作用。展开更多
文摘目的研制粉尘螨Ⅱ组变应原Der f 2单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),并建立双单抗夹心ELISA检测方法 ,测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f 2的含量。方法应用基因工程方法获得粉尘螨变应原Der f2重组蛋白并通过亲和层析纯化,再免疫小鼠,利用间接ELISA筛选获得McAb杂交瘤细胞株并纯化、鉴定抗体的特异性;用一株单抗包被酶标板,同时用生物素标记另一株单抗,从而建立双单抗体夹心ELISA法;并用此法测定粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量。结果成功地获得了一株单抗3B12与屋尘螨抗原具有交叉反应,另外一株单抗3G7与屋尘螨抗原没有交叉反应,并建立了双单抗夹心ELISA方法测定Der f2的含量,其方法的检测限为0.5ng/mL,并在6.25ng/mL-300ng/mL范围内线性良好;标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中Der f2的含量为100ng/10000BAU。结论成功制备了高效价抗Der f 2单抗,并建立了双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有很高的灵敏度,可以测定标准化粉尘螨变应原脱敏疫苗中主要变应原Der f 2含量,为临床应用奠定基础。
文摘目的:研究痤疮患者病灶及外周血中Toll样受体(toll like receptors,TLRs)家族的表达量及其对炎症介质合成的调节作用。方法:选择2013年6月~2016年7月期间在我院就诊的60例寻常型痤疮患者作为痤疮组,同期在我院接受清创缝合的48例外伤患者作为对照组。收集痤疮病灶组织及清创后的皮肤组织并测定TLRs及炎症介质的表达量,采集外周血单个核细胞并测定TLRs的表达量。结果:痤疮组患者皮肤组织及外周血单个核细胞中TLR2、TLR4的蛋白表达量显著高于对照组(P<0.05),TLR3、TLR5、TLR7、TLR9的蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);TLR2和TLR4高表达的痤疮组织中白介素(IL)-1α、IL-1β、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量显著高于TLR2和TLR4低表达的痤疮组织(P<0.05)。结论:痤疮患者病灶及外周血中TLR2、TLR4呈高表达趋势且对炎症介质的合成具有促进作用。
