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不同提取及扩增方法检测大肠杆菌DNA的性能比较 被引量：1
1
作者 余小妹 钱纯亘 +4 位作者 聂立波 汤建新 吴力强 黄钊 易辉 《湘潭大学学报（自然科学版）》 CAS 2024年第2期110-122,共13页
大肠杆菌O157∶H7是一种危害性极大的食源性致病菌,为实现大肠杆菌O157∶H7的快速检测,分别采用碱加热裂解法、TritonX-100加热裂解法、溶菌酶加十二烷基硫酸钠(SDS)裂解法、SDS加蛋白酶K裂解法及热裂解法5种方法提取大肠杆菌O157∶H7... 大肠杆菌O157∶H7是一种危害性极大的食源性致病菌,为实现大肠杆菌O157∶H7的快速检测,分别采用碱加热裂解法、TritonX-100加热裂解法、溶菌酶加十二烷基硫酸钠(SDS)裂解法、SDS加蛋白酶K裂解法及热裂解法5种方法提取大肠杆菌O157∶H7基因组DNA,考察了环介导等温扩增(LAMP)和实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)扩增法对所提取DNA的检测效果,并建立最佳的核酸快速提取样品预处理方法.结果表明,以碱加热裂解预处理提取的大肠杆菌O157∶H7基因组DNA为检测样本时,LAMP扩增及qPCR扩增法的检测性能最好,检出限达到10^(1)CFU/mL,与常规商品化试剂盒提取所得菌液基因组DNA的检测性能一致.所建立的碱加热裂解样品预处理方法耗时短、成本低,无须进行复杂的核酸提取,操作简单,可用于大肠杆菌O157∶H7的快速检测. 展开更多
关键词 大肠杆菌O157∶H7 LAMP qPCR 碱加热裂解法 核酸提取
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基于微流控技术的磁免疫荧光法在EB病毒检测中的应用 被引量：3
2
作者 李俊豪 韩冠华 +3 位作者 林晓涛 吴力强 钱纯亘 徐军发 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期372-383,共12页
EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)的早期诊断能够降低患者发生重大疾病的风险。临床上常用的EBV抗体的检测方法存在耗时长、试剂消耗大和效率低等缺点。相比于传统的检测方法,微流控(microfluidics)技术具有高通量、试剂消耗少,污染少和... EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)的早期诊断能够降低患者发生重大疾病的风险。临床上常用的EBV抗体的检测方法存在耗时长、试剂消耗大和效率低等缺点。相比于传统的检测方法,微流控(microfluidics)技术具有高通量、试剂消耗少,污染少和自动化程度高等优点,磁免疫荧光技术具有检测效率高、信号强等优点,将两者的优势结合,能够弥补传统方法的不足。鉴于此,采用聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)作为芯片原材料,经过激光切割及真空热压加工工艺能够快速获得芯片。将包被抗原的磁珠及包被抗人抗体的荧光微球经过冷冻干燥工艺快速冻干成小球并嵌入芯片内,经过孵育和清洗后,进行检测。通过图像分析快速得到检测结果。通过精密度、特异性、剂量-反应曲线及检出限测试,进行性能验证。通过与化学发光免疫分析法(CLIA)检测的临床样本比对,进行方法学与临床应用评价。结果显示相对标准偏差(RSD)均小于10%。与多种常见的病原体抗体均无交叉反应。EB病毒衣壳抗原(Epstein-Barr viral capsid antigen,EB VCA)IgG项目的检出限为1.92 U/mL,线性范围为1.92~200 U/mL,阳性符合率为95.77%(68/71),阴性符合率为86%(43/50);EB VCA IgA项目的检出限为2.79 U/mL,线性范围为2.79~200 U/mL,阳性符合率为92%(46/50),阴性符合率为92.96%(66/71);EB病毒核心抗原1(Epstein-Barr nuclear antigen 1,EB NA1)IgG项目的检出限为3.13 U/mL,线性范围为3.13~200 U/mL,阳性符合率为92.96%(66/71),阴性符合率为92%(46/50);EB NA1 IgA项目的检出限为1.53 U/mL,线性范围为1.53~200 U/mL,阳性符合率为90%(45/50),阴性符合率为91.55%(65/71)。4个项目能在20 min内快速完成检测,且与临床上使用CLIA方法测试的结果具有良好的相关性,可以为临床提供一种快速、灵敏、简便、自动化程度高和易于基层推广的检测方法。 展开更多
关键词 微流控 磁免疫荧光 EB病毒 快速检测
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BDT、BDTO分子结构修饰后高发光性能纳米材料的筛选及其在血清PCT检测中的应用
3
作者 张海燕 张赛 +2 位作者 邝振展 胡蓉 刘仲明 《山东医药》 CAS 2020年第35期6-11,共6页
目的对苯并[1,2-b:4,5-b′]二噻吩(BDT)和苯并[1,2-b:4,5-b′]-二噻吩1,1,5,5-四氧化物(BDTO)的分子结构进行修饰后筛选高发光性能的纳米材料,并观察其在血清降钙素原(PCT)免疫荧光检测中的应用效果。方法对BDT和BDTO进行三苯胺(TPA)、... 目的对苯并[1,2-b:4,5-b′]二噻吩(BDT)和苯并[1,2-b:4,5-b′]-二噻吩1,1,5,5-四氧化物(BDTO)的分子结构进行修饰后筛选高发光性能的纳米材料,并观察其在血清降钙素原(PCT)免疫荧光检测中的应用效果。方法对BDT和BDTO进行三苯胺(TPA)、3位连接咔唑(PcZ)、9位连接咔唑(CzP)及叔丁基(TCzP)分子结构修饰,根据其发光性能相关指标[最大吸收波长(λabs)、最大发射波长(λem)、Stokes位移及溶液态、聚集态的绝对量子产率]、在水中的粒径分布情况,筛选CzP-BDT作为进行后续实验的纳米材料。以DSPE-PEG2000-MAL为包覆基质,采用改进的共沉淀技术及酰胺缩合一步法对CzP-BDT纳米粒子进行包装及抗PCT检测抗体标记。取浓度分别为45、30、<0.05 ng/mL的血清PCT样品和生理盐水各100μL,分别采用荧光微球FM02的免疫荧光分析法(简称FM02法)及CzP-BDT的免疫荧光分析法(简称CzP-BDT法)对不同标本进行免疫荧光检测。结果在470 nm激发光波长下,FM02法检测的发射光谱为500~650 nm,在525 nm处测得最大荧光强度;其中检测45 ng/mL的血清PCT样品时在525 nm处荧光强度为415.5,检测30 ng/mL和<0.05 ng/mL的血清PCT样品以及生理盐水时在525 nm处荧光强度分别为197.5、197.5、146.8。在340 nm激发光波长下,CzP-BDT法检测的发射光谱为500~650 nm,在525 nm处测得最大荧光强度;其中检测45 ng/mL的血清PCT样品时在525 nm处荧光强度为1064.0,检测30 ng/mL和<0.05 ng/mL的血清PCT样品以及生理盐水时在525 nm处荧光强度分别为766.2、664.0、456.9。两种方法均能检出45 ng/mL的血清PCT样品,但对于30 ng/mL、<0.05 ng/mL的血清PCT样品,只有采用CzP-BDT纳米粒子进行免疫荧光检测能实现有效鉴别并与生理盐水进行区分。结论成功制备8种BDT、BDTO化合物,并从中筛选具有高发光性能的CzP-BDT纳米材料;其在低浓度血清PCT免疫荧光检测的灵敏度高于FM02荧光微球,有望成为血清PCT免疫荧光检测的新一代发光材料。 展开更多
关键词 聚集诱导发光材料 BDT BDTO 9位连接咔唑 降钙素原 免疫荧光检测
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基于微流控技术的呼吸道病毒可视化免疫检测研究 被引量：2
4
作者 潘婷 吴力强 +1 位作者 钱纯亘 聂立波 《包装学报》 2022年第2期31-40,共10页
利用微流控芯片技术,开发了一种集成、快速、简单的免疫微流控芯片,通过胶体金显色反应对4种呼吸道病毒抗原进行可视化免疫检测。结果表明,芯片对甲型流感抗原、乙型流感抗原、呼吸道合胞病毒抗原和新型冠状病毒抗原的检出限分别为37.6 ... 利用微流控芯片技术,开发了一种集成、快速、简单的免疫微流控芯片,通过胶体金显色反应对4种呼吸道病毒抗原进行可视化免疫检测。结果表明,芯片对甲型流感抗原、乙型流感抗原、呼吸道合胞病毒抗原和新型冠状病毒抗原的检出限分别为37.6 ng/mL、17.8μg/mL、112.5 ng/mL和0.05 ng/mL,检出时间为10 min,特异性良好。此方法可实现呼吸道病毒抗原的现场快速检出,及时区分新型冠状病毒肺炎与普通呼吸道感染,可提高疫情防控效率。 展开更多
关键词 免疫检测 微流控芯片 呼吸道病毒 可视化
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双通道微流控芯片的研制及在RNP抗体和SmD1抗体检测中的应用
5
作者 袁榕晨 黄钊 +2 位作者 钱纯亘 吴力强 汤建新 《包装学报》 2022年第2期22-30,共9页
自身免疫性疾病发病机制复杂,治愈难度大,因而早期诊断对疾病的有效防治具有重要的意义。为实现从单通道单标志物的单一检测到双通道双标志物的同时检测,开发了一种具有加样孔、储存腔、特斯拉阀、混合区、反应腔、废液腔和流道的双通... 自身免疫性疾病发病机制复杂,治愈难度大,因而早期诊断对疾病的有效防治具有重要的意义。为实现从单通道单标志物的单一检测到双通道双标志物的同时检测,开发了一种具有加样孔、储存腔、特斯拉阀、混合区、反应腔、废液腔和流道的双通道微流控芯片。将检测抗体储存于储存腔,利用特斯拉阀控制液体在芯片中的流向。用自制芯片对RNP抗体和SmD1抗体进行检测,检测范围分别为9.6~444.0 AU/mL和12.5~424.8 AU/mL,RSD分别为4.4%和3.5%,检测限分别为5 AU/mL和6.25 AU/mL,检测特异性、重复性良好,可应用于自身免疫性疾病的快速便捷诊断。 展开更多
关键词 自身免疫性疾病 双通道微流控芯片 混合结缔组织病 系统性红斑狼疮 特斯拉阀
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t-PAIC单克隆抗体制备及磁微粒化学发光免疫检测 被引量：1
6
作者 王兢磊 孔飞志 +2 位作者 党智笙 钱纯亘 聂立波 《包装学报》 2023年第4期59-67,共9页
以组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂复合物(t-PAIC)为免疫原制备和筛选了一对特异性单克隆抗体,并建立了一种检测人体血浆t-PAIC的磁微粒化学发光免疫检测方法。通过与参比方法比对,选定了反应速度更快的一步法作为反应模式,然后对t-PAIC检... 以组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂复合物(t-PAIC)为免疫原制备和筛选了一对特异性单克隆抗体,并建立了一种检测人体血浆t-PAIC的磁微粒化学发光免疫检测方法。通过与参比方法比对,选定了反应速度更快的一步法作为反应模式,然后对t-PAIC检测方法的检测性能进行了评估。结果显示:该方法的空白限为0.43 ng/mL,检出限为0.91 ng/mL;线性范围为0.91~100ng/mL;重复性CV小于4%,精密度CV小于3%;样本回收率在100%~110%之间;常见干扰物对检测结果无明显影响。构建了t-PAIC检测方法的参考区间,健康成年男性参考范围为1.85~15.91 ng/mL,健康成年女性参考范围为1.90~9.43 ng/mL。t-PAIC检测方法反应快速,在血栓疾病诊断中有重要的应用价值。 展开更多
关键词 单克隆抗体 化学发光 人组织型纤溶酶原激活剂-抑制剂复合物 吖啶酯
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基于多重荧光编码技术对TORCH感染的高通量检测 被引量：1
7
作者 崔婷 钱纯亘 +2 位作者 吴力强 黄天逊 汤建新 《包装学报》 2023年第1期36-45,共10页
TORCH感染的早期快速诊断在疾病管理中至关重要,有助于提高诊疗效果,降低医疗风险。利用多重荧光编码技术,建立了一种可同时检测弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒特异性抗体IgG的免疫分析法。通过对偶联缓冲液pH值及Goat ant... TORCH感染的早期快速诊断在疾病管理中至关重要,有助于提高诊疗效果,降低医疗风险。利用多重荧光编码技术,建立了一种可同时检测弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒特异性抗体IgG的免疫分析法。通过对偶联缓冲液pH值及Goat anti-Human IgG-PE浓度的优化得到最佳检测条件,并对该实验方法的精密度、特异性、剂量-反应曲线及检出限进行性能验证。结果表明,各项目的相对标准偏差(RSD)均小于10%,与多种常见的病原体抗体均无交叉反应,在40 min内能同时完成5个项目的批量检测,且与CLIA方法测试的结果具有良好的相关性。此方法可缩短检验周期、节约检测成本,为临床上快速、灵敏、高通量的TORCH感染筛查提供一种新的途径。 展开更多
关键词 多重荧光编码技术 编码微球 TORCH感染 高通量检测
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利用SOLIDWORKS实现电缆布置的三维设计
8
作者 曾毅 羊祥云 谭薪兴 《农村电气化》 2023年第10期99-101,共3页
SOLIDWORKS软件是常见的三维模型设计软件,针对电缆布置的三维设计,文章介绍了电缆参数的设置方法,常用电缆附件的设置方法及电缆布置模型的建立方式。根据工程应用表明,此方法建立的三维模型能够精确测量电缆的实际使用长度,合理地实... SOLIDWORKS软件是常见的三维模型设计软件,针对电缆布置的三维设计,文章介绍了电缆参数的设置方法,常用电缆附件的设置方法及电缆布置模型的建立方式。根据工程应用表明,此方法建立的三维模型能够精确测量电缆的实际使用长度,合理地实施电缆安装工作。 展开更多
关键词 Soildworks 电缆布置 三维
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