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植物病毒表达载体pClYVV/CP/W的构建及GFP表达的研究
被引量：
1
1
作者
王振东
王晓华
+5 位作者
孟鹏
秦会权
郑新伟
刘芳普
薛立江
张敏
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第28期13510-13513,共4页
[目的]研究植物病毒表达载体pC1YVV/CP/W的构建及用pC1YVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pC1YVV基因组的Mb/CP基因之间的一段多克...
[目的]研究植物病毒表达载体pC1YVV/CP/W的构建及用pC1YVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pC1YVV基因组的Mb/CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶NIa切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头,构建pC1YVV/CP/W载体,并将绿色荧光蛋白基因插入pC1YVV/CP/W中构建pC1YVV/CP/W/GFP载体,用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测,并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定。[结果]pC1YVV/CP/W/GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型C1YVV相同的症状,发病率达100%,表明重组病毒克隆pClYVV/CP/W/GFP有侵染性,外源基因的插入没有破坏载体pClYVV/CP/W的开放阅读框;外源基因在F_4子代病毒基因组中稳定存在;重组病毒克隆pC1YVV/CP/W/GFP至少到F_4子代病毒能稳定表达GFP。[结论]该研究结果为用植物表达有用蛋白提供了有用的植物病毒载体。
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关键词
植物病毒表达载体
pC1YVV/CP/W
pC1YVV/CP/W/GFP
构建
表达
在线阅读
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职称材料
植物病毒载体介导的sMMO-C在蚕豆植物中的表达
2
作者
陈超力
张敏
+2 位作者
王丽
孟可心
王振东
《沈阳农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期575-579,共5页
构建了可溶性甲烷单加氧酶C亚单位(soluble methane monoxygenase-C component,sMMO-C)基因和绿色荧光蛋白-S65T(green fluorescence protein,GFP-S65T)基因的融合基因sMMO-C/GFP-S65T。将融合基因sMMO-C/GFP-S65T克隆到三叶草黄脉病毒(...
构建了可溶性甲烷单加氧酶C亚单位(soluble methane monoxygenase-C component,sMMO-C)基因和绿色荧光蛋白-S65T(green fluorescence protein,GFP-S65T)基因的融合基因sMMO-C/GFP-S65T。将融合基因sMMO-C/GFP-S65T克隆到三叶草黄脉病毒(glover yellow vein virus,ClYVV)侵染性植物表达载体pClYVV/CP/W的NIb/CP基因之间,构建了侵染性重组病毒克隆pCV-mmoC/GFP-S65T。RT-PCR检测结果表明,sMMO-C/GFP-S65T在子代病毒基因组中获得了转录。用GFP抗体进行蛋白质杂交(western blotting,WB),检测到25kDa左右的GFP蛋白,这一结果表明GFP蛋白在被pCV-mmoC/GFP-S65T侵染的寄主植物中获得了表达,并被病毒自身编码的NIa蛋白酶从病毒聚合蛋白及sMMO-C/GFP-S65T融合蛋白中自动切断。可见,sMMO-C亚单位蛋白在植物中获得了表达,因在sMMO-C/GFP-S65T中sMMO-C位于GFP上游。
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关键词
植物病毒载体
表达
GFP
sMMO-C
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职称材料
题名
植物病毒表达载体pClYVV/CP/W的构建及GFP表达的研究
被引量：
1
1
作者
王振东
王晓华
孟鹏
秦会权
郑新伟
刘芳普
薛立江
张敏
机构
沈阳农业大学
生物
科学技术学院
辽宁省沈阳市农业检测中心
深圳市九升生物制品有限公司
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第28期13510-13513,共4页
基金
辽宁省自然基金资助项目(20072122)
辽宁省教育厅资助项目(05L339)
文摘
[目的]研究植物病毒表达载体pC1YVV/CP/W的构建及用pC1YVV/CP/W表达绿色荧光蛋白(GFP),为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pC1YVV基因组的Mb/CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶NIa切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头,构建pC1YVV/CP/W载体,并将绿色荧光蛋白基因插入pC1YVV/CP/W中构建pC1YVV/CP/W/GFP载体,用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测,并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定。[结果]pC1YVV/CP/W/GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型C1YVV相同的症状,发病率达100%,表明重组病毒克隆pClYVV/CP/W/GFP有侵染性,外源基因的插入没有破坏载体pClYVV/CP/W的开放阅读框;外源基因在F_4子代病毒基因组中稳定存在;重组病毒克隆pC1YVV/CP/W/GFP至少到F_4子代病毒能稳定表达GFP。[结论]该研究结果为用植物表达有用蛋白提供了有用的植物病毒载体。
关键词
植物病毒表达载体
pC1YVV/CP/W
pC1YVV/CP/W/GFP
构建
表达
Keywords
Plant virus expression vector
pC1YVV/CP/W
pC1YVV/CP/W/GFP
Construction
Expression
分类号
S188 [农业科学—农业基础科学]
在线阅读
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职称材料
题名
植物病毒载体介导的sMMO-C在蚕豆植物中的表达
2
作者
陈超力
张敏
王丽
孟可心
王振东
机构
沈阳农业大学
生物
科学技术学院
深圳市九升生物制品有限公司
南阳师范学院生命科学与技术学院
沈阳农业大学外语教学部
出处
《沈阳农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第5期575-579,共5页
基金
沈阳市科技局农业攻关项目(1091104-3-03)
辽宁省教育厅科学技术研究项目(L2010490)
辽宁省自然科学基金项目(20072122)
文摘
构建了可溶性甲烷单加氧酶C亚单位(soluble methane monoxygenase-C component,sMMO-C)基因和绿色荧光蛋白-S65T(green fluorescence protein,GFP-S65T)基因的融合基因sMMO-C/GFP-S65T。将融合基因sMMO-C/GFP-S65T克隆到三叶草黄脉病毒(glover yellow vein virus,ClYVV)侵染性植物表达载体pClYVV/CP/W的NIb/CP基因之间,构建了侵染性重组病毒克隆pCV-mmoC/GFP-S65T。RT-PCR检测结果表明,sMMO-C/GFP-S65T在子代病毒基因组中获得了转录。用GFP抗体进行蛋白质杂交(western blotting,WB),检测到25kDa左右的GFP蛋白,这一结果表明GFP蛋白在被pCV-mmoC/GFP-S65T侵染的寄主植物中获得了表达,并被病毒自身编码的NIa蛋白酶从病毒聚合蛋白及sMMO-C/GFP-S65T融合蛋白中自动切断。可见,sMMO-C亚单位蛋白在植物中获得了表达,因在sMMO-C/GFP-S65T中sMMO-C位于GFP上游。
关键词
植物病毒载体
表达
GFP
sMMO-C
Keywords
plant virus vector
expression
GFP
sMMO-C
分类号
S432.41 [农业科学—植物病理学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
植物病毒表达载体pClYVV/CP/W的构建及GFP表达的研究
王振东
王晓华
孟鹏
秦会权
郑新伟
刘芳普
薛立江
张敏
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
植物病毒载体介导的sMMO-C在蚕豆植物中的表达
陈超力
张敏
王丽
孟可心
王振东
《沈阳农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
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职称材料
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