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粉尘螨铁蛋白的克隆、表达及蛋白特征分析
1
作者
林建立
詹政科
+3 位作者
刘玉琳
范小琴
耿晓瑞
刘晓宇
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期927-930,937,共5页
目的为了获得粉尘螨铁蛋白(ferritin)蛋白,并对该蛋白特征进行分析。方法根据铁蛋白基因已知序列,设计出相应的引物,提取粉尘螨总RNA,采用RT-PCR方法扩增出铁蛋白基因,PCR产物克隆入pET32a载体,构建的重组质粒pET32a-ferritin,经酶切和...
目的为了获得粉尘螨铁蛋白(ferritin)蛋白,并对该蛋白特征进行分析。方法根据铁蛋白基因已知序列,设计出相应的引物,提取粉尘螨总RNA,采用RT-PCR方法扩增出铁蛋白基因,PCR产物克隆入pET32a载体,构建的重组质粒pET32a-ferritin,经酶切和测序鉴定后,再转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其表达效果,用Ni+离子亲和层析柱纯化其重组蛋白。用生物信息学方法对粉尘螨铁蛋白的特征进行分析。结果成功克隆粉尘螨铁蛋白基因并构建了pET32a-ferritin重组质粒;粉尘螨铁蛋白基因开放阅读框为543bp,编码179个氨基酸,PI 5.35;SDS-PAGE结果表明铁蛋白基因在大肠杆菌Bl21(DE3)中获得良好的表达,经亲和层析纯化后,表达产物分子质量约为20kD。经生物信息学分析,粉尘螨铁蛋白含有8个丝氨酸激酶、7个苏氨酸激酶、7个酪氨酸激酶、0组氨酸激酶磷酸化位点,亲水区域大于疏水区域,属不稳定蛋白。结论克隆、表达了尘螨铁蛋白,经纯化后获得较高纯度的重组蛋白,并对其三级结构进行分析,为进一步研究尘螨过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。
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关键词
粉尘螨
铁蛋白
蛋白表达
纯化
生物信息学分析
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题名
粉尘螨铁蛋白的克隆、表达及蛋白特征分析
1
作者
林建立
詹政科
刘玉琳
范小琴
耿晓瑞
刘晓宇
机构
深圳大学
过敏反应与免疫学
研究所
南昌
大学
医学院免疫学教研室
深圳大学耳鼻咽喉科研究所
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期927-930,937,共5页
基金
国家自然科学基金(No.31328014
31400786)
+4 种基金
广东省高等学校国际暨港澳台科技合作创新平台项目(No.2012gjhz0009)
深圳市科技计划国际科技合作项目(GJHZ20130408174112021)
深圳市科技计划基础研究项目(No.JCYJ20130329110735981
JCYJ20120613173233810)
深圳市南山区研发项目(No.KC2012JSYB0003A)~~
文摘
目的为了获得粉尘螨铁蛋白(ferritin)蛋白,并对该蛋白特征进行分析。方法根据铁蛋白基因已知序列,设计出相应的引物,提取粉尘螨总RNA,采用RT-PCR方法扩增出铁蛋白基因,PCR产物克隆入pET32a载体,构建的重组质粒pET32a-ferritin,经酶切和测序鉴定后,再转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其表达效果,用Ni+离子亲和层析柱纯化其重组蛋白。用生物信息学方法对粉尘螨铁蛋白的特征进行分析。结果成功克隆粉尘螨铁蛋白基因并构建了pET32a-ferritin重组质粒;粉尘螨铁蛋白基因开放阅读框为543bp,编码179个氨基酸,PI 5.35;SDS-PAGE结果表明铁蛋白基因在大肠杆菌Bl21(DE3)中获得良好的表达,经亲和层析纯化后,表达产物分子质量约为20kD。经生物信息学分析,粉尘螨铁蛋白含有8个丝氨酸激酶、7个苏氨酸激酶、7个酪氨酸激酶、0组氨酸激酶磷酸化位点,亲水区域大于疏水区域,属不稳定蛋白。结论克隆、表达了尘螨铁蛋白,经纯化后获得较高纯度的重组蛋白,并对其三级结构进行分析,为进一步研究尘螨过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。
关键词
粉尘螨
铁蛋白
蛋白表达
纯化
生物信息学分析
Keywords
Dermatophagoides farinae
ferritin
expression
purification
bioinformatics
分类号
R384.4 [医药卫生—医学寄生虫学]
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题名
作者
出处
发文年
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1
粉尘螨铁蛋白的克隆、表达及蛋白特征分析
林建立
詹政科
刘玉琳
范小琴
耿晓瑞
刘晓宇
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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