大豆耐盐相关基因的分离及其功能鉴定 被引量：12

1

作者 余玉雯 孙海丹 +4 位作者 郑易之 兰英 胥顺 唐玉林 麻晓亮 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 2004年第4期324-330,共7页

利用大肠杆菌功能表达体系,从大豆开花40d未成熟种子的cDNA表达文库中筛选获得了11个耐盐相关cDNA克隆.对其中3个克隆的插入片段进行测序.结果显示,其中的Gm1013为一尚未报道的新基因片段;GmRPS25 2编码的蛋白质序列与西红柿40S核糖体蛋... 利用大肠杆菌功能表达体系,从大豆开花40d未成熟种子的cDNA表达文库中筛选获得了11个耐盐相关cDNA克隆.对其中3个克隆的插入片段进行测序.结果显示,其中的Gm1013为一尚未报道的新基因片段;GmRPS25 2编码的蛋白质序列与西红柿40S核糖体蛋白S25有91%的同源性;GmAIP 2编码的蛋白质序列与大豆根铝诱导蛋白SALI3 2有97%的同源性.其中GmAIP 2可表达分子量为30 8kD的多肽.pET GmAIP 2转化后的大肠杆菌在含800mmol/LNaCl和700mmol/LKCl的液体培养基中生长状况明显好于对照菌,即前者表现出较短的生长迟滞期和较高的生长量. 展开更多

关键词 大肠杆菌 功能筛选 耐盐基因 大豆

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水稻高效再生体系的建立及其对大豆Em基因的转化 被引量：4

2

作者 刘国宝 刘昀 郑易之 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期686-691,共6页

以粳稻丰达1号成熟胚为外植体,建立了适合水稻转化的高效再生体系,通过农杆菌介导法将大豆Em基因转化水稻.结果表明:以NMB+500 mg·L-1脯氨酸+250 mg·L-1谷氨酰氨+300 mg·L-1水解酪蛋白+2 mg·L-12,4-D为作诱导培养... 以粳稻丰达1号成熟胚为外植体,建立了适合水稻转化的高效再生体系,通过农杆菌介导法将大豆Em基因转化水稻.结果表明:以NMB+500 mg·L-1脯氨酸+250 mg·L-1谷氨酰氨+300 mg·L-1水解酪蛋白+2 mg·L-12,4-D为作诱导培养基诱导愈伤组织,其诱导率为97%;愈伤组织分化率为65%;农杆菌介导法转化水稻愈伤组织,获得了26株再生植株;随机选取其中4株候选转基因水稻幼苗进行PCR筛选,初步证明大豆Em基因已整合到水稻基因组DNA中;RT-PCR检测结果表明,转入的外源大豆Em基因在转基因水稻中得以表达.本实验成功地建立了适合水稻转化的高效再生体系,为通过基因工程技术培育水稻新品种奠定了基础. 展开更多

关键词 大豆Em基因 转化体系 水稻 农杆菌介导 LEA蛋白

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丙酮丁醇梭菌代谢工程菌的构建及其发酵性能 被引量：2

3

作者 方雪 刘刚 +1 位作者 邢苗 王绍文 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期99-105,共7页

丙酮丁醇梭菌Clostridium acetobutylicum可以利用葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、纤维二糖等多种底物,发酵糖获得丙酮、丁醇、乙醇等产物,是一种优良的木质纤维素同步糖化发酵菌种。为获得具有更优良发酵性能的木质纤维素发酵菌株,使用代谢... 丙酮丁醇梭菌Clostridium acetobutylicum可以利用葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、纤维二糖等多种底物,发酵糖获得丙酮、丁醇、乙醇等产物,是一种优良的木质纤维素同步糖化发酵菌种。为获得具有更优良发酵性能的木质纤维素发酵菌株,使用代谢工程技术对丙酮丁醇梭菌进行改造。将乙酰乙酰CoA硫解酶基因(thl)的启动子和末端两个同源片段以及醛/醇脱氢酶基因(adhE)的开放阅读框连接到pUC18上,构建成整合型质粒pTAEE,电转化丙酮丁醇梭菌后在红霉素抗性平板筛选转化子。通过PCR扩增及产物序列分析表明,质粒pTAEE中的adhE基因以单交换的方式整合到转化子基因组中,增强adhE的表达。重组菌T4的乙醇得率为2.3%,比野生菌提高了15%,乙醇浓度为0.39 g/L,与野生菌相当;丁醇得率为41.6%,比野生菌提高了69%,丁醇浓度为6.9g/L,比野生菌提高了41%,获得了发酵性能更高的丙酮丁醇梭菌代谢工程菌株。 展开更多

关键词 丙酮丁醇梭菌 代谢工程 整合型质粒 丁醇

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细胞质处理小体(P-小体)与基因表达的调控

4

作者 莫蓓莘 符晓婕 +3 位作者 莫小为 刘丽 徐晓峰 岳路明 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第1期48-57,共10页

m RNA处理小体,又称P-小体(processing bodies,P-bodies),是细胞质中含有多种功能蛋白和RNA的聚集体.评述P-小体的形成和运动特点,以及其与小RNA、外切体相互作用,参与基因表达的调控.介绍了本实验室在P-小体植物细胞中的最新研究进展.... m RNA处理小体,又称P-小体(processing bodies,P-bodies),是细胞质中含有多种功能蛋白和RNA的聚集体.评述P-小体的形成和运动特点,以及其与小RNA、外切体相互作用,参与基因表达的调控.介绍了本实验室在P-小体植物细胞中的最新研究进展.指出P-小体是m RNA降解和储存的场所,在转录后水平参与基因表达的调控,P-小体在细胞中是动态变化的,P-小体中多样化的功能蛋白在P-小体的组装、功能行使中发挥重要作用.P-小体作为细胞质内m RNA的储存和降解结构在基因表达的转录后调控中起重要作用,其调控机制尚待进一步研究补充,P-小体与小RNA分子(micro RNA,mi RNA)调控的基因沉默之间也存在关联性. 展开更多

关键词 细胞生物学 P-小体 基因表达调控 MRNA降解 翻译抑制 小RNA分子

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植物凝集素SMLII基因启动子的克隆及序列分析

5

作者 刘晓 胡学强 +2 位作者 李庭海 黎科 张永夏 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第23期138-141,共4页

根据已克隆的丹参植物凝集素SMLII基因cDNA序列,利用染色体步移技术克隆出SMLII启动子区序列,并进行生物信息学预测分析该基因的功能,结果得到了该基因上游1 023 bp的启动子序列(GenBank Accession No:KF193867)。分析表明,在该序列中... 根据已克隆的丹参植物凝集素SMLII基因cDNA序列,利用染色体步移技术克隆出SMLII启动子区序列,并进行生物信息学预测分析该基因的功能,结果得到了该基因上游1 023 bp的启动子序列(GenBank Accession No:KF193867)。分析表明,在该序列中不但含有真核生物典型的核心启动子区TATA-box、CAAT-box,而且含有一些特有的上游启动子元件ABRE、ARE、ASF1MOTIFCAMV、HSE、IBOXCORE、WBOXATNPR1等重要的顺式调控元件及一些光反应相关元件。 展开更多

关键词 植物凝集素 SMLII基因 启动子 克隆 序列分析

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雨生红球藻β-胡萝卜素羟化酶基因的克隆与序列分析 被引量：3

6

作者 郑凯静 胡章立 +2 位作者 黎双飞 雷安平 王潮岗 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期666-670,共5页

利用RT-PCR技术,从雨生红球藻(Haematococcus pluvialis 34-1n)总RNA中扩增出β-胡萝卜素羟化酶基因cDNA序列,将此序列亚克隆于pMD 18-T simple Vector上,经过序列测定,表明该基因的开放阅读框为879bp,编码292个氨基酸,与雨生红球藻(H. ... 利用RT-PCR技术,从雨生红球藻(Haematococcus pluvialis 34-1n)总RNA中扩增出β-胡萝卜素羟化酶基因cDNA序列,将此序列亚克隆于pMD 18-T simple Vector上,经过序列测定,表明该基因的开放阅读框为879bp,编码292个氨基酸,与雨生红球藻(H. pluvialis Flotow NIES-144)β-胡萝卜素羟化酶基因氨基酸序列相比,其在编码氨基酸的第33位有一个氨基酸的缺失。在15、314、9和56位上的氨基酸也存在差异。多序列比对分析表明,雨生红球藻与莱茵衣藻的亲缘关系较近,与其他高等植物以及细菌的亲缘关系相对较远。 展开更多

关键词 雨生红球藻 Β-胡萝卜素羟化酶 虾青素

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阿尔茨海默病转基因小鼠肝内核受体和细胞色素氧化酶基因转录谱变化 被引量：1

7

作者 韩双雪 郑海洋 +3 位作者 刘洋 麦紫君 黄秀娴 何晓阳 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期33-39,共7页

目的探讨阿尔茨海默病(AD)病变与肝Ⅰ相药酶基因表达的相关性,为早期和长期药物干预AD病程提供实验参考。方法制备B6.129-PS1M146V/APPSwe/Tau P301L三重转基因AD模型小鼠(3×Tg AD小鼠)及同系非转基因正常小鼠(NTg小鼠)肝组织总RN... 目的探讨阿尔茨海默病(AD)病变与肝Ⅰ相药酶基因表达的相关性,为早期和长期药物干预AD病程提供实验参考。方法制备B6.129-PS1M146V/APPSwe/Tau P301L三重转基因AD模型小鼠(3×Tg AD小鼠)及同系非转基因正常小鼠(NTg小鼠)肝组织总RNA和总蛋白质样品,逆转录PCR/实时荧光定量PCR技术检测肝核因子4(HNF4)等7种核受体和细胞色素氧化酶P4501a2(Cyp1a2)等7种CYP基因mRNA相对表达量,比较基因转录谱差异;Western蛋白印迹法检测技术检测差异显著的目的基因蛋白质水平。结果与NTg小鼠相比,3×Tg AD小鼠HNF4、雌激素受体(ERα)及组成型雄甾烷受体均下调近66%(P<0.01),孕烷X受体和芳香烃受体分别上调1.84和1.64倍(P<0.05),糖皮质激素受体及受氧化应激激活的核因子E2相关因子未见显著变化;主要药物代谢酶Cyp2b10及Cyp2a5 mRNA分别降低至正常小鼠水平的3%(即下降97%,P<0.01)和30%(P<0.05),Cyp2e1、Cyp2j9、Cyp3a11基因的转录水平则分别上调了2.26倍、2.42倍和3.66倍(P<0.05);Cyp1a2和Cyp2d22基因转录在两种小鼠中无明显差异。Western蛋白印迹分析证实,3×Tg AD小鼠ERα和CYP2a5明显下降(P<0.05)而Cyp3a11表达则明显上升(P<0.05),蛋白质表达变化的趋势与其相应mRNA水平改变一致。结论 3×Tg AD小鼠肝内核受体基因及CYP酶基因转录谱发生显著改变,提示AD病变可能干扰机体肝代谢功能,对机体内源性及外源性化合物生物转运产生影响。 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 3×Tg AD模型小鼠 核受体 细胞色素氧化酶 基因转录

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雌激素样化合物对人细胞色素氧化酶2A6基因的转录调控

8

作者 黄春玲 邓寒 +2 位作者 柯雪娥 韩霜雪 何晓阳 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期88-96,共9页

目的建立尼古丁代谢酶CYP2A6报告基因高容量筛选系统,分析环境和天然雌激素样化合物对CYP2A6基因转录的影响。方法构建3种CYP2A6基因转录上游-2460^+1全长、增强子-启动子串联和3倍增强子-启动子串联的荧光素酶报告基因重组体pGL3-2A6 3... 目的建立尼古丁代谢酶CYP2A6报告基因高容量筛选系统,分析环境和天然雌激素样化合物对CYP2A6基因转录的影响。方法构建3种CYP2A6基因转录上游-2460^+1全长、增强子-启动子串联和3倍增强子-启动子串联的荧光素酶报告基因重组体pGL3-2A6 3UP,GL3-2A6 EP和pGL3-2A63EP,分别与雌激素受体α(ERα)及海肾荧光蛋白表达载体三重共转染人肝HepG2细胞。用双荧光素酶报告基因分析技术,选择确认对雌二醇诱导应答最强的CYP2A6报告基因系统;分别用氰戊菊酯、2,2',4,4'-四溴联苯醚、4-二羟基二苯基丙烷、全氟辛酸铵、淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素等7种拟雌激素化合物处理转染报告基因的HepG2细胞,同时设置雌二醇10 nmo·lL-1阳性和0.1%DMSO阴性对照,48 h后测定各组细胞相对荧光强度,分析评估拟雌激素物质对CYP2A6基因转录的诱导作用。结果 3种CYP2A6报告基因重组体中pGL3-2A6 3EP对雌二醇诱导应答最强,且呈显著量效依赖关系。7种拟雌激素化合物对CYP2A6报告基因均具显著诱导作用,其中,2,2',4,4'-四溴联苯醚1.0~100.0 nmol·L-1诱导倍变值为1.45±0.13~3.30±0.13(P<0.01),诱导效应最强。表现出相似的量效诱导关系,淫羊藿苷、大豆苷元和槲皮素10μmo·lL-1时的诱导倍变值为2.41~2.83(P<0.01)。结论建立灵敏可靠、重复性强的CYP2A6报告基因高容量筛选系统,证实多种拟雌激素物质通过激活ERα诱导CYP2A6报告基因转录。提示环境拟雌激素污染物和药材食材雌激素样活性物质可诱导个体尼古丁代谢酶基因表达,从而干扰个体尼古丁代谢清除活性及其对环境化合物致癌代谢活化水平。 展开更多

关键词 细胞色素P450 CYP2A6 转录水平调控 拟雌激素化合物

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大豆PM2蛋白及其结构域可提高烟草耐盐性 被引量：13

9

作者 刘昀 李冉辉 +1 位作者 郑易之 蔡文斌 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2007年第1期95-101,共7页

深圳市微生物基因工程重点实验室已利用大肠杆菌异源表达体系证明了大豆PM2蛋白(LEA3)的耐盐功能,并首次证实PM2蛋白序列中的22-氨基酸结构域(PM2B)为一主要耐盐结构域．为在高等植物中进一步验证PM2蛋白及22-氨基酸结构域的耐盐功能,... 深圳市微生物基因工程重点实验室已利用大肠杆菌异源表达体系证明了大豆PM2蛋白(LEA3)的耐盐功能,并首次证实PM2蛋白序列中的22-氨基酸结构域(PM2B)为一主要耐盐结构域．为在高等植物中进一步验证PM2蛋白及22-氨基酸结构域的耐盐功能,将大豆PM2及PM2B基因克隆至植物表达载体pBI121,并利用农杆菌侵染法转化烟草叶盘,通过PCR扩增法鉴定转基因植株．结果表明PM2及PM2B基因已整合至转基因烟草的基因组DNA中,转化率分别为44．4％和62．5％．与含1．5％(质量分数)NaCl的培养基比较,转基因烟草植株的生长状况和叶片的叶绿素含量,结果表明转PM2和PM2B基因的烟草耐盐性明显高于对照(转化pBI121载体)植株．这说明转PM2和PM2B基因可提高烟草的耐盐能力．可见,PM2蛋白及22-氨基酸结构域在原核和真核细胞中的耐盐保护作用可能是相似的． 展开更多

关键词 22-氨基酸结构域 PM2蛋白 LEA3蛋白 耐盐结构域 耐盐基因 大豆 转基因烟草 盐胁迫

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植物抗逆蛋白(LEA3)22-氨基酸耐盐结构域在酵母细胞中的鉴定 被引量：5

10

作者 刘昀 李冉辉 +2 位作者 汪为茂 梁翔宇 郑易之 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期74-79,共6页

大豆PM2蛋白属LEA3(late embryogenesis abundant3)蛋白。本文构建了编码PM2全长及含22-氨基酸结构域多肽(PM2、PM2A、PM2B和PM2C)的酵母表达载体。转化酵母得到四种重组菌。SDS-PAGE电泳和ESI-MS/MS或MALDI-TOF/TOF质谱结果表明,重组... 大豆PM2蛋白属LEA3(late embryogenesis abundant3)蛋白。本文构建了编码PM2全长及含22-氨基酸结构域多肽(PM2、PM2A、PM2B和PM2C)的酵母表达载体。转化酵母得到四种重组菌。SDS-PAGE电泳和ESI-MS/MS或MALDI-TOF/TOF质谱结果表明,重组菌可表达目标多肽。测定对照菌及重组菌在无胁迫、高盐(1.5mol.L-1NaCl)和高渗透(2mol.L-1山梨糖)下的生长曲线。结果表明,在高盐胁迫下,四种重组菌胁迫后的恢复明显好于对照菌。多肽对高盐耐受能力的大小为:PM2C>PM2B≈PM2A≈PM2。证明大豆PM2蛋白的表达可提高酵母耐盐性,且22-氨基酸基序为PM2蛋白的耐盐结构域。结合前文在大肠杆菌中的结果,为"LEA蛋白可以类似机制参与原核和真核生物耐盐保护作用"的假说提供实验支持。然而,在高山梨糖胁迫下,对照菌和酵母重组菌的生长情况无明显差异。 展开更多

关键词 LEA3蛋白 PM2蛋白 耐盐性 酵母 22-氨基酸基序

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丝状真菌中的RNA干扰及其应用技术 被引量：7

11

作者 王绍文 刘刚 +1 位作者 邢苗 田生礼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期77-83,共7页

RNA干扰是真核生物中相对保守的一种基因转录后表达调控机制,它通过双链RNA介导细胞内mRNA发生特异性降解或翻译抑制,从而调控靶基因的表达。对丝状真菌中RNA压制和减数分裂沉默等现象的研究表明,与动、植物一样,丝状真菌中也存在RNA干... RNA干扰是真核生物中相对保守的一种基因转录后表达调控机制,它通过双链RNA介导细胞内mRNA发生特异性降解或翻译抑制,从而调控靶基因的表达。对丝状真菌中RNA压制和减数分裂沉默等现象的研究表明,与动、植物一样,丝状真菌中也存在RNA干扰现象。通过对RNA压制缺失突变株和减数分裂沉默缺失突变株的一系列分子生物学研究,获得了与之密切相关的一系列蛋白,而这些蛋白在结构和功能上与动、植物RNA干扰途径的蛋白高度相似,这些结果证明了丝状真菌中的RNA存在干扰现象。RNA干扰技术作为丝状真菌分子生物学研究或遗传改造的工具具有特殊的意义,因为丝状真菌具有多核和发生非同源重组频率高的特点,难以用基因敲除手段进行改造。系统地介绍丝状真菌中的RNA干扰途径以及使用RNA干扰对真菌进行遗传改造的方法。 展开更多

关键词 RNA干扰 RNA压制 减数分裂沉默 SIRNA 丝状真菌

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线粒体动力学失衡和环境神经毒物对阿尔茨海默病病理进程影响的研究进展 被引量：15

12

作者 赵若聪 刘琼 何晓阳 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期101-105,共5页

线粒体动力学指细胞中的线粒体不断进行分裂融合的一种动态变化,是维持胞内物质与能量运输的重要保障,发动蛋白相关GTP酶1、Fis1、线粒体分裂因子、线粒体融合蛋白1/2和视神经萎缩蛋白1等蛋白为这一过程的直接参与者,它们受到磷酸化、S... 线粒体动力学指细胞中的线粒体不断进行分裂融合的一种动态变化,是维持胞内物质与能量运输的重要保障,发动蛋白相关GTP酶1、Fis1、线粒体分裂因子、线粒体融合蛋白1/2和视神经萎缩蛋白1等蛋白为这一过程的直接参与者,它们受到磷酸化、S-亚硝基化、泛素化、小泛素化和蛋白酶解等信号的精密调控。神经细胞的突触形态与功能维持极度依赖线粒体正常分布与功能,而体内外神经毒性物质可能通过干扰线粒体动力学平衡引发神经元能量代谢障碍,活性氧释放增多,并可加速细胞凋亡。越来越多研究表明,线粒体动力学失衡是阿尔兹海默综合征早期病理进程中的关键事件之一。 展开更多

关键词 线粒体动力学 阿尔茨海默病 环境神经毒物

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微甘菊次生代谢产物的免疫学活性研究 被引量：7

13

作者 吴玉荷 张仁利 胡章立 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2005年第3期313-315,共3页

为了探讨微甘菊次生代谢产物的免疫学活性,用微甘菊水溶性和脂溶性提取物喂食小鼠,用流式细胞仪测定小鼠T淋巴细胞亚群的变化规律,分析微甘菊提取物的免疫学活性。结果显示,微甘菊水溶性和脂溶性提取物均能刺激小鼠CD4+和CD8+细胞的产生... 为了探讨微甘菊次生代谢产物的免疫学活性,用微甘菊水溶性和脂溶性提取物喂食小鼠,用流式细胞仪测定小鼠T淋巴细胞亚群的变化规律,分析微甘菊提取物的免疫学活性。结果显示,微甘菊水溶性和脂溶性提取物均能刺激小鼠CD4+和CD8+细胞的产生,与对照相比,CD4+/CD8+比值均明显增加,水溶性提取物的效果更明显。微甘菊次生代谢产物中可能含有某些刺激动物免疫活性和提高抗癌能力的物质。 展开更多

关键词 次生代谢产物 微甘菊 活性研究 T淋巴细胞亚群 免疫学活性 水溶性提取物 流式细胞仪 变化规律 免疫活性 脂溶性 小鼠 动物

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大豆ASR蛋白富含组氨酸结构域在结合金属离子中的作用 被引量：3

14

作者 郑易之 范文静 +2 位作者 刘科 刘昀 刘国宝 《华南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2015年第5期91-98,共8页

利用固相亲和层析实验结果表明,Gm ASR蛋白及其含组氨酸结构域A1-A5短肽可与金属离子Cu^2＋和Cd2＋结合;采用Cu-抗坏血酸体系检测了Gm ASR蛋白及A1-A5清除羟基自由基的能力,证明Gm ASR蛋白及A1-A5短肽中组氨酸数目与清除羟基自由基能力... 利用固相亲和层析实验结果表明,Gm ASR蛋白及其含组氨酸结构域A1-A5短肽可与金属离子Cu^2＋和Cd2＋结合;采用Cu-抗坏血酸体系检测了Gm ASR蛋白及A1-A5清除羟基自由基的能力,证明Gm ASR蛋白及A1-A5短肽中组氨酸数目与清除羟基自由基能力呈正相关;Gm ASR蛋白及A1-A5可保护DNA分子免受Cu^2＋造成的氧化损伤.CD实验和SDS-PAGE实验结果发现,Gm ASR蛋白及A1-A5短肽与Cu^2＋结合后将引起可逆性聚集及沉淀.可见Gm ASR蛋白通过组氨酸结合过多的金属离子,维持细胞内离子平衡,是保护植物免受重金属毒害的重要机制之一。 展开更多

关键词 GM ASR蛋白 富含组氨酸结构域 结合金属离子 清除羟基自由基 保护DNA

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植物耐盐的分子机理研究进展 被引量：10

15

作者 刘昀 邓银霞 郑易之 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第12期6087-6089,6115,共4页

盐胁迫是造成作物减产的主要非生物胁迫之一。植物抵抗盐胁迫是一个复杂的过程。综述了近年来植物耐盐分子机理领域的进展,对渗透调节物质、离子平衡、解毒作用等与植物耐盐功能相关的机理进行了总结与分析。

关键词 盐胁迫 渗透调节物质 离子调节 解毒作用 胚胎晚期富集蛋白

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蛋白质胰蛋白酶水解过程双位点漏切肽段的质谱鉴定 被引量：4

16

作者 王勇 李水明 +1 位作者 何曼文 邹永东 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期29-34,共6页

为说明胰蛋白酶漏切位点数目设置对蛋白质搜库结果的影响,采用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白。在细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白的胰酶水解液中分别发现了2... 为说明胰蛋白酶漏切位点数目设置对蛋白质搜库结果的影响,采用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白。在细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白的胰酶水解液中分别发现了2个和4个双胰酶漏切位点肽段,确认了文献中报道的当赖氨酸和赖氨酸相邻或赖氨酸、精氨酸各自与天冬氨酸或者谷氨酸相邻时,会引起胰蛋白酶的漏切。此外,还发现组氨酸-赖氨酸-异亮氨酸/丙氨酸结构也有此现象。本研究中检测出漏切肽段并没有明显提高序列覆盖率,但显著增加了蛋白质鉴定结果的确定性。在实际样品分析中如将漏切数设置为1有可能产生肽段鉴定的假阴性。 展开更多

关键词 胰蛋白酶 基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱 细胞色素C 大豆脱落胁迫成熟蛋白

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恒定磁场对骨组织中细胞影响的研究 被引量：22

17

作者 张小云 张宇 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2006年第4期333-337,共5页

目的阐明恒定磁场对成骨细胞和破骨细胞的生长和功能的影响和对骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化的作用,从而在细胞水平较全面的解释磁场治疗骨质疏松的机理。方法利用体外原代培养的成骨细胞、破骨细胞和骨髓基质细胞,分别外加0.38T、0.... 目的阐明恒定磁场对成骨细胞和破骨细胞的生长和功能的影响和对骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化的作用,从而在细胞水平较全面的解释磁场治疗骨质疏松的机理。方法利用体外原代培养的成骨细胞、破骨细胞和骨髓基质细胞,分别外加0.38T、0.48T恒定磁场处理后,观察恒定磁场对这三种细胞生长、分化和功能的影响。结果恒定磁场处理可促进骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化,促进成骨细胞的增殖、分化及功能的表达,并且抑制破骨细胞的生长、分化和功能。结论恒定磁场促进骨组织的成骨作用,抑制骨分解,是其治疗骨质疏松良好效果的部分机制。 展开更多

关键词 恒定磁场 骨髓基质细胞 成骨细胞 破骨细胞 骨质疏松

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膨胀素联合复合酶处理对花粉破壁的影响 被引量：3

18

作者 王娟 余少文 陈林烁 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2007年第1期106-110,共5页

利用重组毕赤酵母菌株Swollenin的表达产物——膨胀素,联合果胶酶和纤维素酶组成的复合酶处理茶花粉,经镜检并计算其破壁率．结果表明,单独采用复合酶或重组菌株发酵液对花粉进行破壁处理,破壁率分别为85．7％和89．2％,两者联合处理使... 利用重组毕赤酵母菌株Swollenin的表达产物——膨胀素,联合果胶酶和纤维素酶组成的复合酶处理茶花粉,经镜检并计算其破壁率．结果表明,单独采用复合酶或重组菌株发酵液对花粉进行破壁处理,破壁率分别为85．7％和89．2％,两者联合处理使茶花粉外壁变软凹陷,萌发沟破裂,内容物呈团状释放出来,花粉的破壁效果明显,破壁率高达92．5％． 展开更多

关键词 花粉破壁 膨胀素 复合酶 破壁率

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基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱鉴定鲨鱼硒结合蛋白 被引量：2

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作者 王勇 李水明 何曼文 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第5期257-262,共6页

利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了原核表达的白鳍鲨硒结合蛋白。实验表明,硒结合蛋白肽段之一被错误指认为胰酶自水解峰和混合谱是影响其未进行串联质谱分析或不能被数据库搜索匹配的主要原因... 利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了原核表达的白鳍鲨硒结合蛋白。实验表明,硒结合蛋白肽段之一被错误指认为胰酶自水解峰和混合谱是影响其未进行串联质谱分析或不能被数据库搜索匹配的主要原因,同时还发现,虽然赖氨酸结尾肽段在MALDI源中信号强度普遍很低,但对它们进行串联质谱分析也可获得较好的谱图质量,部分数据可用于从头测序。考虑以上因素后,硒结合蛋白鉴定覆盖率由35%增至51%。 展开更多

关键词 硒结合蛋白 基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF TOF) 蛋白质鉴定 数据库 搜索 手工解析

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花生过敏原Ara h1的热变性及其与还原糖相互作用的研究 被引量：1

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作者 徐宏 沈亮亮 +8 位作者 胡章立 肖杰 肖华新 吴锦霞 李逸 魏波 倪卓 吴序栎 刘志刚 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第8期2128-2131,共4页

运用圆二色光谱(CD)和荧光光谱以及ELISA方法对花生蛋白Ara h1的热变性及其与还原糖的相互作用,以及过敏原性的变化进行了系统研究。实验表明,温度高于85℃时,Ara h1蛋白的二级结构才发生显著变化,表现为α螺旋结构的相对含量减少,β折... 运用圆二色光谱(CD)和荧光光谱以及ELISA方法对花生蛋白Ara h1的热变性及其与还原糖的相互作用,以及过敏原性的变化进行了系统研究。实验表明,温度高于85℃时,Ara h1蛋白的二级结构才发生显著变化,表现为α螺旋结构的相对含量减少,β折叠及无规卷曲等结构的相对含量增加,其过敏原性也相应降低;木糖、果糖能与Ara h1蛋白进行相互作用进而有效稳定其蛋白结构,并显著降低其过敏原性。研究结果对食物过敏原致敏机理的深入研究,以及花生食品的合理加工具有重要的理论指导意义。 展开更多

关键词 ARA h1蛋白 圆二色光谱 荧光 ELISA

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