头状茎点霉病菌的新寄主高粱及病菌的检疫鉴定 被引量：3

1

作者 王颖 程颖慧 +4 位作者 汪莹 高瑞芳 章桂明 史亚千 王红英 《广东农业科学》 CAS 2016年第2期98-101,F0003,共5页

从进境美国高粱种子中分离到1种真菌,通过用不同培养基培养,观察菌落特征及病原菌形态特征,进行形态学鉴定;并结合分子生物学方法选取了目前常用的能够用于对Phoma属不同种进行区分的4个基因片段ITS、TUB、ACT和TEF进行PCR扩增、产物序... 从进境美国高粱种子中分离到1种真菌,通过用不同培养基培养,观察菌落特征及病原菌形态特征,进行形态学鉴定;并结合分子生物学方法选取了目前常用的能够用于对Phoma属不同种进行区分的4个基因片段ITS、TUB、ACT和TEF进行PCR扩增、产物序列测定及比对分析,同时应用柯赫氏法则进行致病性测定,结果均表明该真菌为头状茎点霉病菌Phoma glomerata。此病原真菌在高粱上发现属于首次报道。该病菌是我国进境植物检疫性有害生物,寄主范围十分广泛,但在高粱中未发现有为害的报道,此次检出可判定高粱为该病菌的世界新寄主。 展开更多

关键词 高梁 Phomaglomerata 检疫鉴定 新寄主

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DNA条形码技术在深圳鱼肉制品鉴定中的应用 被引量：27

2

作者 王敏 刘荭 +4 位作者 黄海 赵晓萌 石琼 何舜平 孙颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第20期247-251,共5页

以线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因为目标基因,应用DNA条形码技术鉴别深圳批发市场和超市零售鱼肉制品的种类来源,判别其产品标签是否正确。本研究调查的77份鱼肉制品均能扩增出特异性条带,28份样品与产品标签标示不符,"错贴... 以线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因为目标基因,应用DNA条形码技术鉴别深圳批发市场和超市零售鱼肉制品的种类来源,判别其产品标签是否正确。本研究调查的77份鱼肉制品均能扩增出特异性条带,28份样品与产品标签标示不符,"错贴"率高达36.36%,其中所有标示"龙俐鱼"的商品都是低价的"巴丁鱼"(Pangasianodon hypophthalmus)。DNA条形码技术可用于鱼肉制品的来源物种鉴定。 展开更多

关键词 DNA条形码 COⅠ基因 物种鉴定 鱼肉制品

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我国水产苗种产地检疫存在问题及对策

3

作者 彭景书 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2012年第4期20-22,共3页

为规范水产苗种产地检疫,2011年3月17日,农业部关于印发《鱼类产地检疫规程（试行）》等3个规程（以下简称规程）的通知,我国水产苗种产地检疫进入了实施阶段,然而,已经落后陆生动物的产地检疫30多年。我国的苗种的产地检疫，主要依托... 为规范水产苗种产地检疫,2011年3月17日,农业部关于印发《鱼类产地检疫规程（试行）》等3个规程（以下简称规程）的通知,我国水产苗种产地检疫进入了实施阶段,然而,已经落后陆生动物的产地检疫30多年。我国的苗种的产地检疫，主要依托水产技术推广、水产病害防治中心（水生动物防疫站）和水产研究所等单位开展。对此，各地党政领导重视程度、机构设置与管理及养殖水平、防疫水平、地理位置、经济实力等方面存在较大差异。本文针对产地检疫中行政管理、监督执法和技术服务三位一体存在的问题，谈谈开展水产苗种产地检疫的对策。 展开更多

关键词 产地检疫 水产苗种 动物防疫站 检疫规程 水产技术推广 水产病害防治 行政管理 水产研究所

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传染性造血器官坏死病毒的新型环介导等温扩增(LAMP)荧光检测技术 被引量：7

4

作者 何俊强 史秀杰 +6 位作者 卢体康 贾鹏 郑晓聪 于力 兰文升 王津津 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2014年第6期68-73,共6页

本研究建立了一种检测传染性造血器官坏死病毒（IHNV）的新型荧光环介导等温扩增法,为实验室及现场检测IHNV提供特异性强、灵敏度高、快速、能实时观察扩增荧光信号的检测技术。针对IHNV全基因组序列设计了一组6条LAMP特异性引物,对4株... 本研究建立了一种检测传染性造血器官坏死病毒（IHNV）的新型荧光环介导等温扩增法,为实验室及现场检测IHNV提供特异性强、灵敏度高、快速、能实时观察扩增荧光信号的检测技术。针对IHNV全基因组序列设计了一组6条LAMP特异性引物,对4株不同来源的IHNV和8株不同的病毒进行特异性实验和灵敏度实验,结果表明该方法具有高度特异性,检测灵敏度可达3.64×10^-7μg/μL,比常规RT-PCR高1000倍,与荧光RT-PCR方法相当。通过环介导等温扩增技术（LAMP）和荧光检测技术相结合,使其检测时间能缩短至15～20分钟内完成检测,并可杜绝由于开盖加染料而导致的假阳性率偏高问题,在鱼病快速检测上具有重要意义。 展开更多

关键词 传染性造血器官坏死病毒(IHNV) 环介导等温扩增(LAMP) 荧光检测

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传染性造血器官坏死病毒液相芯片检测技术 被引量：1

5

作者 尹伟力 林超 +4 位作者 刘宁 贾鹏 岳志芹 孙涛 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2015年第4期63-67,71,共6页

用DNAStar7.0软件对GenBank中IHNV的N基因进行序列分析,设计IHNV特异性引物并标记生物素,将探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号,建立了传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的液相芯片快速... 用DNAStar7.0软件对GenBank中IHNV的N基因进行序列分析,设计IHNV特异性引物并标记生物素,将探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号,建立了传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的液相芯片快速检测技术。结果表明液相芯片检测体系对IHNV病毒核酸的最低检出量为100pg,且特异性高,与其他病毒无交叉反应。应用建立的液相芯片技术检测鱼类中IHNV,并与RT-PCR方法进行比较,检测结果基本一致,但该方法比RT-PCR法更灵敏。表明初步建立了检测IHNV的液相芯片技术,为进一步构建其他水生动物病原体快速高通量检测平台提供参考。 展开更多

关键词 传染性造血器官坏死病毒 液相芯片 检测

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非洲猪瘟病毒p54基因的原核表达及其抗体的间接ELISA检测方法的建立 被引量：22

6

作者 曹琛福 梁云浩 +6 位作者 陶虹 花群义 曾少灵 杨俊兴 陈兵 张桂红 吕建强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期6-10,共5页

将非洲猪瘟病毒P54基因克隆到原核表达载体pET-52b(+)3C/LIC中,转入BL21(DE3)菌中诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析的结果表明,表达蛋p54的分子质量约为28ku,具有很好的抗原性。纯化p54蛋白后,采用2.5μg/mL浓度作包... 将非洲猪瘟病毒P54基因克隆到原核表达载体pET-52b(+)3C/LIC中,转入BL21(DE3)菌中诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析的结果表明,表达蛋p54的分子质量约为28ku,具有很好的抗原性。纯化p54蛋白后,采用2.5μg/mL浓度作包被抗原,建立了检测非洲猪瘟p54抗体的间接ELISA方法,结果表明建立的间接ELISA方法特异性、敏感性都较好。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p54基因 原核表达 间接ELISA

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4种重要虫媒病的核酸液相芯片高通量检测方法的建立 被引量：8

7

作者 詹爱军 王新卫 +5 位作者 卢体康 陈书琨 孙洁 陈兵 曾少灵 花群义 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期240-245,共6页

为建立可检测鹿流行性出血热病毒（EHDV）、阿卡斑病毒（AKV）、蓝舌病病毒（BTV）和水泡性口炎病毒（VSV）的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中BTV的VP7基因、EHDV的VP7基因、AKV的N基因和VSV的NP基因序列进行序列分析,... 为建立可检测鹿流行性出血热病毒（EHDV）、阿卡斑病毒（AKV）、蓝舌病病毒（BTV）和水泡性口炎病毒（VSV）的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中BTV的VP7基因、EHDV的VP7基因、AKV的N基因和VSV的NP基因序列进行序列分析,设计针对这些基因的特异性探针并标记生物素,分别与不同编号的荧光编码微球偶联后再与这些病毒相应基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪（Liquichip 200）检测荧光信号建立了以上4种虫媒病的快速液相芯片检测方法。检测结果显示,该方法具有较好的特异性,偶联特异性探针的微球只与相应的病毒基因的PCR产物反应,而不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度达到50~100个TCID50。本研究建立了可以同时检测鹿流行性出血热病毒、阿卡斑病毒、蓝舌病病毒和水泡性口炎病毒的快速高通量液相芯片技术,为其他类似病毒的快速高通量检测提供了借鉴和经验。 展开更多

关键词 鹿流行性出血热病毒 阿卡斑病毒 蓝舌病病毒 水泡性口炎病毒 液相芯片检测技术

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非洲猪瘟病毒VP73蛋白在昆虫细胞中的表达与间接ELISA方法的建立 被引量：17

8

作者 曾少灵 廖立珊 +11 位作者 唐金明 杨俊兴 阮周曦 张彩虹 曹琛福 吕建强 秦智锋 林庆燕 孙洁 叶弈优 谢晓露 花群义 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第1期1-6,共6页

为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合... 为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)间接酶联免疫吸附试验(iELISA),利用杆状病毒表达载体pFastBac HTA在昆虫细胞Sf9中表达非洲猪瘟病毒的VP73蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测显示重组蛋白大小约65ku,能与ASFV标准阳性血清发生特异性结合。以此重组蛋白作为检测抗原包被酶标板,初步建立了检测ASFV血清抗体的iELISA方法。表达的重组蛋白具有良好的特异性,为制备ASFV免疫血清学诊断检测试剂和疫苗提供了材料。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 VP73蛋白 间接ELISA

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非洲马瘟间接ELISA方法的建立及初步应用 被引量：10

9

作者 曹琛福 叶奕优 +4 位作者 宗卉 张彩虹 吕建强 杨俊兴 花群义 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期6-9,共4页

为建立检测非洲马瘟间接酶联免疫吸附试验方法,利用重组杆状病毒感染昆虫细胞表达出具有良好抗原性的VP7蛋白,将感染VP7重组杆状病毒的昆虫细胞裂解液作为包被抗原,通过优化包被抗原浓度、二抗稀释度等,建立了检测非洲马瘟的间接ELISA方... 为建立检测非洲马瘟间接酶联免疫吸附试验方法,利用重组杆状病毒感染昆虫细胞表达出具有良好抗原性的VP7蛋白,将感染VP7重组杆状病毒的昆虫细胞裂解液作为包被抗原,通过优化包被抗原浓度、二抗稀释度等,建立了检测非洲马瘟的间接ELISA方法,并进行了初步运用。结果表明,直接利用真核细胞表达VP7蛋白的昆虫细胞裂解液作为包被液可成功建立检测非洲马瘟的间接ELISA方法。 展开更多

关键词 非洲马瘟 间接酶联免疫吸附试验 VP7蛋白 真核表达

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微滴式数字PCR定量检测转基因玉米品系VCO-01981-5 被引量：12

10

作者 张佳玲 潘广 +5 位作者 章桂明 程颖慧 向才玉 陈枝楠 谢忠稳 凌杏园 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第12期246-252,共7页

建立基于QX100微滴式数字聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)平台的我国未批准转基因玉米品系VCO-01981-5的二重微滴式数字PCR定量检测方法。该方法选择基因组中单拷贝的玉米内源基因hmg和VCO-01981-5品系边界序列为定量靶... 建立基于QX100微滴式数字聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)平台的我国未批准转基因玉米品系VCO-01981-5的二重微滴式数字PCR定量检测方法。该方法选择基因组中单拷贝的玉米内源基因hmg和VCO-01981-5品系边界序列为定量靶序列,分别设计不同的PCR扩增引物和TaqMan探针,并对两种探针用不同的荧光进行标记,然后将上述探针和引物置于同一个PCR反应体系中以同时定量两个靶标序列。特异性实验结果显示该法只有VCO-01981-5品系的两个靶序列才都有扩增信号。灵敏度、线性和准确性实验结果显示在定量结果相对标准偏差不大于25%时,最低可稳定定量5个拷贝的VCO-01981-5品系特异性序列分子和4个拷贝的内源基因hmg分子;而在高达50 ng模板DNA以下范围内,PCR反应模板量与测定样品拷贝数之间呈高度正相关,相关系数达0.99以上;平均误差小于10%。结果表明本研究建立的该玉米品系定量方法特异性强,稳定性好,精确性、准确性以及灵敏度高,定量范围广,可用于进、出口农产品和食品中该转基因玉米品系成分的定量检测。此外,该法还可为其他转基因玉米品系及其他转基因作物品系建立类似定量检测方法提供参考。 展开更多

关键词 转基因玉米 品系VCO-01981-5 微滴式数字PCR 定量检测

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传播动物虫媒病的蚊种分类及其在我国的分布 被引量：23

11

作者 刘建利 花群俊 +3 位作者 杨云庆 杨俊兴 祝贺 唐金明 《中国动物检疫》 CAS 2015年第3期48-51,共4页

蚊类是传播多种动物虫媒病毒的重要生物媒介。随着全球一体化和气候变暧,蚊类分布范围扩大,传播动物虫媒病毒的能力增加。动物虫媒病严重影响家畜养殖业的发展,造成巨大的经济损失。本文介绍了中国蚊科的区系分布和种类,分析了传播动物... 蚊类是传播多种动物虫媒病毒的重要生物媒介。随着全球一体化和气候变暧,蚊类分布范围扩大,传播动物虫媒病毒的能力增加。动物虫媒病严重影响家畜养殖业的发展,造成巨大的经济损失。本文介绍了中国蚊科的区系分布和种类,分析了传播动物虫媒病病毒的蚊种类及其我国的分布情况。为进一步研究和防治重要动物虫媒病提供科学依据。 展开更多

关键词 动物虫媒病毒 蚊 分类 种类分布 公共卫生

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鲤疱疹病毒2型微滴式数字PCR检测方法的建立及比较分析 被引量：11

12

作者 赵欣 贾鹏 +8 位作者 刘莹 王津津 史秀杰 潘广 郑晓聪 于力 何俊强 刘荭 吴志新 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2017年第4期126-133,共8页

本研究建立了定量检测鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做... 本研究建立了定量检测鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果表明,与qPCR相比,ddPCR具有相同的特异性,其灵敏性比qPCR低20倍。在定量CyHV-2 DNA时,ddPCR(R^2=0.994)和qPCR(R^2=0.994)均表现出良好的线性关系,且2种检测方法间的定量值呈正相关(R^2=0.989)。在定量检测相同稀释度的CyHV-2 DNA时,qPCR的定量值始终比ddPCR高10倍。ddPCR的组内和组间重复变异系数(CV)分别为0.59%–11.26%和6.55%–23.21%,而qPCR为16.57%–27.56%和22.31%–56.73%,说明ddPCR具有更好的稳定性。在临床样品定量检测时,ddPCR的检出率稍高于qPCR。本研究建立的ddPCR能够准确定量检测CyHV-2,将为CyHV-2相关研究提供有益参考。 展开更多

关键词 微滴式数字PCR 鲤疱疹病毒2型 实时荧光定量PCR 定量检测

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传染性造血器官坏死病毒糖蛋白抗血清的制备及应用 被引量：6

13

作者 朱旭 兰文升 +3 位作者 刘荭 高隆英 杜鹃 陈孝煊 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2012年第6期112-117,共6页

应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从传染性造血器官坏死病毒(Infectious hemato-poietic necrosis virus,IHNV)感染的细胞悬液克隆病毒的糖蛋白基因,将其亚克隆至原核表达载体pCWori,转化到大肠杆菌DH5α,通过发酵大肠杆菌制备病毒糖... 应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从传染性造血器官坏死病毒(Infectious hemato-poietic necrosis virus,IHNV)感染的细胞悬液克隆病毒的糖蛋白基因,将其亚克隆至原核表达载体pCWori,转化到大肠杆菌DH5α,通过发酵大肠杆菌制备病毒糖蛋白。经SDS-PAGE分析,诱导表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,使用Ni-NTA亲和层析柱在变性条件下进行纯化并透析复性,最终得到了较高纯度的可溶性糖蛋白,分子量约为57kDa。Western-blot分析结果显示,所表达的蛋白能够被IHNV病毒制备的兔抗IHNV血清识别。用复性后的蛋白免疫小鼠制备抗血清,ELISA显示抗体效价可达1∶64000。经制备的抗血清可以作为一抗建立ELISA检测方法,用于检测细胞悬液的病毒粒子,将抗血清稀释到1∶16000仍能与IHNV全病毒发生反应。本研究利用重组的IHNV糖蛋白成功制备了高效价的抗血清,并能够与IHNV全病毒发生特异性结合,为IHNV免疫学检测方法建立奠定了基础。 展开更多

关键词 传染性造血器官坏死症病毒 糖蛋白 原核表达 抗血清

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鹿流行性出血病病毒VP7基因的克隆及原核表达 被引量：5

14

作者 杨俊兴 花群义 +5 位作者 陈焕春 陈兵 吕建强 曹琛福 阮周曦 张彩红 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期5-8,共4页

根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体... 根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体转入大肠埃希菌(E.coliLMG194),用L-阿拉伯糖诱导表达。SDS-PAGE和Western blot试验结果表明,EHDV VP7基因在LMG194中得到了表达,其表达产物可以与EHDV阳性血清特异性反应,说明该融和蛋白具有免疫学活性。 展开更多

关键词 鹿流行性出血病病毒(EHDV) VP7基因 基因克隆 表达

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口蹄疫病毒抗原胶体金试纸条的研究 被引量：6

15

作者 吕建强 杨俊兴 +5 位作者 花群义 曹琛福 张彩虹 陶虹 刘建利 阮周曦 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期14-18,共5页

利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫... 利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫快速检测试纸条。该试纸条检测O、A、Asia 1型3种血清型灭活口蹄疫病毒均为阳性,检测水疱性口炎病毒、猪水疱病病毒、蓝舌病病毒、猪蓝耳病病毒4种灭活抗原及小反刍兽疫病毒疫苗株均为阴性,试验结果与口蹄疫实时荧光定量RT-PCR方法的完全一致,表明其具有良好的特异性。敏感性试验结果是,试纸条的检测极限为1∶160稀释的样品,其敏感性相当于实时荧光定量RT-PCR方法的1/64。由于试纸条具有操作方便、检测快速等优点,因此该试纸条可以用于大量临床样品的快速检测和现场检测。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 单克隆抗体 胶体金试纸条

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牛病毒性腹泻病毒双单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用 被引量：6

16

作者 杨俊兴 曹琛福 +7 位作者 曾少灵 卢体康 孙洁 张彩虹 唐金明 陶虹 吕建强 花群义 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第5期11-16,共6页

为了建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原快速检测ELISA方法,用于BVDV抗原的快速检测。用纯化的BVDV作为抗原,经动物免疫、细胞融合、间接ELISA筛选和亚克隆,得到了3株抗BVDV的单克隆抗体(2A6、2F4和5C9)。选用单克隆抗体2A6和5C9包被ELISA... 为了建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原快速检测ELISA方法,用于BVDV抗原的快速检测。用纯化的BVDV作为抗原,经动物免疫、细胞融合、间接ELISA筛选和亚克隆,得到了3株抗BVDV的单克隆抗体(2A6、2F4和5C9)。选用单克隆抗体2A6和5C9包被ELISA板,用HRP标记的单克隆抗体2F4作为夹心抗体,建立了检测BVDV的双单克隆抗体夹心ELISA方法。通过对BVDV阳性样品、其他病毒阳性样品和阴性对照样品及系列稀释的阳性样品检测,表明该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。用ELISA检测326份临床样品,结果表明该方法与RT-PCR和商品化ELISA试剂盒检测结果符合率分别为98.8%和99.0%。该方法可以用于BVDV抗原快速检测和对大量样本的筛选。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 酶联免疫吸附试验 单克隆抗体

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鲤科疱疹病毒2型Taqman实时荧光PCR方法的建立 被引量：7

17

作者 于力 王津津 +4 位作者 史秀杰 郑晓聪 贾鹏 兰文升 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2015年第10期80-84,共5页

本研究针对鲤科疱疹病毒2型(CyHV-2)的主要衣壳蛋白基因,设计了特异性引物和Taqman探针,建立了实时荧光PCR方法。其检测下限为83拷贝,标准曲线R2>0.998,且经比对,灵敏度与现行方法相当。选取了健康异育银鲫、金鱼、鲤鱼以及常见4种水... 本研究针对鲤科疱疹病毒2型(CyHV-2)的主要衣壳蛋白基因,设计了特异性引物和Taqman探针,建立了实时荧光PCR方法。其检测下限为83拷贝,标准曲线R2>0.998,且经比对,灵敏度与现行方法相当。选取了健康异育银鲫、金鱼、鲤鱼以及常见4种水生DNA病毒以及7种水生环境细菌进行特异性实验,结果均无交叉反应。重复性实验显示,2份独立的15次重复结果变异系数均小于2%,说明本方法重复性好。本方法能作为目前CyHV-2疫病检测方法的有效补充,对该病的防控具有重要的意义。 展开更多

关键词 CyHV-2 实时荧光PCR TAQMAN 异育银鲫 金鱼

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蛋白A法压电免疫传感器检测H9亚型禽流感病毒的研究 被引量：4

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作者 詹爱军 王新卫 +5 位作者 金鑫 陈书琨 卢体康 花群义 秦智锋 秦爱建 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1266-1270,共5页

为建立可以检测H9N2亚型流感病毒的蛋白A法免疫传感器,将石英晶片谐振的高灵敏度与免疫反应的特异性相结合,用蛋白A(SPA)在镀金膜的石英晶体电极偶联抗H9亚型流感病毒的单抗构建传感器探头形成免疫传感器。检测结果表明,该方法具有较好... 为建立可以检测H9N2亚型流感病毒的蛋白A法免疫传感器,将石英晶片谐振的高灵敏度与免疫反应的特异性相结合,用蛋白A(SPA)在镀金膜的石英晶体电极偶联抗H9亚型流感病毒的单抗构建传感器探头形成免疫传感器。检测结果表明,该方法具有较好的特异性,不与H5亚型禽流感病毒和NDV反应;检测灵敏度达到20个EID50;组成的检测器对相应的流感病毒响应良好,该法与鸡胚病毒分离法检出流感病毒的符合率达到91%。本文结果为检测流感病毒免疫传感器的进一步深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 蛋白A压电免疫传感器 H9亚型禽流感病毒 检测

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水疱性口炎病毒单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定 被引量：5

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作者 杨俊兴 花群义 +6 位作者 卢体康 吕建强 曹琛福 阮周曦 张彩虹 孙洁 周晓黎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第7期6-10,共5页

用纯化的水疱性口炎毒(VSV)免疫接种Balb/c小鼠,取免疫接种的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌抗VSV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(5B1、8H1、9B9和11E11)。4株单克隆抗体均... 用纯化的水疱性口炎毒(VSV)免疫接种Balb/c小鼠,取免疫接种的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆,获得4株稳定分泌抗VSV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(5B1、8H1、9B9和11E11)。4株单克隆抗体均能与VSV反应,且不与其他病毒及BHK细胞反应,表明4株单克隆抗体特异性良好。4株单克隆抗体腹水ELISA效价分别为1∶512 000、1∶256000、1∶256 000、1∶1 024 000。本试验为研究VSV生物学特性和建立VSV免疫学检测方法奠定了基础。 展开更多

关键词 水疱性口炎病毒 单克隆抗体 生物学特性

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草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)特性和对鲤春病毒的敏感性 被引量：3

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作者 王津津 刘莹 +7 位作者 于力 贾鹏 陈兵 史秀杰 郑晓聪 兰文升 何俊强 刘荭 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2016年第6期56-61,共6页

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)是中国科学院水生生物研究所在20世纪70年代开展草鱼出血病研究时建立的一株细胞系,迄今已传至300多代,在中国鱼类病毒学研究领域发挥了重要作用。本研究采用形态学观察、细胞生长曲线测... 草鱼(Ctenopharyngodon idellus)性腺细胞系(GCO)是中国科学院水生生物研究所在20世纪70年代开展草鱼出血病研究时建立的一株细胞系,迄今已传至300多代,在中国鱼类病毒学研究领域发挥了重要作用。本研究采用形态学观察、细胞生长曲线测定、细胞周期测定、细胞核型分析、细胞凋亡检测、电镜观察等方法,对GCO的生长特性及鲤春病毒血症病毒(SVCV)在该细胞中的增殖特性等进行了研究。结果显示,GCO细胞的最适生长温度为25℃,在M199和MEM等细胞培养液中均能较好地生长,培养液中最适的胎牛血清浓度为10%。测定了GCO细胞系对SVCV病毒的敏感性,发现与鲤(Cyprinus carpio)上皮瘤细胞系(EPC)、肥头鲤(Pimephales promelas)细胞系(FHM)、大鳞大麻哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha)胚胎细胞系(CHSE-214)等世界动物卫生组织(OIE)推荐和各检测实验室常用的鱼类细胞系相比,GCO细胞系对SVCV表现出非常高的敏感性。生长曲线、电镜观察和凋亡实验显示,SVCV能引起GCO细胞系出现明显而稳定的细胞病变,引起GCO细胞系出现凋亡,并在细胞质中大量增殖。结果表明,GCO细胞系适用于SVCV病毒的分离、检测以及病毒致病性的有关研究。GCO细胞的适宜生长温度为15–28℃,这一特点将使它可以广泛地用于多种水生动物病毒的分离。 展开更多

关键词 草鱼性腺细胞系 生物学特性 易感性 鲤春病毒血症病毒

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