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Cry2A毒素抗独特型单链抗体库的构建 被引量：1
1
作者 刘媛 刘敏 +8 位作者 张霄 徐重新 林曼曼 胡晓丹 仲建锋 谢雅晶 罗楚平 张存政 刘贤金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期1174-1182,共9页
为了降低苏云金杆菌Cry2A毒素的免疫检测成本,开发廉价、无毒试剂盒,采用整体抗体免疫和噬菌体展示技术的路线,设计和构建了Cry2A抗独特型单链抗体库。以Protein A纯化的Cry2A兔多克隆抗体为免疫原,对雌性Balb/c系小鼠进行了免疫。在优... 为了降低苏云金杆菌Cry2A毒素的免疫检测成本,开发廉价、无毒试剂盒,采用整体抗体免疫和噬菌体展示技术的路线,设计和构建了Cry2A抗独特型单链抗体库。以Protein A纯化的Cry2A兔多克隆抗体为免疫原,对雌性Balb/c系小鼠进行了免疫。在优化的包被原浓度下,用ELISA法测定小鼠血清效价及抗独特型抗体组分。选取效价最高的小鼠,取脾脏提取总RNA,RT-PCR法合成c DNA第一链。设计简并引物,利用PCR法扩增小鼠VH、Vκ基因,再用SOE-PCR法进行单链抗体基因的拼接。SOE-PCR产物和p IT2载体经双酶切后连接,电转入感受态E.Coli. TG1完成建库,并用多克隆噬菌体ELISA对抗体库与免疫原的结合能力进行了鉴定。结果表明,免疫鼠血清的效价在1∶1.6×105到1∶6.4×105倍之间。免疫鼠血清可对Cry2A与其兔多克隆抗体的结合最高可产生17. 6%的抑制,证明Ab2β和Ab2γ型抗独特型抗体的存在。最终构建了库容为1.2×107的Cry2A抗独特型单链抗体库,该抗体库与免疫原的结合信号/背景比值为6. 04。 展开更多
关键词 Cry2A毒素 抗独特型抗体 单链抗体 噬菌体展示
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