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大肠杆菌FliC蛋白D0/D1结构域与Pal蛋白融合蛋白的生物信息学分析及原核表达
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作者 陈洪 车业贵 +6 位作者 陈长春 丁小丽 邱树磊 陆辉 王永娟 温洪伟 周子祥 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4894-4903,共10页
【目的】构建并表达大肠杆菌FliC蛋白D0/D1结构域与Pal蛋白的融合蛋白,为开发新型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)疫苗提供研究基础。【方法】分析GenBank数据库中大肠杆菌O1血清型菌株的FliC及Pal蛋白氨基... 【目的】构建并表达大肠杆菌FliC蛋白D0/D1结构域与Pal蛋白的融合蛋白,为开发新型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)疫苗提供研究基础。【方法】分析GenBank数据库中大肠杆菌O1血清型菌株的FliC及Pal蛋白氨基酸序列特征,选择FliC蛋白的D0/D1结构域(N-端5-140位氨基酸和C-端499-583位氨基酸)及Pal蛋白主要结构(21-173位氨基酸)构建“三明治型”融合蛋白。对融合蛋白进行理化性质、二级结构、三级结构、抗原性、致敏性及线性和不连续表位预测。通过分子对接和免疫模拟分别评估融合蛋白与免疫受体的结合能力及免疫效果。合成融合蛋白碱基序列并使用pET-28a(+)进行载体构建,采用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行融合蛋白表达,利用镍-琼脂糖凝胶6FF纯化融合蛋白并进行复性,通过Western blotting验证融合蛋白的反应原性。【结果】融合蛋白分子质量为42.72 ku,是亲水蛋白;α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占48.79%、14.25%、6.76%和30.19%,其中α-螺旋主要处于FliC蛋白D0/D1结构域;三级结构拉氏图显示,优势区域中含有的残基数占96.9%。该融合蛋白具有良好的抗原性,无致敏性,含有8个线性表位和5个不连续表位。该融合蛋白与Toll样受体2、4、5均能进行分子对接,且免疫模拟结果显示,该蛋白能引起良好的体液免疫和细胞免疫。经PCR鉴定和测序确定嵌合基因FliCN-Pal-FliCC阳性单克隆并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,成功表达纯化出融合蛋白FliCN-Pal-FliCC。融合蛋白能与大肠杆菌O1血清型阳性小鼠的血清发生反应。【结论】本研究成功构建并表达了以APEC O1血清型的FliC和Pal蛋白为基础的“三明治”型融合蛋白FliCN-Pal-FliCC,为研发APEC疫苗候选抗原提供研究基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌 FliC蛋白 结构域 Pal蛋白 融合蛋白 生物信息学分析
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基于减法蛋白组学和反向疫苗学方法设计禽致病性大肠杆菌O1和O78血清型多表位疫苗
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作者 陈洪 吴双 +5 位作者 车业贵 邱树磊 周子祥 王奕 王永娟 袁橙 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5425-5438,共14页
【目的】设计针对禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)O1和O78血清型的多表位疫苗(multi-epitope vaccine,MEV),为APEC新型疫苗的研制奠定基础。【方法】本研究结合减法蛋白组学和反向疫苗学进行研究。通过CD-HIT... 【目的】设计针对禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)O1和O78血清型的多表位疫苗(multi-epitope vaccine,MEV),为APEC新型疫苗的研制奠定基础。【方法】本研究结合减法蛋白组学和反向疫苗学进行研究。通过CD-HIT、BLASTP等工具去除APEC O1、O78蛋白序列中的冗余和不相似蛋白。将APEC O1、O78中相似蛋白与鸡参考蛋白质组进行BLASTP比对,去除同源蛋白,保留非同源蛋白。采用DEG、VFDB等数据库筛选具有毒力的必需蛋白。利用在线工具PSORTb和VaxiJen v 2.0筛选候选蛋白。使用在线工具NetCTL 1.2和NetMHCⅡpan 4.0预测T淋巴细胞主要组织相容性复合体Ⅰ和Ⅱ类分子结合表位,用在线工具IEDB预测B淋巴细胞表位。经在线工具VaxiJen v 2.0评估抗原性后,将合格的表位通过柔性linker串联成多表位疫苗。对设计的多表位疫苗进行抗原性、理化性质、N-糖基化位点、二级结构和三级结构预测。通过分子对接和免疫模拟分别评估多表位疫苗与免疫受体的结合能力及免疫效果,优化密码子便于克隆表达。【结果】经筛选后,选择12个CLT表位、12个HTL表位和12个B淋巴细胞表位构建多表位疫苗MEV-O1O78。多表位疫苗MEV-O1O78分子质量为69.81 ku,为稳定亲水蛋白,具有良好的抗原性,存在7个潜在的N-糖基化位点。二级结构中,α-螺旋、延长链和无规则卷曲分别占7.93%、10.81%和81.27%。三级结构拉氏图显示,优势区域中含有的残基数占95.6%。免疫模拟结果显示,多表位疫苗MEV-O1O78能引起良好的体液免疫,并提高部分细胞因子的表达,经密码子优化确保设计的多表位疫苗MEV-O1O78在大肠杆菌K12表达系统中高效、稳定地表达。【结论】本研究成功设计了含36个优势表位的APEC O1和O78多表位疫苗MEV-O1O78,可为研发禽致病性大肠杆菌病的多表位疫苗提供理论依据和数据支持。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌(APEC) 血清型 多表位疫苗
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一例法斗犬蠕形螨继发脓皮症的诊治
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作者 陈洪 魏冬霞 +2 位作者 车业贵 周子祥 肖忠宝 《今日畜牧兽医》 2023年第6期83-85,共3页
犬蠕形螨病是由蠕形螨寄生于犬的毛囊和皮脂腺内引起的疾病,多发于幼年且皮肤卫生条件较差的犬。患犬感染后主要表现为口、鼻梁、峡部、耳根、腋下乃至全身皮肤发红出现丘疹,进而形成水泡、伴有瘙痒,患犬常搔抓啃咬摩擦患部造成严重脱... 犬蠕形螨病是由蠕形螨寄生于犬的毛囊和皮脂腺内引起的疾病,多发于幼年且皮肤卫生条件较差的犬。患犬感染后主要表现为口、鼻梁、峡部、耳根、腋下乃至全身皮肤发红出现丘疹,进而形成水泡、伴有瘙痒,患犬常搔抓啃咬摩擦患部造成严重脱毛。该病难以彻底治愈,严重危害犬的健康。本医院收治一例由主人涂抹糖皮质激素类药物导致病情加重前来就诊的患犬,通过临床、血常规、伍德式灯、皮肤刮片检查确诊感染蠕形螨继发脓皮症,经注射伊维菌素、口服阿莫西林克拉维酸钾、涂抹蚍虫林莫昔克丁治疗后患犬痊愈,2个月后回访该犬未复发。本文将详细阐述犬蠕形螨继发脓皮症的诊断和治疗过程,希望能对该病的诊治提供参考。 展开更多
关键词 犬 蠕形螨 脓皮症 诊治
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1例猫子宫蓄脓的诊断与治疗 被引量：1
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作者 李文慧 周子祥 陈洪 《养殖与饲料》 2023年第10期96-99,共4页
子宫蓄脓是猫临床常见的产科疾病之一,以子宫内壁出现急性或慢性化脓性炎症为主要特征,常有开放型子宫蓄脓与闭合型子宫蓄脓2种类型,猫一旦患病,轻则失去生育能力,重则危及生命。2023年4月,笔者所在宠物医院接诊1例腹部膨大、阴道流出... 子宫蓄脓是猫临床常见的产科疾病之一,以子宫内壁出现急性或慢性化脓性炎症为主要特征,常有开放型子宫蓄脓与闭合型子宫蓄脓2种类型,猫一旦患病,轻则失去生育能力,重则危及生命。2023年4月,笔者所在宠物医院接诊1例腹部膨大、阴道流出红色脓样分泌物的患猫,经B超检查确定该患猫未怀孕,随后对其进行血常规、猫血清淀粉样蛋白(SAA)、生化等检查,确诊为开放型子宫蓄脓,并对该患猫进行子宫切除手术,1周后复诊结果良好,患猫康复。 展开更多
关键词 猫 子宫蓄脓 诊断 治疗
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腹腔注射在病危猪治疗中的应用 被引量：1
5
作者 刘中元 苍桂生 《畜牧兽医科技信息》 2019年第11期124-125,共2页
对腹腔以及胃肠道部位的疾病常采用腹腔注射的方式治疗,这种治疗方式与常规治疗相比具有简便、补液迅速、注射效率快及适用范围广等优点,对病猪采用腹腔注射治疗,副作用更小,在治疗病危猪时疗效更好。本文主要介绍了腹腔注射对病危猪的... 对腹腔以及胃肠道部位的疾病常采用腹腔注射的方式治疗,这种治疗方式与常规治疗相比具有简便、补液迅速、注射效率快及适用范围广等优点,对病猪采用腹腔注射治疗,副作用更小,在治疗病危猪时疗效更好。本文主要介绍了腹腔注射对病危猪的应用价值,以供相关人员参考。 展开更多
关键词 腹腔注射 病危猪 应用价值
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