16S rRNA测序鉴定一株感染实验小鼠的表皮葡萄球菌 被引量：3

1

作者 林映莹 蒙秋平 +3 位作者 谭光宏 黄用豪 赵焕阁 黄风迎 《海南医学院学报》 CAS 2012年第8期1013-1015,1018,共4页

目的:应用16SrRNA测序及序列分析方法来鉴定一株来自实验室饲养小鼠的细菌。方法:对可疑小鼠的血液进行细菌培养,革兰氏染色观察细菌菌株的表型,PCR扩增菌株16SrRNA并进行测序,将测序序列与GenBank数据库的菌株序列进行进化树和基因距... 目的:应用16SrRNA测序及序列分析方法来鉴定一株来自实验室饲养小鼠的细菌。方法:对可疑小鼠的血液进行细菌培养,革兰氏染色观察细菌菌株的表型,PCR扩增菌株16SrRNA并进行测序,将测序序列与GenBank数据库的菌株序列进行进化树和基因距离分析。结果:本研究鉴定的菌株为革兰氏阳性表皮葡萄球菌。结论:16SrRNA基因测序鉴定细菌的方法适用于非专业研究人员;实验动物也可能含有病原体,进行动物实验时要有防护措施。 展开更多

关键词 表皮葡萄球菌 16S RRNA 基因序列分析

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牙龈卟啉菌菌毛基因在转基因番茄果实中的特异表达及小鼠免疫实验

2

作者 戴海燕 王华 +2 位作者 文少敏 解娜 邓芳成 《热带生物学报》 2011年第3期204-208,共5页

将编码牙龈卟啉菌菌毛蛋白(Fimbrillin,FimA)(第266～337Aa)与霍乱毒素B亚基(CTB)基因用农杆菌侵染法转入番茄植株,并利用番茄果实特异启动子E8使其在果实中实现特异表达,然后用特异表达的转基因番茄果实对实验小鼠进行口服免疫实验,研... 将编码牙龈卟啉菌菌毛蛋白(Fimbrillin,FimA)(第266～337Aa)与霍乱毒素B亚基(CTB)基因用农杆菌侵染法转入番茄植株,并利用番茄果实特异启动子E8使其在果实中实现特异表达,然后用特异表达的转基因番茄果实对实验小鼠进行口服免疫实验,研究转基因番茄果实的免疫原性。实验结果表明:获得的11株转化植株中,共有9株重组了CTB-FimA基因的植株在番茄果实中实现了特异表达;口服转基因番茄果实的免疫小鼠的血清中检测到抗FimA抗体;获得了以CTB为佐剂的在番茄果实中特异表达牙龈卟啉菌菌毛基因的植物口服疫苗候选植株。 展开更多

关键词 番茄 牙周炎 FimA CTB E8启动子

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海南小果酸浆HPLC指纹图谱的研究 被引量：1

3

作者 周松林 丁洁 +2 位作者 赵唤阁 黄用豪 林映莹 《安徽农业科学》 CAS 2015年第6期90-92,198,共4页

[目的]建立海口地区不同季节小果酸浆指纹图谱检测方法,为小果酸浆的质量控制提供依据。[方法]采用La Chrom C18(4.6mm×150 mm)色谱柱,乙腈-0.05%磷酸溶液(15∶85)为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长230 nm,进样量10μl,柱温30℃... [目的]建立海口地区不同季节小果酸浆指纹图谱检测方法,为小果酸浆的质量控制提供依据。[方法]采用La Chrom C18(4.6mm×150 mm)色谱柱,乙腈-0.05%磷酸溶液(15∶85)为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长230 nm,进样量10μl,柱温30℃,分析时长35 min;采用高分辨LC-MS/MS技术进行色谱峰指认。[结果]采用高分辨LC-MS/MS方法对20个共有峰中的14个色谱峰进行了定性鉴别。不同季节的小果酸浆成分有很大不同,可根据所需成分而在其含量最高时间采集。[结论]该方法精密度高,稳定性和重复性良好,为小果酸浆的全面质量评价奠定了基础。 展开更多

关键词 小果酸浆 HPLC 指纹图谱 LC-MS/MS 质量评价

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弓形虫ROP5基因真核表达载体的构建及其免疫保护性的研究 被引量：10

4

作者 赵焕阁 王华 +5 位作者 黄用豪 周松林 郭峻莉 黄凤迎 林映莹 谭光宏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期947-950,共4页

目的构建弓形虫pcDNA-ROP5真核表达载体,观察弓形虫ROP5基因在小鼠体内诱导的免疫反应。方法克隆弓形虫ROP5基因,将其插入真核表达载体pcDNA-3.1中构建重组质粒pcDNA-ROP5,脂质体法转染Hela细胞体外表达蛋白,蛋白质印迹(Western blotti... 目的构建弓形虫pcDNA-ROP5真核表达载体,观察弓形虫ROP5基因在小鼠体内诱导的免疫反应。方法克隆弓形虫ROP5基因,将其插入真核表达载体pcDNA-3.1中构建重组质粒pcDNA-ROP5,脂质体法转染Hela细胞体外表达蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定。将45只小鼠随机均分为3组,分别为PBS组、空质粒组、pcDNA3.1-ROP5组,每2w肌注免疫(100μg/只)1次,共3次,于免疫前及每次免疫前1d和末次免疫后2w收集小鼠血清,用间接ELISA法检测血清抗弓形虫的IgG。各组小鼠腹腔注射RH株弓形虫速殖子1 000个/每鼠,观察小鼠受攻击感染后的存活时间。结果真核表达载体构建成功,Western blotting分析结果显示,重组质粒pcDNA3.1-ROP5能在Hela细胞表达,蛋白相对分子质量为61kDa。pcDNA3.1-ROP5末次免疫后血清中IgG水平显著高于其他组,pcDNA-ROP5免疫的小鼠与对照组相比,实验组小鼠产生了明显的体液免疫应答。攻击感染试验中,实验组的小鼠比对照组的存活时间有明显延长。结论构建的真核表达重组质粒pcDNA-ROP5对抗击弓形虫攻击感染能够激发一定的免疫保护性。 展开更多

关键词 弓形虫 ROP5 真核表达质粒 免疫保护

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2型糖尿病大血管并发症中医证候演变规律探讨 被引量：13

5

作者 谢毅强 王华 +3 位作者 吴月平 尹德辉 王转锁 黄用豪 《海南医学院学报》 CAS 2011年第1期61-63,共3页

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)大血管病变患者中医证候演变规律。方法:60例T2DM大血管病变患者按中医证候分为阴虚燥热型、气阴两虚型、阴阳两虚型3型,每型各20例,另设正常对照组20例,统计T2DM大血管并发症主要中医症状及与性别、体重、病... 目的:探讨2型糖尿病(T2DM)大血管病变患者中医证候演变规律。方法:60例T2DM大血管病变患者按中医证候分为阴虚燥热型、气阴两虚型、阴阳两虚型3型,每型各20例,另设正常对照组20例,统计T2DM大血管并发症主要中医症状及与性别、体重、病程等临床参数的关系。结果:中医症状出现频率由高到低依次为腰酸膝软(70.0%)、肢体困重(65.0%)、口渴引饮(56.7%)、头晕目眩(55.0%)、心悸怔忡(53.3%)、倦怠乏力(53.3%)。T2DM大血管并发症各型患者体重较正常对照组均有上升,其中阴阳两虚型患者体重增加最为明显(P<0.01),病程变化也符合此趋势,但无统计学差异(P>0.05)。结论:糖尿病大血管并发症中医病机错综复杂,虚实夹杂。在正虚方面,从阴虚燥热、气阴两虚发展为阴阳两虚,邪实方面,瘀血贯穿于疾病的始终。 展开更多

关键词 2型糖尿病 大血管病变 中医证候 规律

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FITC标记葡聚糖粘附定量测定肿瘤组织血管密度 被引量：3

6

作者 谭光宏 黄风迎 +3 位作者 王华 黄用豪 林映莹 黎岳南 《海南医学院学报》 CAS 2007年第5期409-413,共5页

目的:测定肿瘤组织异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)粘附水平是否可作为肿瘤血管密度的量化指标。方法:用endolgin疫苗免疫小鼠后,在同一只小鼠上同时建立小鼠Meth A纤维肉瘤模型和藻酸盐包被肿瘤细胞试验模型,2周后将FITC-dex... 目的:测定肿瘤组织异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)粘附水平是否可作为肿瘤血管密度的量化指标。方法:用endolgin疫苗免疫小鼠后,在同一只小鼠上同时建立小鼠Meth A纤维肉瘤模型和藻酸盐包被肿瘤细胞试验模型,2周后将FITC-dextran注射入小鼠体内,然后手术完整摘取肿瘤组织和藻酸盐颗粒,取部分肿瘤组织进行免疫组化检测血管密度的同时,将其他组织和藻酸盐颗粒匀桨并离心,取上清检测荧光强度,分析二者之间是否存在直线相关关系。结果:免疫组化和肉眼观察显示2种测定方法均有明显的血管生成效应,用FITC-dextran粘附测定肿瘤组织血管相对密度和藻酸盐包被试验均能较好地量化测定抗血管生成效果,直线相关分析表示二者的疫苗免疫实验组FITC-dextran的测定值之间呈明显的正性相关关系(r=0.962,P<0.01)。结论:和藻酸盐包被试验相比,FITC-dextran测定肿瘤组织血管相对密度是一种简单有效的量化测定肿瘤组织血管生成水平的方法。 展开更多

关键词 肿瘤 血管 动物模型 藻酸盐包被肿瘤细胞试验

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猪endoglin重组蛋白疫苗和低剂量顺铂联合治疗肿瘤研究 被引量：3

7

作者 谭光宏 魏于全 +1 位作者 田聆 黄风迎 《海南医学院学报》 CAS 2006年第1期13-19,共7页

目的:观察重组猪endoglin胞外段蛋白疫苗和化疗药物顺铂联合治疗是否具有更好的抗肿瘤作用。方法:在LL/2肺癌和CT26结肠腺癌二个肿瘤模型中观察重组猪endoglin蛋白疫苗和小剂量顺铂联合治疗(Cis-pEDG)、顺铂(Cis)和疫苗(pEDG)单独治疗... 目的:观察重组猪endoglin胞外段蛋白疫苗和化疗药物顺铂联合治疗是否具有更好的抗肿瘤作用。方法:在LL/2肺癌和CT26结肠腺癌二个肿瘤模型中观察重组猪endoglin蛋白疫苗和小剂量顺铂联合治疗(Cis-pEDG)、顺铂(Cis)和疫苗(pEDG)单独治疗及非治疗(生理盐水,NS)组荷瘤小鼠不同时间段的肿瘤体积和生存时间,抽血检测肝、肾功能,用免疫组化方法(抗CD31)观察肿瘤组织血管生长并计算肿瘤微血管密度,Westernblot方法检测各组荷瘤小鼠血清中是否含有抗自身endoglin的抗体,ELISPOT方法检测荷瘤小鼠脾脏中分泌抗自身endoglin抗体的B淋巴细胞,TUNEL检测肿瘤细胞凋亡。结果:和Cis、pEDG和NS相比,Cis-pEDG联合治疗组荷瘤小鼠的肿瘤体积明显减少,生存时间明显延长,肿瘤微血管密度明显减少,肿瘤细胞凋亡明显增加,3个指标计算的协同指数均大于1。Cis-pEDG和pEDG治疗组小鼠血清中均含有抗小鼠endoglin的抗体,两组荷瘤小鼠的脾脏中含有的分泌抗小鼠endoglin的B淋巴细胞数量明显高于Cis和NS组,而Cis和NS组之间的B淋巴细胞数量无显著性差异;各组荷瘤小鼠外周血白细胞及肝、肾功能没有明显异常。结论:猪endoglin蛋白疫苗和小剂量顺铂联合治疗没有明显的不良反应,但具有协同抗肿瘤作用,小剂量顺铂治疗不导致免疫抑制,二者联合是一种行之有效的肿瘤治疗新策略。 展开更多

关键词 ENDOGLIN 重组蛋白 顺铂 疫苗 肿瘤血管生成

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颅内间叶性软骨肉瘤病理分析 被引量：3

8

作者 张弦 解娜 +2 位作者 郭峻莉 罗志飞 郑少江 《海南医学院学报》 CAS 2011年第12期1609-1611,共3页

目的:探讨颅内间叶性软骨肉瘤的临床病理特征、免疫表型特点及鉴别诊断。方法:对1例颅内间叶性软骨肉瘤的临床资料、影像学、组织学形态和免疫表型进行分析,并复习相关文献。结果:间叶性软骨肉瘤镜下肿物由小圆形肿瘤细胞和高分化软骨... 目的:探讨颅内间叶性软骨肉瘤的临床病理特征、免疫表型特点及鉴别诊断。方法:对1例颅内间叶性软骨肉瘤的临床资料、影像学、组织学形态和免疫表型进行分析,并复习相关文献。结果:间叶性软骨肉瘤镜下肿物由小圆形肿瘤细胞和高分化软骨病变构成,并可见血管外皮瘤样病变区。免疫组化显示小圆形瘤细胞CD99阳性,S-100阴性;软骨区S-100阳性,CD99阴性。结论:颅内间叶性软骨肉瘤非常罕见,其发生多与脑膜和颅骨有关,其确诊需临床、影像、免疫表型和组织形态学四结合。 展开更多

关键词 间叶性软骨肉瘤 免疫表型 病理诊断

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粉尘螨变应原第6组分全长cDNA克隆及生物信息学分析 被引量：2

9

作者 崔玉宝 周鹰 +2 位作者 彭江龙 孙炜 王颖 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期641-646,共6页

目的:获得粉尘螨变应原第6组分编码基因并了解其分子特征。方法:根据GeneBank已公布的Derf6核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增获得其编码基因,插入pMD19-T载体进行序列测定和生物信息学分析。结果:获得的Der f6 cD-NA全长为840 bp,与参考... 目的:获得粉尘螨变应原第6组分编码基因并了解其分子特征。方法:根据GeneBank已公布的Derf6核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增获得其编码基因,插入pMD19-T载体进行序列测定和生物信息学分析。结果:获得的Der f6 cD-NA全长为840 bp,与参考序列同源性达96.8%,含1个完整的开放读码框。推测编码蛋白由279个氨基酸组成,信号肽序列位于1～19 aa,亲水性指数为-0.139,跨膜区域位于1～19 aa,二级结构由α-螺旋(7.17%)、延伸主链(36.56%)和无规卷曲(56.27%)组成;亚细胞定位于细胞外,N-端第6位和第11位的亮氨酸有明显的序列核输出信号;可能为糜蛋白酶,具有cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、N端酰基化位点等。结论:获得了Derf6基因全长,其编码的细胞外疏水性蛋白可能具有糜蛋白酶活性。 展开更多

关键词 粉尘螨 变应原 克隆 生物信息学

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弓形虫ROP5基因与基因佐剂IL-12对小鼠免疫保护性 被引量：2

10

作者 赵焕阁 林映莹 +5 位作者 黄用豪 黄风迎 周松林 刘中娟 谭光宏 韦祎 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期486-489,共4页

目的观察弓形虫ROP5基因疫苗和基因免疫佐剂IL-12共免疫对昆明小鼠所诱导的免疫保护性。方法大量制备重组质粒pcROP5和pcmIL-12,以100μg的剂量同时免疫昆明小鼠,PBS组和pcDNA3.1空质粒组作为对照。用ELISA法测定免疫鼠血清中特异性抗体... 目的观察弓形虫ROP5基因疫苗和基因免疫佐剂IL-12共免疫对昆明小鼠所诱导的免疫保护性。方法大量制备重组质粒pcROP5和pcmIL-12,以100μg的剂量同时免疫昆明小鼠,PBS组和pcDNA3.1空质粒组作为对照。用ELISA法测定免疫鼠血清中特异性抗体IgG、IgG亚型的表达水平及细胞因子IFN-γ、IL-4的含量,MTT法测定淋巴细胞转化率,观察小鼠受攻击感染弓形虫后的存活时间。结果质粒pcROP5和pcmIL-12共免疫小鼠3次后,与pcROP5质粒单独免疫组和对照组相比,IL-12基因佐剂的共免疫提高了免疫鼠血清中特异性抗体IgG及IgG亚型IgG2a的表达水平,提高了细胞因子IFN-γ的含量,增加了淋巴细胞的转化率,但IgG1和IL-4的表达水平变化不大;攻击感染后,质粒pcROP5和pc-mIL-12共免疫组小鼠存活时间显著延长。结论弓形虫ROP5基因与基因佐剂pcmIL-12共免疫能增强对小鼠的免疫保护性。 展开更多

关键词 DNA疫苗 弓形虫抗原ROP5 基因佐剂pcmIL-12 免疫应答

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鸡成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体胞外段原核表达载体的构建及表达鉴定 被引量：2

11

作者 郑少江 黄凤迎 +2 位作者 郑少萍 王伟 吴人亮 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期433-435,439,共4页

目的构建重组原核表达载体以获得鸡成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体(FGFR-1)胞外段活性蛋白,为进一步研制FGFR-1蛋白质肿瘤疫苗打下基础。方法利用RT-PCR技术,从鸡胚肝中扩增出鸡的FGFR-1胞外段基因的cD-NA,用内切酶消化后插入原核表达质粒p... 目的构建重组原核表达载体以获得鸡成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体(FGFR-1)胞外段活性蛋白,为进一步研制FGFR-1蛋白质肿瘤疫苗打下基础。方法利用RT-PCR技术,从鸡胚肝中扩增出鸡的FGFR-1胞外段基因的cD-NA,用内切酶消化后插入原核表达质粒pQE30中。经过琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定后,体外转化大肠埃希菌,用RT-PCR和免疫印迹方法鉴定是否能够正确表达,同时利用Ni-NTA琼脂柱层析法纯化复性重组蛋白。结果琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定证实PCR扩增的cDNA及构建的重组原核表达质粒pQE30-FGFR-1正确,并在大肠埃希菌中正确表达。经纯化后,进行SDS-PAGE电泳显示得到1条分子量约40 ku的蛋白质条带。结论成功构建鸡FGFR-1胞外段原核表达载体并获得重组活性蛋白。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体 肿瘤血管生成 原核表达 基因重组

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羊膜及羊膜来源细胞应用于组织再生工程的研究进展 被引量：1

12

作者 王华 谭光宏 +4 位作者 黄风迎 黄用豪 周松林 赵焕阁 林映莹 《海南医学院学报》 CAS 2009年第9期1176-1178,共3页

关键词 羊膜 羊膜来源细胞 分化潜能 组织再生 综述文献

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小鼠VCAM-1真核表达质粒的构建及表达 被引量：1

13

作者 谭光宏 宿静梅 +3 位作者 黄风迎 王华 黄用豪 林映莹 《海南医学院学报》 CAS 2007年第5期405-408,共4页

目的:构建小鼠血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)基因真核表达质粒,了解该质粒是否能在真核细胞中有效表达。方法:以小鼠胚肝组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表... 目的:构建小鼠血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)基因真核表达质粒,了解该质粒是否能在真核细胞中有效表达。方法:以小鼠胚肝组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染CHO细胞,用Western Blot鉴定该质粒是否能够在真核细胞中表达相应的目的蛋白质。结果:成功扩增了小鼠VCAM-1全长基因cDNA,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,West-ern Blot方法证实该质粒能在CHO真核细胞中正确表达目的蛋白。结论:成功构建了小鼠VCAM-1基因的真核表达质粒载体,为进一步研究VCAM-1的新功能和免疫治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 血管细胞粘附分子-1 真核表达 质粒 基因工程

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糖尿病大血管并发症的细胞治疗研究进展 被引量：3

14

作者 王华 谢毅强 《海南医学院学报》 CAS 2011年第3期426-428,432,共4页

糖尿病是由多种病因引起的以高血糖为主要特征的代谢紊乱性疾病。而心、脑及外周动脉等大血管发生病变是糖尿病患者致残和早亡的主要原因。因此，针对大血管病变寻求有效的治疗策略已经成为糖尿病研究的重要课题之g 。近年来，细胞移植... 糖尿病是由多种病因引起的以高血糖为主要特征的代谢紊乱性疾病。而心、脑及外周动脉等大血管发生病变是糖尿病患者致残和早亡的主要原因。因此，针对大血管病变寻求有效的治疗策略已经成为糖尿病研究的重要课题之g 。近年来，细胞移植研究已被广泛应用于糖尿病大血管并发症的治疗，本文就以干细胞和内皮前体细胞为基础的细胞移植治疗糖尿病大血管并发症的研究进展综述如下。 展开更多

关键词 糖尿病大血管并发症 细胞移植 干细胞 内皮前体细胞

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注射用头孢呋辛钠的安全性试验研究 被引量：1

15

作者 曾祥周 谭光宏 +2 位作者 邝少轶 黄风迎 云天佑 《海南医学院学报》 CAS 2009年第4期308-310,共3页

目的:通过对注射用头孢呋辛钠的安全性试验研究,评价其用药的安全性。方法:分别进行豚鼠全身过敏性试验,家兔血管、肌肉刺激性试验及溶血性试验,观察注射用头孢呋辛钠是否可引起过敏和对血管、肌肉的刺激性,是否具有溶血作用。结果:注... 目的:通过对注射用头孢呋辛钠的安全性试验研究,评价其用药的安全性。方法:分别进行豚鼠全身过敏性试验,家兔血管、肌肉刺激性试验及溶血性试验,观察注射用头孢呋辛钠是否可引起过敏和对血管、肌肉的刺激性,是否具有溶血作用。结果:注射用头孢呋辛钠给药后未出现过敏反应,静脉注射、肌内注射均未见明显刺激性,亦未见溶血及凝集反应。结论:安全性试验研究表明,注射用头孢呋辛钠用药安全可靠。 展开更多

关键词 头孢呋辛钠 安全性 豚鼠

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毒毛旋花子阿洛糖苷诱导胃腺癌细胞SGC-7901凋亡作用及机制研究 被引量：1

16

作者 张雪娇 梅文莉 +4 位作者 蔡彩虹 董文化 姜北 黄风迎 戴好富 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期1743-1747,共5页

目的探讨毒毛旋花子阿洛糖苷诱导胃腺癌细胞SGC-7901凋亡作用及其机制。方法将人胃腺癌细胞SGC-7901分为对照组、0.125μg/ml组、0.250μg/ml组、0.500μg/ml组、1.000μg/ml组,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测毒毛旋花子阿洛... 目的探讨毒毛旋花子阿洛糖苷诱导胃腺癌细胞SGC-7901凋亡作用及其机制。方法将人胃腺癌细胞SGC-7901分为对照组、0.125μg/ml组、0.250μg/ml组、0.500μg/ml组、1.000μg/ml组,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测毒毛旋花子阿洛糖苷对胃腺癌细胞SGC-7901的生长抑制作用,Hoechst染色和Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡情况,JC-1法检测线粒体膜电位变化,Western blotting法检测线粒体途径相关蛋白细胞色素C、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果 MTT结果显示,24 h和48 h时不同组胃腺癌细胞SGC-7901吸光度(A)、生长抑制率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);组间两两比较胃腺癌细胞SGC-7901 A值依次降低、生长抑制率依次升高(P<0.05)。荧光显微镜下观察发现,对照组细胞核显示为蓝荧光且较均匀,0.500μg/ml组处理12 h后细胞核呈紧密较亮荧光体,颜色较白。不同组胃腺癌细胞SGC-7901总相对死亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);组间两两比较胃腺癌细胞SGC-7901总相对死亡率依次升高(P<0.05)。JC-1染色结果显示,毒毛旋花子阿洛糖苷处理胃腺癌细胞SGC-7901 12 h后,0.125μg/ml组、0.250μg/ml组、0.500μg/ml组显示绿色荧光,随毒毛旋花子阿洛糖苷浓度的增加绿色荧光增强。Western blotting法显示,随着细胞凋亡的发生,细胞色素C从线粒体中释放到细胞质中,同时,Caspase-3和Caspase-9也被激活并发生剪切活化,活化片段表达增加。结论毒毛旋花子阿洛糖苷通过线粒体凋亡途径诱导体外培养的人胃腺癌细胞SGC-7901凋亡。 展开更多

关键词 胃肿瘤 毒毛旋花子甙类 线粒体 细胞凋亡

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肾透明细胞癌中FGFR1的表达及其临床意义 被引量：1

17

作者 郭峻莉 罗志飞 郑少江 《海南医学院学报》 CAS 2010年第9期1111-1113,共3页

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor1,FGFR1)在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)中的表达及其临床意义。方法:采用SP免疫组化方法检测45例RCCC组织中FGFR1的表达。同时,用原位杂交... 目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor1,FGFR1)在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)中的表达及其临床意义。方法:采用SP免疫组化方法检测45例RCCC组织中FGFR1的表达。同时,用原位杂交方法检测20例RCCC组织中FGFR1mR-NA的表达。结果:在RCCC中FGFR1蛋白及FGFR1mRNA表达的阳性率分别为68.9%(31/45)、80.0%(16/20),明显高于癌旁正常肾组织(P<0.01)。FGFR1蛋白表达与FGFR1mRNA的表达呈一致性(P<0.05)。FGFR1蛋白表达与病理组织学分级和临床TNM分期相关(P<0.05)。结论:FG-FR1与肾透明细胞癌的发生发展和转移密切相关,对判断预后具有一定临床意义。 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子受体1 肾透明细胞癌 免疫组织化学 原位杂交

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小鼠真核表达质粒pcDNA3.1(+)-FGFR1的构建及表达 被引量：1

18

作者 郭峻莉 翁志宏 郑少江 《海南医学院学报》 CAS 2010年第10期1245-1247,1252,共4页

目的:通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-FGFR1,并检测其在CHO细胞中的表达。方法:通过PCR扩增FGFR1的全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,经限制内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,... 目的:通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-FGFR1,并检测其在CHO细胞中的表达。方法:通过PCR扩增FGFR1的全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,经限制内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体包裹转染CHO细胞,Western blot检测FGFR1目的蛋白的表达。结果:经酶切和测序鉴定证实本实验构建的重组表达质粒正确,该质粒在体外转染CHO细胞后可表达FGFR1目的蛋白。结论:成功构建的pcDNA3.1(+)-FGFR1重组质粒能在体外表达FGFR1目的蛋白。 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子1型受体(FGFR1) 真核表达质粒 基因工程

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钩枝藤提取物的生物活性 被引量：1

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作者 蔡彩虹 梅文莉 +3 位作者 王辉 董文化 谭光宏 戴好富 《热带生物学报》 2015年第2期163-167,共5页

通过观察钩枝藤乙醇提取物治疗感染了伯氏疟原虫小鼠的感染率和存活率判断钩枝藤乙醇提取物的抗疟活性;采用MTT法测定钩枝藤乙醇提取物体外细胞毒活性;采用滤纸片琼脂扩散法测定钩枝藤乙醇提取物抗菌活性;采用Ellman比色法测试钩枝藤乙... 通过观察钩枝藤乙醇提取物治疗感染了伯氏疟原虫小鼠的感染率和存活率判断钩枝藤乙醇提取物的抗疟活性;采用MTT法测定钩枝藤乙醇提取物体外细胞毒活性;采用滤纸片琼脂扩散法测定钩枝藤乙醇提取物抗菌活性;采用Ellman比色法测试钩枝藤乙醇提取物抗乙酰胆碱酯酶活性。结果表明,该提取物能较好地抑制伯氏疟原虫的生长,改善小鼠的存活状况;对人白血病细胞K562、胃癌细胞SGC-7721、肝癌细胞BEL-7402均具有较好的抑制作用;对人体病原菌和农业病原菌表现出较强的抑菌活性;对乙酰胆碱酯酶表现出一定的抑制作用,但不如阳性对照他克林。 展开更多

关键词 钩枝藤 抗疟 细胞毒活性 抗菌 抗乙酰胆碱酯酶

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2种开发重组疫苗的原核抗原展示系统

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作者 陈凡 谭光宏 +3 位作者 黄风迎 周松林 王华 黄用豪 《海南医学院学报》 CAS 2008年第3期299-302,共4页

关键词 疫苗 合成 抗原 综述文献

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