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黑眶蟾蜍皮肤丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆与序列分析
被引量：
1
1
作者
韦双双
关怀
+2 位作者
郑继平
周海龙
张英霞
《安徽农业科学》
CAS
2012年第7期4017-4019,共3页
[目的]克隆黑眶蟾蜍皮肤丝氨酸蛋白酶抑制剂基因。[方法]从海南海口产黑眶蟾蜍皮肤中抽提总RNA,经mRNA纯化后构建黑眶蟾蜍皮肤cDNA文库。根据已报道的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)序列,设计寡核苷酸引物用于筛选、克隆、测序。[结果]从...
[目的]克隆黑眶蟾蜍皮肤丝氨酸蛋白酶抑制剂基因。[方法]从海南海口产黑眶蟾蜍皮肤中抽提总RNA,经mRNA纯化后构建黑眶蟾蜍皮肤cDNA文库。根据已报道的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)序列,设计寡核苷酸引物用于筛选、克隆、测序。[结果]从所构建的cDNA文库中得到1个Serpin基因,命名为BmSP。对cDNA序列推导出的氨基酸序列分析表明,该BmSP蛋白属于Serpin家族中SERPIN B亚家族,与鼠鳞状细胞癌抗原2(SCCA2)同源。该蛋白C末端含有一个RCL环(Reactive center loop regions)和一段高度保守的五肽。[结论]与SERPIN B亚家族中其他类型蛋白氨基酸序列比较结果表明,黑眶蟾蜍BmSP与SERPIN B亚家族中其他类型成员氨基酸序列相似度较高,具有高度的保守性,可能在其防御天敌捕食的过程中发挥重要作用。
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关键词
胰蛋白酶抑制剂
黑眶蟾蜍
CDNA文库
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职称材料
木薯MeLHCB4基因的克隆及表达分析
被引量：
2
2
作者
丁凯旋
郑婉茹
+4 位作者
李琳琳
潘月云
张银东
耿梦婷
陈银华
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021年第10期2813-2818,共6页
本研究采用RT-PCR技术克隆了木薯叶绿素a/b结合蛋白基因MeLHCB4编码区序列。通过生物信息学对其基因结构、基因编码蛋白的理化性质等进行分析,并对不同物种的LHCB4氨基酸序列进行比对和构建进化树。结果表明,木薯MeLHCB4基因的CDs序列全...
本研究采用RT-PCR技术克隆了木薯叶绿素a/b结合蛋白基因MeLHCB4编码区序列。通过生物信息学对其基因结构、基因编码蛋白的理化性质等进行分析,并对不同物种的LHCB4氨基酸序列进行比对和构建进化树。结果表明,木薯MeLHCB4基因的CDs序列全长858 bp,编码285个氨基酸,蛋白理论相对分子质量约为30.9 kDa,理论等电点为5.47,该蛋白属于稳定的亲水性蛋白,预测该蛋白可能定位于细胞核或细胞质中。实时荧光定量PCR检测该基因的表达模式发现,MeLHCB4基因主要在木薯叶片和茎中表达,受到茉莉酸甲酯(JA)、水杨酸(SA)和乙烯前体(ACC)等激素的诱导表达,推测其可能参与了JA、SA、ACC信号途径。细菌性枯萎病病原菌侵染木薯叶片12 h后,MeLHCB4的表达量显著提高,表明MeLHCB4参与了木薯对病原菌的响应过程。
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关键词
木薯
叶绿素结合蛋白
MeLHCB4
基因克隆
基因表达
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职称材料
木薯MeCML24与MeSAUR1互作调控MeAGPS1a表达的功能验证
3
作者
郑婉茹
丁凯旋
+6 位作者
陆小花
李琳琳
王超群
陈银华
姚远
陈新
耿梦婷
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2023年第1期1-8,共8页
木薯是华南地区重要的经济作物,其块根富含淀粉。解析木薯块根淀粉合成调控机理将有助于木薯高产、高淀粉分子改良。AGPase由大亚基和小亚基构成,催化1-磷酸葡萄糖和ATP形成腺苷二磷酸葡萄糖和焦磷酸,其中腺苷二磷酸葡萄糖为淀粉生物合...
木薯是华南地区重要的经济作物,其块根富含淀粉。解析木薯块根淀粉合成调控机理将有助于木薯高产、高淀粉分子改良。AGPase由大亚基和小亚基构成,催化1-磷酸葡萄糖和ATP形成腺苷二磷酸葡萄糖和焦磷酸,其中腺苷二磷酸葡萄糖为淀粉生物合成的底物。AGPase酶是植物淀粉合成的限速酶,提高AGPase酶活性,有利于作物淀粉的积累及产量的提高。木薯MeAGPS1a基因编码的小亚基是AGPase的催化中心,前期研究表明生长素响应因子MeSAUR1作为转录因子正调控MeAGPS1a基因表达,酵母双杂交筛选木薯cDNA文库显示钙调素类似蛋白(CaM-like,CML)成员MeCML24为MeSAUR1的候选互作蛋白。为了确定MeCML24和MeSAUR1的互作关系,本研究从‘SC8’木薯品种基因组克隆了MeCML24基因,该基因的CDS区长度为492 bp,编码163个氨基酸。MeCML24蛋白的理化性质及二级结构分析显示,该蛋白理论等电点pI值4.38,属于亲水性蛋白,α-螺旋占52.76%,无规则卷曲占30.06%,β-转角结构占11.04%。构建酵母双杂交载体BD-MeCML24,自激活实验表明MeCML24不具有自激活活性。酵母双杂交点对点实验发现,共转AD-MeSAUR1和BD-MeCML24质粒的酵母菌株在SD/TLHA+x-α-gal培养基上变蓝,表明MeCML24与MeSAUR1存在互作关系。采用双分子荧光互补(BiFC)实验,将融合蛋白MeSAUR1-nEYFP和MeCML24-cEYFP在烟草叶片中共表达,在激光共聚焦显微镜下检测出黄色荧光蛋白EYFP的荧光信号,进一步证明了MeCML24与MeSAUR1互作。最后利用双荧光素酶实验证明MeCML24与MeSAUR1互作负调控MeAGPS1a基因表达。本研究揭示了木薯MeSAUR1与MeCML24协同调控MeAGPS1a基因表达的机制,发现钙调素类似蛋白MeCML24参与调控木薯块根淀粉合成关键基因MeAGPS1a表达,为利用分子生物学技术培育木薯优良品种提供了理论基础。
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关键词
木薯
MeCML24蛋白
MeSAUR1蛋白
互作蛋白
MeAGPS1a启动子
转录调控
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职称材料
题名
黑眶蟾蜍皮肤丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆与序列分析
被引量：
1
1
作者
韦双双
关怀
郑继平
周海龙
张英霞
机构
海南
大学农学院
海口维理瑷
生物
研究院
海南
大学海洋学院
出处
《安徽农业科学》
CAS
2012年第7期4017-4019,共3页
基金
海南大学青年基金项目(qnjj1148)
海南大学09年自由选题项目(hd09xm67)
国家自然科学基金项目(30960053)
文摘
[目的]克隆黑眶蟾蜍皮肤丝氨酸蛋白酶抑制剂基因。[方法]从海南海口产黑眶蟾蜍皮肤中抽提总RNA,经mRNA纯化后构建黑眶蟾蜍皮肤cDNA文库。根据已报道的丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)序列,设计寡核苷酸引物用于筛选、克隆、测序。[结果]从所构建的cDNA文库中得到1个Serpin基因,命名为BmSP。对cDNA序列推导出的氨基酸序列分析表明,该BmSP蛋白属于Serpin家族中SERPIN B亚家族,与鼠鳞状细胞癌抗原2(SCCA2)同源。该蛋白C末端含有一个RCL环(Reactive center loop regions)和一段高度保守的五肽。[结论]与SERPIN B亚家族中其他类型蛋白氨基酸序列比较结果表明,黑眶蟾蜍BmSP与SERPIN B亚家族中其他类型成员氨基酸序列相似度较高,具有高度的保守性,可能在其防御天敌捕食的过程中发挥重要作用。
关键词
胰蛋白酶抑制剂
黑眶蟾蜍
CDNA文库
Keywords
Serpin
Bufo melanostictus
cDNA library
分类号
Q95-33 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
木薯MeLHCB4基因的克隆及表达分析
被引量：
2
2
作者
丁凯旋
郑婉茹
李琳琳
潘月云
张银东
耿梦婷
陈银华
机构
海南
大学
热带
作物学院
海南省热带生物资源可持续利用国家重点实验室培育基地
出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021年第10期2813-2818,共6页
基金
海南省重点研发计划项目(No.ZDYF2019063)
海南省研究生创新科研课题(No.Hys2019-133)。
文摘
本研究采用RT-PCR技术克隆了木薯叶绿素a/b结合蛋白基因MeLHCB4编码区序列。通过生物信息学对其基因结构、基因编码蛋白的理化性质等进行分析,并对不同物种的LHCB4氨基酸序列进行比对和构建进化树。结果表明,木薯MeLHCB4基因的CDs序列全长858 bp,编码285个氨基酸,蛋白理论相对分子质量约为30.9 kDa,理论等电点为5.47,该蛋白属于稳定的亲水性蛋白,预测该蛋白可能定位于细胞核或细胞质中。实时荧光定量PCR检测该基因的表达模式发现,MeLHCB4基因主要在木薯叶片和茎中表达,受到茉莉酸甲酯(JA)、水杨酸(SA)和乙烯前体(ACC)等激素的诱导表达,推测其可能参与了JA、SA、ACC信号途径。细菌性枯萎病病原菌侵染木薯叶片12 h后,MeLHCB4的表达量显著提高,表明MeLHCB4参与了木薯对病原菌的响应过程。
关键词
木薯
叶绿素结合蛋白
MeLHCB4
基因克隆
基因表达
Keywords
Manihot esculenta
chlorophyll binding protein
MeLHCB4
gene cloning
gene expression
分类号
S533 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
木薯MeCML24与MeSAUR1互作调控MeAGPS1a表达的功能验证
3
作者
郑婉茹
丁凯旋
陆小花
李琳琳
王超群
陈银华
姚远
陈新
耿梦婷
机构
海南
大学
热带
作物学院
海南省热带生物资源可持续利用国家重点实验室培育基地
中国
热带
农业科学院
热带
生物
技术研究所
海南省
种子总站
出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2023年第1期1-8,共8页
基金
国家自然科学基金项目(No.31960058)
海南省研究生创新科研课题(No.Hys2020-140)。
文摘
木薯是华南地区重要的经济作物,其块根富含淀粉。解析木薯块根淀粉合成调控机理将有助于木薯高产、高淀粉分子改良。AGPase由大亚基和小亚基构成,催化1-磷酸葡萄糖和ATP形成腺苷二磷酸葡萄糖和焦磷酸,其中腺苷二磷酸葡萄糖为淀粉生物合成的底物。AGPase酶是植物淀粉合成的限速酶,提高AGPase酶活性,有利于作物淀粉的积累及产量的提高。木薯MeAGPS1a基因编码的小亚基是AGPase的催化中心,前期研究表明生长素响应因子MeSAUR1作为转录因子正调控MeAGPS1a基因表达,酵母双杂交筛选木薯cDNA文库显示钙调素类似蛋白(CaM-like,CML)成员MeCML24为MeSAUR1的候选互作蛋白。为了确定MeCML24和MeSAUR1的互作关系,本研究从‘SC8’木薯品种基因组克隆了MeCML24基因,该基因的CDS区长度为492 bp,编码163个氨基酸。MeCML24蛋白的理化性质及二级结构分析显示,该蛋白理论等电点pI值4.38,属于亲水性蛋白,α-螺旋占52.76%,无规则卷曲占30.06%,β-转角结构占11.04%。构建酵母双杂交载体BD-MeCML24,自激活实验表明MeCML24不具有自激活活性。酵母双杂交点对点实验发现,共转AD-MeSAUR1和BD-MeCML24质粒的酵母菌株在SD/TLHA+x-α-gal培养基上变蓝,表明MeCML24与MeSAUR1存在互作关系。采用双分子荧光互补(BiFC)实验,将融合蛋白MeSAUR1-nEYFP和MeCML24-cEYFP在烟草叶片中共表达,在激光共聚焦显微镜下检测出黄色荧光蛋白EYFP的荧光信号,进一步证明了MeCML24与MeSAUR1互作。最后利用双荧光素酶实验证明MeCML24与MeSAUR1互作负调控MeAGPS1a基因表达。本研究揭示了木薯MeSAUR1与MeCML24协同调控MeAGPS1a基因表达的机制,发现钙调素类似蛋白MeCML24参与调控木薯块根淀粉合成关键基因MeAGPS1a表达,为利用分子生物学技术培育木薯优良品种提供了理论基础。
关键词
木薯
MeCML24蛋白
MeSAUR1蛋白
互作蛋白
MeAGPS1a启动子
转录调控
Keywords
cassava
MeCML24 protein
MeSAUR1 protein
interacting protein
MeAGPS1a promoter
transcriptional regulation
分类号
Q949.748.5 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
黑眶蟾蜍皮肤丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆与序列分析
韦双双
关怀
郑继平
周海龙
张英霞
《安徽农业科学》
CAS
2012
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
木薯MeLHCB4基因的克隆及表达分析
丁凯旋
郑婉茹
李琳琳
潘月云
张银东
耿梦婷
陈银华
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2021
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
木薯MeCML24与MeSAUR1互作调控MeAGPS1a表达的功能验证
郑婉茹
丁凯旋
陆小花
李琳琳
王超群
陈银华
姚远
陈新
耿梦婷
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2023
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