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抑制NLRP3炎症小体激活可调节自噬改善多囊卵巢综合征颗粒细胞凋亡 被引量:5
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作者 符山花 包利利 +3 位作者 赵达 李俊 林芳婷 胡荣 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1646-1652,共7页
目的:在多囊卵巢综合征(PCOS)患者中探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达及其与颗粒细胞凋亡的关系。方法:收集17例PCOS患者(PCOS组)和20例非PCOS患者(对照组)的卵泡液与卵巢颗粒细胞,ELISA检测卵泡液中促炎因子TNF-α、IL-1β和IL... 目的:在多囊卵巢综合征(PCOS)患者中探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的表达及其与颗粒细胞凋亡的关系。方法:收集17例PCOS患者(PCOS组)和20例非PCOS患者(对照组)的卵泡液与卵巢颗粒细胞,ELISA检测卵泡液中促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-18等表达水平,RT-PCR和Western blot检测颗粒细胞中NLRP3 mRNA和NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、含CARD的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及裂解型天冬氨酸蛋白水解酶1(cleaved caspase-1)和自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与p62的表达水平;TUNEL法检测两组受试者颗粒细胞的凋亡水平;体外培养人卵巢癌颗粒细胞系KGN细胞,siRNA干扰技术将沉默NLRP3的siRNA(si-NLRP3)和阴性对照序列(si-NC)转染入细胞中,并采用TNF-α进行刺激以模拟PCOS相关的细胞损伤;将KGN细胞按处理方式的不同分为4组:Ctrl组、TNF-α组、TNF-α+si-NLRP3组和TNF-α+si-NC组;ELISA检测各组细胞上清液中脱氢表雄酮(DHEA)、睾酮和IL-1β与IL-18水平;TUNEL法检测各组KGN细胞的凋亡水平;Western blot检测各组KGN细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62、NLRP3、ASC与cleaved caspase-1蛋白表达水平和NF-κB信号通路中NF-κB p-p65的水平(NF-κB p-p65/NF-κB p65)。结果:与对照组相比,PCOS患者卵泡液中TNF-α、IL-1β和IL-18的表达和颗粒细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、NLRP3的mRNA与NLRP3、ASC和cleaved caspase-1的蛋白表达和细胞的凋亡水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),而p62的蛋白表达显著降低(P<0.01);与Ctrl组相比,TNF-α组、TNF-α+si-NC组和TNF-α+si-NLRP3组细胞上清液中DHEA、睾酮和IL-1β与IL-18水平和细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、ASC与cleaved caspase-1蛋白表达及NF-κB p-p65的水平和细胞凋亡率均明显升高(P<0.05或P<0.01),而p62蛋白却显著降低(P<0.01),NLRP3除在TNF-α+si-NLRP3组明显降低外(P<0.01),在TNF-α组、TNF-α+si-NC组中的表达均明显升高(P<0.01);但与TNF-α组相比,TNF-α+si-NLRP3组的上述检测指标变化趋势均明显降低(P<0.05),TNF-α+si-NC组无显著变化(P>0.05)。结论:颗粒细胞中过度激活的NLRP3炎症小体可能通过NF-κB途径参与促进PCOS患者的细胞炎症损伤与自噬性凋亡。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体 颗粒细胞 自噬 凋亡
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miR⁃191⁃5p通过SATB1调控滋养层细胞上皮⁃间质转化参与子痫前期发病的机制 被引量:6
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作者 周俏苗 陈秋霞 +4 位作者 黄海燕 许晶 肖美芳 龚护民 吴栋才 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第12期1584-1589,共6页
目的探讨miR-191-5p靶向调节AT富集序列特异性结合蛋白1(SATB1),对子痫前期(pre-eclampsia,PE)滋养层细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及细胞迁移的影响.方法收集滋养层细胞系HTR-8/SVneo及人绒毛膜癌细胞系JE... 目的探讨miR-191-5p靶向调节AT富集序列特异性结合蛋白1(SATB1),对子痫前期(pre-eclampsia,PE)滋养层细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及细胞迁移的影响.方法收集滋养层细胞系HTR-8/SVneo及人绒毛膜癌细胞系JEG-3、JAR.分组转染后qRT-PCR及Western blot检测细胞中miR-191-5p及SATB1的表达;Transwell检测细胞迁移;qRT-PCR及Western blot检测迁移侵袭相关因子MMP-9、MMP-2的表达;Western blot检测上皮间质转化相关因子的蛋白表达.结果miR-191-5p在HTR-8/SVneo细胞系中高表达,SATB1低表达.Western blot检测发现过表达miR-191-5p后,SATB1蛋白水平表达下调,抑制miR-191-5p的表达后表达上调(均P<0.05).过表达miR-191-5p,细胞增殖、迁移能力降低,MMP-2及MMP-9表达下调,抑制细胞EMT的发生,抑制miR-191-5p表达则结果相反.而抑制SATB1表达后,与过表达miR-191-5p结果一致,过表达SATB1后结果与抑制miR-191-5p结果一致.结论MiR-191-5p可靶向调节SATB1,降低细胞迁移能力,并抑制HTR-8/SVneo细胞EMT参与PE的发生. 展开更多
关键词 miR-191-5p SATB1 子痫前期 上皮-间质转化 滋养层细胞
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基于LIGHT/HVEM通路研究白藜芦醇对子痫前期大鼠肾损伤的保护作用研究 被引量:3
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作者 符海内 汪洪林 +2 位作者 张林静 张蕾 符大天 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第6期77-82,共6页
目的探讨白藜芦醇(RSV)对子痫前期(PE)大鼠淋巴毒素类似物(LIGHT)/疱疹病毒介入体(HVEM)通路的影响,及对肾损伤的保护作用。方法将50只SD孕鼠随机分为正常孕鼠组(Normal组)、子痫前期模型组(PE组)、白藜芦醇(RSV)低(50 mg/kg)、高(200 m... 目的探讨白藜芦醇(RSV)对子痫前期(PE)大鼠淋巴毒素类似物(LIGHT)/疱疹病毒介入体(HVEM)通路的影响,及对肾损伤的保护作用。方法将50只SD孕鼠随机分为正常孕鼠组(Normal组)、子痫前期模型组(PE组)、白藜芦醇(RSV)低(50 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组、LIGHT/HVEM通路阻断剂(淋巴毒素β受体,LTβR-Ig融合蛋白,1600μg/kg,LTβR-Ig组),每组10只。除Normal组外,其余各组大鼠腹腔注射亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME,300 mg/kg,共5 d,每天1次)建立大鼠子痫前期模型,造模成功后开始给药,RSV各剂量组灌胃给予相应剂量RSV溶液,LTβR-Ig组经尾静脉注射LTβR-Ig溶液,Normal组和PE组灌胃+尾静脉注射给予等量生理盐水,各组连续给药5 d,每天1次。末次给药后收集大鼠24 h尿液,并取血液,酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测肾功能指标血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)及尿液中24 h尿蛋白量;苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠肾组织病理变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肾组织LIGHT、HVEM mRNA相对水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织LIGHT、HVEM、核转录因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白相对表达水平。结果与Normal组相比,PE组大鼠出现肾小球内皮细胞弥漫性增生等病理损伤,血清Scr、BUN及尿液中24 h尿蛋白量、肾组织LIGHT mRNA及蛋白、HVEM mRNA及蛋白、NF-κB、IL-6蛋白表达升高(P<0.05);与PE组相比,RSV低、高剂量组、LTβR-Ig组大鼠肾组织病理损伤缓解,血清Scr、BUN及尿液中24 h尿蛋白量、肾组织LIGHT mRNA及蛋白、HVEM mRNA及蛋白、NF-κB、IL-6蛋白降低(P<0.05),且RSV高剂量组上述指标变化均优于RSV低剂量组;LTβR-Ig组上述指标变化与RSV高剂量组相比差异不明显(P>0.05)。结论RSV可抑制PE大鼠肾组织LIGHT/HVEM通路蛋白表达,改善PE肾损伤。 展开更多
关键词 白藜芦醇 子痫前期 肾损伤 淋巴毒素类似物/疱疹病毒介入体
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circRNA-1565抑制CD8^(+)T细胞对宫颈癌细胞的杀伤功能研究 被引量:2
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作者 王青慧 李波 +4 位作者 王晓黎 胡传翠 聂明朝 庞晓庆 张亚芳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期2191-2195,共5页
目的:探究circRNA-1565对CD8^(+)T细胞的作用及其对宫颈癌细胞杀伤能力的影响。方法:磁珠分选并用流式细胞术鉴定CD8^(+)T细胞。所得CD8^(+)T细胞分为Control组(转染空白质粒)和circRNA-1565组(转染circRNA-1565质粒)。CCK-8和流式细胞... 目的:探究circRNA-1565对CD8^(+)T细胞的作用及其对宫颈癌细胞杀伤能力的影响。方法:磁珠分选并用流式细胞术鉴定CD8^(+)T细胞。所得CD8^(+)T细胞分为Control组(转染空白质粒)和circRNA-1565组(转染circRNA-1565质粒)。CCK-8和流式细胞术检测Control组和circRNA-1565组CD8^(+)T细胞增殖能力和凋亡水平,Western blot检测Control组和circRNA-1565组CD8+T细胞Bcl-2、Bax和cleaved-caspase-3表达。将HeLa和SiHa细胞分别与Control组和circRNA-1565组CD8^(+)T细胞共孵育(HeLa+CD8^(+)T+Vector组、HeLa+CD8+T+circRNA-1565组、SiHa+CD8^(+)T+Vector组、SiHa+CD8+T+circRNA-1565组),检测各组CD8^(+)T细胞对HeLa和SiHa细胞的杀伤能力,ELISA检测共孵育后各组CD8^(+)T细胞分泌TNF-α、IFN-γ、Granzyme-B和perforin的能力。结果:磁珠分选的人PBMC CD8^(+)T细胞阳性率>88%。相比于Control组,circRNA-1565组CD8^(+)T细胞增殖能力显著下降(P<0.001),细胞凋亡显著增加(P<0.001),Bcl-2和Bax表达显著降低(P<0.001),cleaved-caspase-3表达显著增加。相比于HeLa+CD8+T+Vector组和SiHa+CD8^(+)T+Vector组,HeLa+CD8^(+)T+circRNA-1565组以及SiHa+CD8^(+)T+circRNA-1565组细胞上清中TNF-α、IFN-γ、Granzyme-B和perforin浓度均显著降低(P<0.001),对Hela和SiHa细胞杀伤能力显著降低(P<0.001)。结论:circRNA-1565调控CD8^(+)T细胞增殖和凋亡从而抑制其对宫颈癌细胞的杀伤能力。 展开更多
关键词 circRNA-1565 CD8^(+)T 宫颈癌 杀伤功能
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miR-107对卵巢癌细胞免疫逃逸的调控和紫杉醇耐药性的影响 被引量:1
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作者 王青慧 李波 +2 位作者 胡传翠 聂明朝 郑小妹 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期734-743,共10页
目的:探讨微小RNA-107(miR-107)通过丝裂原活化蛋白3激酶7(MAP3K7)调控卵巢癌细胞免疫逃逸对紫杉醇(TAX)耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法:293T细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)和miR-107 mimics组(转染miR-107 mimics)。采用浓度梯度... 目的:探讨微小RNA-107(miR-107)通过丝裂原活化蛋白3激酶7(MAP3K7)调控卵巢癌细胞免疫逃逸对紫杉醇(TAX)耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法:293T细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)和miR-107 mimics组(转染miR-107 mimics)。采用浓度梯度递增法处理卵巢癌SKOV3细胞,获得TAX耐药细胞SKOV3/TAX。SKOV3/TAX细胞随机分为空白对照组、TAX(给予4.0μmol·L^(-1)TAX)组、TAX+miR-107 mimics(给予4.0μmol·L^(-1)TAX且转染miR-107 mimics)组和TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7(给予4.0μmol·L^(-1)TAX且转染miR-107 mimics和pcDNA-MAP3K7)组;分别与人外周血淋巴细胞HPBL共培养,分为HPBL组、HPBL+SKOV3/TAX组、HPBL+SKOV3/TAX+TAX组、HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics组和HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞中miR-107表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-107和MAP3K7的靶向关系,Western blotting法检测各组细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:与人卵巢上皮细胞HOSEpic比较,卵巢癌细胞中miR-107表达水平降低(P<0.05)。MAP3K7的3´-UTR与miR-107存在靶向结合位点。双荧光素酶报告基因实验,与miR-NC组比较,过表达miR-107组野生型MAP3K7的荧光素酶活性降低(P<0.01)。Western blotting法检测,过表达miR-107组细胞中MAP3K7蛋白表达水平低于miR-NC组(P<0.01)。RT-qPCR检测,与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞中miR-107 mRNA表达水平升高(P<0.01);与TAX组比较,TAX+miR-107 mimics组SKOV3/TAX细胞中miR-107 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平降低(P<0.01);与TAX组比较,TAX+miR-107 mimics组SKOV3/TAX细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01);与TAX+miR-107 mimics组比较,TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组SKOV3/TAX细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。与HPBL+SKOV3/TAX组比较,HPBL+SKOV3/TAX+TAX组HPBL细胞中FAS蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05);与HPBL+SKOV3/TAX+TAX组比较,HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics组HPBL细胞中FAS蛋白表达水平和细胞凋亡率降低(P<0.05);与HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics组比较,HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组HPBL细胞中FAS蛋白表达水平降低(P<0.01),且细胞凋亡率降低(P<0.01)。与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞存活率降低(P<0.05);与TAX组比较,TAX+miR-107 mimics组SKOV3/TAX细胞存活率降低(P<0.05)。与TAX+miR-107 mimics组比较,TAX+miR-107mimics+pcDNA-MAP3K7组SKOV3/TAX细胞存活率明显升高(P<0.05)。与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与TAX组比较,TAX+miR-107组SKOV3/TAX细胞凋亡率升高(P<0.05);与TAX+miR-107 mimics组比较,TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:miR-107在SKOV3/TAX细胞中呈低表达,且miR-107通过抑制MAP3K7的表达,抑制SKOV3/TAX细胞免疫逃逸,缓解卵巢癌细胞TAX耐药性。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 微小RNA-107 免疫逃逸 紫杉醇 耐药
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