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结直肠癌细胞源性外泌体中miR-17-5p的表达对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响及其机制
被引量：
3
1
作者
刘珊
邢兆东
黄平
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期975-984,共10页
目的:分析结直肠癌细胞源性外泌体(Exo)中微小RNA-17-5p (miR-17-5p)表达对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响,阐明其可能的作用机制。方法:实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测人结直肠癌HCT116细胞、CT26细胞、LoVo细胞、HT29细胞、SW620细胞...
目的:分析结直肠癌细胞源性外泌体(Exo)中微小RNA-17-5p (miR-17-5p)表达对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响,阐明其可能的作用机制。方法:实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测人结直肠癌HCT116细胞、CT26细胞、LoVo细胞、HT29细胞、SW620细胞、SW480细胞和人正常结肠直肠黏膜上皮HIEC细胞中miR-17-5p表达水平。CT26细胞分为对照组、miR-NC inhibitor组和miR-17-5p inhibitor组,提取各组细胞Exo,透射电子显微镜观察Exo形态表现,纳米粒子跟踪分析法检测粒径分布情况,Western blotting法检测Exo中标志蛋白CD9、CD63、凋亡诱导因子6互作蛋白(Alix)和肿瘤易感基因101 (TSG101)蛋白表达水平,RT-qPCR法检测Exo中miR-17-5p表达水平。CT26细胞分为对照组、Exo组、Exo-miR-NC inhibitor组和Exo-miR-17-5p inhibitor组,分别以不同转染组CT26细胞源性Exo处理CT26细胞,Exo绿色荧光标记PKH67染料示踪法观察各组CT26细胞摄取Exo情况,MTT法检测1.25、 2.50、 5.00、 10.00、 20.00和40.00mg·L^(-1)5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理后各组CT26细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组CT26细胞凋亡率,细胞免疫荧光染色检测各组CT26细胞中微管相关蛋白轻链3B (LC3B)荧光强度,Western blotting法检测各组CT26细胞中微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3-Ⅰ)、自噬效应蛋白Beclin-1和P62蛋白表达水平,并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果:人结直肠癌HCT116、 CT26、 LoVo、HT29、SW620和SW480细胞中miR-17-5p表达水平明显高于HIEC细胞(P<0.05);分离到的颗粒物呈典型球形囊泡,粒径峰值约140 nm,且CD9、CD63、Alix和TSG101蛋白均明显表达,表明成功分离到Exo。与对照组比较,miR-17-5p inhibitor组Exo中miR-17-5p表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,Exo组、Exo-miR-NC inhibitor组和Exo-miR-17-5p inhibitor组CT26细胞周围均可见明显的PKH67染色,显示CT26细胞可摄取Exo。与对照组比较,经1.25、 2.50、 5.00、10.00、20.00和40.00 mg·L^(-1)5-Fu处理后Exo组CT26细胞增殖抑制率明显降低(P<0.05),各组CT26细胞凋亡率明显降低(P<0.05),细胞中LC3B荧光强度明显增强(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),P62蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与Exo组比较,经1.25、 2.50、 5.00、 10.00、 20.00和40.00mg·L^(-1)5-Fu处理后Exo-miR-17-5pinhibitor组CT26细胞增殖抑制率和细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中LC3B荧光强度减弱(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05),P62蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:抑制结直肠癌细胞源性Exo中miR-17-5p的表达可提高结直肠癌细胞的化疗敏感性,其作用机制可能与抑制细胞自噬水平有关。
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关键词
结直肠肿瘤
外泌体
微小RNA-17-5p
化疗敏感性
细胞自噬
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职称材料
题名
结直肠癌细胞源性外泌体中miR-17-5p的表达对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响及其机制
被引量：
3
1
作者
刘珊
邢兆东
黄平
机构
海南省人民医院肛肠外科
中国医学科学院肿瘤
医院
胰胃
外科
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期975-984,共10页
基金
海南省卫健委2021年度省卫生健康行业科研项目(21A200467)。
文摘
目的:分析结直肠癌细胞源性外泌体(Exo)中微小RNA-17-5p (miR-17-5p)表达对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响,阐明其可能的作用机制。方法:实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测人结直肠癌HCT116细胞、CT26细胞、LoVo细胞、HT29细胞、SW620细胞、SW480细胞和人正常结肠直肠黏膜上皮HIEC细胞中miR-17-5p表达水平。CT26细胞分为对照组、miR-NC inhibitor组和miR-17-5p inhibitor组,提取各组细胞Exo,透射电子显微镜观察Exo形态表现,纳米粒子跟踪分析法检测粒径分布情况,Western blotting法检测Exo中标志蛋白CD9、CD63、凋亡诱导因子6互作蛋白(Alix)和肿瘤易感基因101 (TSG101)蛋白表达水平,RT-qPCR法检测Exo中miR-17-5p表达水平。CT26细胞分为对照组、Exo组、Exo-miR-NC inhibitor组和Exo-miR-17-5p inhibitor组,分别以不同转染组CT26细胞源性Exo处理CT26细胞,Exo绿色荧光标记PKH67染料示踪法观察各组CT26细胞摄取Exo情况,MTT法检测1.25、 2.50、 5.00、 10.00、 20.00和40.00mg·L^(-1)5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理后各组CT26细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组CT26细胞凋亡率,细胞免疫荧光染色检测各组CT26细胞中微管相关蛋白轻链3B (LC3B)荧光强度,Western blotting法检测各组CT26细胞中微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3-Ⅰ)、自噬效应蛋白Beclin-1和P62蛋白表达水平,并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值。结果:人结直肠癌HCT116、 CT26、 LoVo、HT29、SW620和SW480细胞中miR-17-5p表达水平明显高于HIEC细胞(P<0.05);分离到的颗粒物呈典型球形囊泡,粒径峰值约140 nm,且CD9、CD63、Alix和TSG101蛋白均明显表达,表明成功分离到Exo。与对照组比较,miR-17-5p inhibitor组Exo中miR-17-5p表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,Exo组、Exo-miR-NC inhibitor组和Exo-miR-17-5p inhibitor组CT26细胞周围均可见明显的PKH67染色,显示CT26细胞可摄取Exo。与对照组比较,经1.25、 2.50、 5.00、10.00、20.00和40.00 mg·L^(-1)5-Fu处理后Exo组CT26细胞增殖抑制率明显降低(P<0.05),各组CT26细胞凋亡率明显降低(P<0.05),细胞中LC3B荧光强度明显增强(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),P62蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与Exo组比较,经1.25、 2.50、 5.00、 10.00、 20.00和40.00mg·L^(-1)5-Fu处理后Exo-miR-17-5pinhibitor组CT26细胞增殖抑制率和细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中LC3B荧光强度减弱(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05),P62蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:抑制结直肠癌细胞源性Exo中miR-17-5p的表达可提高结直肠癌细胞的化疗敏感性,其作用机制可能与抑制细胞自噬水平有关。
关键词
结直肠肿瘤
外泌体
微小RNA-17-5p
化疗敏感性
细胞自噬
Keywords
Colorectal neoplasm
Exosomes
MicroRNA-17-5p
Chemosensitivity
Cell autophagy
分类号
R735.34 [医药卫生—肿瘤]
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被引量
操作
1
结直肠癌细胞源性外泌体中miR-17-5p的表达对结直肠癌细胞化疗敏感性的影响及其机制
刘珊
邢兆东
黄平
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
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北大核心
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