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阻断B7/CD28通路对类风湿关节炎小鼠的影响
1
作者
刘颖
黄艳艳
+1 位作者
詹宇威
詹锋
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022年第4期515-522,共8页
目的探讨阻断B7/CD28通路对类风湿关节炎小鼠的影响及可能机制。方法40只DBA/1小鼠随机分正常对照组、模型组、细胞毒性淋巴细胞抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)低剂量组和CTLA4-Ig高剂量组,除正常对照组外,其余三组小鼠均制备类风湿关节炎...
目的探讨阻断B7/CD28通路对类风湿关节炎小鼠的影响及可能机制。方法40只DBA/1小鼠随机分正常对照组、模型组、细胞毒性淋巴细胞抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)低剂量组和CTLA4-Ig高剂量组,除正常对照组外,其余三组小鼠均制备类风湿关节炎模型。在二次免疫结束后第0、5、10天CTLA4-Ig低、高剂量组分别腹腔注射50、100 mg/kg CTLA4-Ig,正常对照组和模型组注射等量生理盐水。游标卡尺测定小鼠同侧后足掌厚度,进行关节炎评分;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-17(IL-17)的水平,Micro-CT扫描采集图像并测量骨组织形态计量学参数,HE染色观察膝关节病理形态变化,TRAP染色检测膝关节组织内破骨细胞,实时荧光定量PCR和Western blot检测骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA及蛋白表达情况,免疫组织化学染色检测核因子κB(NF-κB)表达,Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果与模型组比较,经过CTLA4-Ig高剂量治疗后,RA小鼠足肿胀和关节炎评分均降低,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17水平均降低,膝关节受损程度减小,骨密度(BMD)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨体积(BV)及骨体积分数(BV/TV)升高,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性细胞数目减少,组织内OPG mRNA与蛋白相对表达量上调,而RANK、RANKL mRNA与蛋白相对表达量均下调,同时,p-p65、p-IκBα蛋白相对表达量降低,NF-κB阳性表达面积减少,差异有统计学意义(P<0.01);通过CTLA4-Ig低剂量治疗后,RA小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-17水平较模型组下降,组织内NF-κB阳性表达面积减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论CTLA4-Ig阻断B7/CD28通路,对小鼠类风湿关节炎具有明显的治疗作用,可抑制炎性反应,减少骨破坏,并阻止NF-κB信号途径激活。
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关键词
类风湿关节炎
CTLA4-IG
B7/CD28共刺激通路
炎症
骨破坏
在线阅读
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职称材料
颗粒酶B通过SRGN/NF-kappaB信号通路调节类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和炎症反应
被引量：
4
2
作者
詹宇威
林书典
+2 位作者
詹锋
黄艳艳
杨舟
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2022年第12期1244-1251,共8页
目的 颗粒酶B(GZMB)在类风湿关节炎中发挥作用的机制尚不完全清楚。文章主要研究GZMB对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLSs)的增殖和炎症的影响及其潜在的机制。方法 采用RT-qPCR和Western blot检测RA-FLSs细胞中GZMB的表达,构建...
目的 颗粒酶B(GZMB)在类风湿关节炎中发挥作用的机制尚不完全清楚。文章主要研究GZMB对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLSs)的增殖和炎症的影响及其潜在的机制。方法 采用RT-qPCR和Western blot检测RA-FLSs细胞中GZMB的表达,构建GZMB以及丝甘蛋白聚糖(serglycin;SRGN)过表达载体(oe-GZMB;oe-SRGN)和GZMB干扰质粒(si-GZMB)并转染到RA-FLSs中,RT-qPCR和Western blot检测过表达和干扰效率。CCK-8实验以及EdU检测细胞增殖水平。使用ELISA试剂盒检测炎性因子IL-6、IL-8和IL-1β的表达水平。免疫共沉淀(CO-IP)实验检测GZMB和SRGN之间的相互作用。Western blot检测NF-kappaB信号通路相关蛋白表达水平。结果 与正常人的滑膜细胞(NC-FLSs)相比,GZMB在RA-FLSs细胞中表达上调(P<0.01);过表达GZMB能促进RA-FLSs的增殖和炎症反应(P<0.01),而敲除GZMB则显著抑制RA-FLSs的增殖和炎症反应(P<0.05);RT-qPCR和Western blot检测显示,与NC-FLSs相比,SRGN在RA-FLSs细胞中高表达(P<0.01)。CO-IP实验验证GZMB能够与SRGN结合(P<0.01),且过表达SRGN逆转了GZMB敲除对RA-FLSs的增殖和炎症反应的抑制作用(P<0.01)。此外,过表达SRGN也逆转了GZMB敲除对NF-kappaB信号通路相关蛋白(GZMB、SRGN、P65、p-P65和P50)的抑制作用(P<0.01)。结论 过表达GZMB能促进RA-FLSs的增殖和炎症反应,此外,GZMB能和SRGN互相作用并通过NF-kappaB信号通路调节RA-FLSs的增殖和炎症反应。
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关键词
类风湿关节炎
颗粒酶B
丝甘蛋白聚糖
细胞增殖
炎症反应
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职称材料
题名
阻断B7/CD28通路对类风湿关节炎小鼠的影响
1
作者
刘颖
黄艳艳
詹宇威
詹锋
机构
海南省人民医院
(
海南医学院
附属
海南
医院
)
风湿
免疫
科
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022年第4期515-522,共8页
基金
海南省自然科学基金青年基金项目(编号:819QN347)。
文摘
目的探讨阻断B7/CD28通路对类风湿关节炎小鼠的影响及可能机制。方法40只DBA/1小鼠随机分正常对照组、模型组、细胞毒性淋巴细胞抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)低剂量组和CTLA4-Ig高剂量组,除正常对照组外,其余三组小鼠均制备类风湿关节炎模型。在二次免疫结束后第0、5、10天CTLA4-Ig低、高剂量组分别腹腔注射50、100 mg/kg CTLA4-Ig,正常对照组和模型组注射等量生理盐水。游标卡尺测定小鼠同侧后足掌厚度,进行关节炎评分;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-17(IL-17)的水平,Micro-CT扫描采集图像并测量骨组织形态计量学参数,HE染色观察膝关节病理形态变化,TRAP染色检测膝关节组织内破骨细胞,实时荧光定量PCR和Western blot检测骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA及蛋白表达情况,免疫组织化学染色检测核因子κB(NF-κB)表达,Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果与模型组比较,经过CTLA4-Ig高剂量治疗后,RA小鼠足肿胀和关节炎评分均降低,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17水平均降低,膝关节受损程度减小,骨密度(BMD)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨体积(BV)及骨体积分数(BV/TV)升高,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)阳性细胞数目减少,组织内OPG mRNA与蛋白相对表达量上调,而RANK、RANKL mRNA与蛋白相对表达量均下调,同时,p-p65、p-IκBα蛋白相对表达量降低,NF-κB阳性表达面积减少,差异有统计学意义(P<0.01);通过CTLA4-Ig低剂量治疗后,RA小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-17水平较模型组下降,组织内NF-κB阳性表达面积减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论CTLA4-Ig阻断B7/CD28通路,对小鼠类风湿关节炎具有明显的治疗作用,可抑制炎性反应,减少骨破坏,并阻止NF-κB信号途径激活。
关键词
类风湿关节炎
CTLA4-IG
B7/CD28共刺激通路
炎症
骨破坏
Keywords
rheumatoid arthritis
CTLA4-Ig
B7/CD28 costimulatory pathway
inflammation
bone destruction
分类号
R593.22 [医药卫生—内科学]
在线阅读
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职称材料
题名
颗粒酶B通过SRGN/NF-kappaB信号通路调节类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和炎症反应
被引量：
4
2
作者
詹宇威
林书典
詹锋
黄艳艳
杨舟
机构
海南省人民医院
(
海南医学院
附属
海南
医院
)
风湿
免疫
科
出处
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2022年第12期1244-1251,共8页
基金
海南省自然科学基金(820MS128)
海南省省级临床医学中心建设项目资助(琼卫医函[2021]276号)。
文摘
目的 颗粒酶B(GZMB)在类风湿关节炎中发挥作用的机制尚不完全清楚。文章主要研究GZMB对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLSs)的增殖和炎症的影响及其潜在的机制。方法 采用RT-qPCR和Western blot检测RA-FLSs细胞中GZMB的表达,构建GZMB以及丝甘蛋白聚糖(serglycin;SRGN)过表达载体(oe-GZMB;oe-SRGN)和GZMB干扰质粒(si-GZMB)并转染到RA-FLSs中,RT-qPCR和Western blot检测过表达和干扰效率。CCK-8实验以及EdU检测细胞增殖水平。使用ELISA试剂盒检测炎性因子IL-6、IL-8和IL-1β的表达水平。免疫共沉淀(CO-IP)实验检测GZMB和SRGN之间的相互作用。Western blot检测NF-kappaB信号通路相关蛋白表达水平。结果 与正常人的滑膜细胞(NC-FLSs)相比,GZMB在RA-FLSs细胞中表达上调(P<0.01);过表达GZMB能促进RA-FLSs的增殖和炎症反应(P<0.01),而敲除GZMB则显著抑制RA-FLSs的增殖和炎症反应(P<0.05);RT-qPCR和Western blot检测显示,与NC-FLSs相比,SRGN在RA-FLSs细胞中高表达(P<0.01)。CO-IP实验验证GZMB能够与SRGN结合(P<0.01),且过表达SRGN逆转了GZMB敲除对RA-FLSs的增殖和炎症反应的抑制作用(P<0.01)。此外,过表达SRGN也逆转了GZMB敲除对NF-kappaB信号通路相关蛋白(GZMB、SRGN、P65、p-P65和P50)的抑制作用(P<0.01)。结论 过表达GZMB能促进RA-FLSs的增殖和炎症反应,此外,GZMB能和SRGN互相作用并通过NF-kappaB信号通路调节RA-FLSs的增殖和炎症反应。
关键词
类风湿关节炎
颗粒酶B
丝甘蛋白聚糖
细胞增殖
炎症反应
Keywords
rheumatoid arthritis
granzyme B
serglycin
cell proliferation
inflammatory reaction
分类号
R593.22 [医药卫生—内科学]
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题名
作者
出处
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被引量
操作
1
阻断B7/CD28通路对类风湿关节炎小鼠的影响
刘颖
黄艳艳
詹宇威
詹锋
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2022
0
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职称材料
2
颗粒酶B通过SRGN/NF-kappaB信号通路调节类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和炎症反应
詹宇威
林书典
詹锋
黄艳艳
杨舟
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
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