异淀粉酶(isoamylase,ISA)催化α-1,6连接键水解,影响淀粉的分支结构,促进结晶化和颗粒形成。为了挖掘协同MeISA2影响木薯淀粉积累的新蛋白,本研究利用酵母双杂交筛选MeISA2的互作蛋白。本研究构建了pGBKT7-MeISA2诱饵蛋白载体,证明MeI...异淀粉酶(isoamylase,ISA)催化α-1,6连接键水解,影响淀粉的分支结构,促进结晶化和颗粒形成。为了挖掘协同MeISA2影响木薯淀粉积累的新蛋白,本研究利用酵母双杂交筛选MeISA2的互作蛋白。本研究构建了pGBKT7-MeISA2诱饵蛋白载体,证明MeISA2不具有自激活活性,且对酵母细胞无毒害作用。通过酵母双杂交筛选cDNA文库,共获得7个候选互作蛋白。通过点对点酵母双杂交回转验证实验,验证了MeISA2与MePsbO1存在互作关系。MePsbO1属于光系统II产氧增强蛋白(photosystem II oxygen-evolving enhancer protein,PsbO),该类蛋白可促进光合作用电子传递过程的高效运行。生物信息学分析发现,MePsbO1与同属大戟科的橡胶树HbPsbO1的亲缘关系最近,相似性达到90.12%,而与拟南芥AtPsbO1的相似性仅为77.71%。预测MePsbO1定位于叶绿体,且MePsbO1基因主要在叶片中表达。植物ISA参与叶片临时性淀粉的合成,因此推测MePsbO1和MeISA2可能通过互作协同调控光合作用速率以及叶片临时性淀粉的积累。本研究结果为MeISA2基因参与木薯源器官的光合产物积累和分配机制研究提供新线索。展开更多
文摘异淀粉酶(isoamylase,ISA)催化α-1,6连接键水解,影响淀粉的分支结构,促进结晶化和颗粒形成。为了挖掘协同MeISA2影响木薯淀粉积累的新蛋白,本研究利用酵母双杂交筛选MeISA2的互作蛋白。本研究构建了pGBKT7-MeISA2诱饵蛋白载体,证明MeISA2不具有自激活活性,且对酵母细胞无毒害作用。通过酵母双杂交筛选cDNA文库,共获得7个候选互作蛋白。通过点对点酵母双杂交回转验证实验,验证了MeISA2与MePsbO1存在互作关系。MePsbO1属于光系统II产氧增强蛋白(photosystem II oxygen-evolving enhancer protein,PsbO),该类蛋白可促进光合作用电子传递过程的高效运行。生物信息学分析发现,MePsbO1与同属大戟科的橡胶树HbPsbO1的亲缘关系最近,相似性达到90.12%,而与拟南芥AtPsbO1的相似性仅为77.71%。预测MePsbO1定位于叶绿体,且MePsbO1基因主要在叶片中表达。植物ISA参与叶片临时性淀粉的合成,因此推测MePsbO1和MeISA2可能通过互作协同调控光合作用速率以及叶片临时性淀粉的积累。本研究结果为MeISA2基因参与木薯源器官的光合产物积累和分配机制研究提供新线索。
