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α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体β4亚基双点突变体的制备及其功能研究
被引量：
1
1
作者
李旭扬
陈舒苗
+2 位作者
于津鹏
罗素兰
长孙东亭
《热带生物学报》
2021年第4期403-411,共9页
在烟碱型乙酰胆碱受体家族中,含α6亚型的受体是比较特殊的一类。研究发现α6β4^(*)亚型(^(*)表示含其他亚基)在神经系统方面具有一定的调节作用,与神经性疼痛、成瘾等多种疾病的发病机制密切相关,可作为潜在的治疗靶点。比对大鼠与人...
在烟碱型乙酰胆碱受体家族中,含α6亚型的受体是比较特殊的一类。研究发现α6β4^(*)亚型(^(*)表示含其他亚基)在神经系统方面具有一定的调节作用,与神经性疼痛、成瘾等多种疾病的发病机制密切相关,可作为潜在的治疗靶点。比对大鼠与人类α6和β4亚基的序列,以野生型基因为模板,采用基因定点突变的方式,成功得到3种相邻位点突变的α6/α3β4受体突变型基因。通过体外转录、显微注射等手段,构建α6/α3β4受体野生型和突变型在非洲爪蟾卵母细胞上的表达模型,并使用双电极电压钳检测受体的表达情况。结果表明,与野生型受体相比,突变体α6/α3β4[S52N, I53V]对ACh的敏感性有所提升,EC_(50)为59.58μmol·L^(-1),是野生型的1/2,而其他两种突变体的敏感性与野生型相同。
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关键词
α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体
相邻位点突变
体外表达
双电极电压钳
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职称材料
α-芋螺毒素LvIA第11位氨基酸的新突变体合成及其靶点活性
2
作者
李浩楠
杨奕帅
+2 位作者
长孙东亭
朱晓鹏
罗素兰
《热带生物学报》
2023年第1期1-7,共7页
为了进一步探究第11位氨基酸的性质对LvIA靶点结合活性的影响,设计了LvIA的2个新型突变体[D11R]LvIA和[D11H]LvIA,即用2个碱性氨基酸-精氨酸(R)和组氨酸(H)分别替换原来的酸性氨基酸D。先人工合成了这2个新突变体的线性肽,然后采用2步...
为了进一步探究第11位氨基酸的性质对LvIA靶点结合活性的影响,设计了LvIA的2个新型突变体[D11R]LvIA和[D11H]LvIA,即用2个碱性氨基酸-精氨酸(R)和组氨酸(H)分别替换原来的酸性氨基酸D。先人工合成了这2个新突变体的线性肽,然后采用2步氧化法进行折叠,以获得在第1位和第3位半胱氨酸(Cys 1~3)、第2位和第4位半胱氨酸(Cys 2~4)之间定点连接形成二硫键。经高效液相色谱分离纯化和质谱鉴定,合成了含有Cys(1~3, 2~4)二硫键连接方式的多肽,其分子质量正确,纯度在95%以上。利用双电极电压钳电生理学技术对这2种突变体与α3β2 nAChR的结合活性进行了检测。结果发现,当该位点的氨基酸性质由酸性转换为碱性后,对LvIA的活性影响巨大,直接导致对α3β2 nAChR的阻断活性丧失。[D11R]LvIA和[D11H]LvIA的活性与野生型LvIA相比分别降低了574.38%和408.62%。由此表明,第11位氨基酸的酸碱性对LvIA的活性至关重要。
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关键词
α-芋螺毒素LvIA
突变体设计与合成
α3β2烟碱型乙酰胆碱受体
靶点结合活性
电生理学技术
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职称材料
题名
α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体β4亚基双点突变体的制备及其功能研究
被引量：
1
1
作者
李旭扬
陈舒苗
于津鹏
罗素兰
长孙东亭
机构
海南大学热带生物资源教育部重点实验室/海口市海洋药物重点实验室/生命科学与药学院
广西
大学
医
学院
出处
《热带生物学报》
2021年第4期403-411,共9页
基金
国家自然科学基金项目(41966003)。
文摘
在烟碱型乙酰胆碱受体家族中,含α6亚型的受体是比较特殊的一类。研究发现α6β4^(*)亚型(^(*)表示含其他亚基)在神经系统方面具有一定的调节作用,与神经性疼痛、成瘾等多种疾病的发病机制密切相关,可作为潜在的治疗靶点。比对大鼠与人类α6和β4亚基的序列,以野生型基因为模板,采用基因定点突变的方式,成功得到3种相邻位点突变的α6/α3β4受体突变型基因。通过体外转录、显微注射等手段,构建α6/α3β4受体野生型和突变型在非洲爪蟾卵母细胞上的表达模型,并使用双电极电压钳检测受体的表达情况。结果表明,与野生型受体相比,突变体α6/α3β4[S52N, I53V]对ACh的敏感性有所提升,EC_(50)为59.58μmol·L^(-1),是野生型的1/2,而其他两种突变体的敏感性与野生型相同。
关键词
α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体
相邻位点突变
体外表达
双电极电压钳
Keywords
α6/α3β4 nAChR
adjacent site mutagenesis
expression in vitro
two-electrode voltage clamp
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R91 [医药卫生—药学]
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职称材料
题名
α-芋螺毒素LvIA第11位氨基酸的新突变体合成及其靶点活性
2
作者
李浩楠
杨奕帅
长孙东亭
朱晓鹏
罗素兰
机构
上海儿童医学中心三亚市妇女儿童医院
药学
部
海南大学热带生物资源教育部重点实验室/海口市海洋药物重点实验室/生命科学与药学院
出处
《热带生物学报》
2023年第1期1-7,共7页
基金
三亚市科技计划项目(2021GXYL42)
国家自然科学基金项目(81872794)。
文摘
为了进一步探究第11位氨基酸的性质对LvIA靶点结合活性的影响,设计了LvIA的2个新型突变体[D11R]LvIA和[D11H]LvIA,即用2个碱性氨基酸-精氨酸(R)和组氨酸(H)分别替换原来的酸性氨基酸D。先人工合成了这2个新突变体的线性肽,然后采用2步氧化法进行折叠,以获得在第1位和第3位半胱氨酸(Cys 1~3)、第2位和第4位半胱氨酸(Cys 2~4)之间定点连接形成二硫键。经高效液相色谱分离纯化和质谱鉴定,合成了含有Cys(1~3, 2~4)二硫键连接方式的多肽,其分子质量正确,纯度在95%以上。利用双电极电压钳电生理学技术对这2种突变体与α3β2 nAChR的结合活性进行了检测。结果发现,当该位点的氨基酸性质由酸性转换为碱性后,对LvIA的活性影响巨大,直接导致对α3β2 nAChR的阻断活性丧失。[D11R]LvIA和[D11H]LvIA的活性与野生型LvIA相比分别降低了574.38%和408.62%。由此表明,第11位氨基酸的酸碱性对LvIA的活性至关重要。
关键词
α-芋螺毒素LvIA
突变体设计与合成
α3β2烟碱型乙酰胆碱受体
靶点结合活性
电生理学技术
Keywords
α-conotoxin LvIA
mutant design and synthesis
α3β2 nicotinic acetylcholine receptor
target binding activity
electrophysiological technique
分类号
R969.3 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
α6/α3β4烟碱型乙酰胆碱受体β4亚基双点突变体的制备及其功能研究
李旭扬
陈舒苗
于津鹏
罗素兰
长孙东亭
《热带生物学报》
2021
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
α-芋螺毒素LvIA第11位氨基酸的新突变体合成及其靶点活性
李浩楠
杨奕帅
长孙东亭
朱晓鹏
罗素兰
《热带生物学报》
2023
0
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