-
题名木薯MePOD10基因克隆及原核表达分析
- 1
-
-
作者
何雪强
吴姝
林慧靖
陈奥
王苗
史钊辉
闫语
-
机构
海南大学热带农林学院/海南省耐盐作物生物技术重点实验室/海南大学南繁学院(三亚南繁研究院)
-
出处
《福建农业学报》
北大核心
2025年第1期10-17,共8页
-
基金
海南省自然科学基金高层次人才项目(323RC410)
海南省重点研发项目(ZDYF2024XDNY237)
海南大学科研启动基金项目[KYQD(ZR)-22108]。
-
文摘
【目的】克隆木薯(Manihot esculenta Crantz)过氧化物酶基因MePOD10并进行生物信息学分析、原核表达分析和蛋白酶动力学分析,为进一步研究MePOD10基因的功能提供参考。【方法】从木薯‘华南124’('South China 124','SC124')中扩增MePOD10基因编码区序列(coding sequence,CDS),对其进行生物信息学分析,并构建MePOD10-pET28a融合表达载体,再转化至BL21感受态细胞中进行蛋白诱导,通过SDS-PAGE以及Western blotting确定MePOD10蛋白的表达情况,纯化MePOD10蛋白后进行酶活性和动力学分析。【结果】MePOD10基因CDS序列长度为981 bp,编码326个氨基酸,蛋白分子量为35069.60 Da,理论等电点为6.59,属于不稳定疏水性蛋白。MePOD10含有植物过氧化物酶保守结构域,其氨基酸序列与橡胶树POD蛋白的相似性最高,为93.25%。在37℃、1 mmol·L^(-1)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导6 h条件下,上清和沉淀均有蛋白表达,纯化后的上清蛋白酶活性高于对照蛋白,以愈创木酚为底物时,随着底物浓度增加,MePOD10蛋白催化活性迅速增加,之后趋于平稳,说明MePOD10蛋白具有催化活性。【结论】MePOD10蛋白具有过氧化物酶(Peroxidase,POD)保守结构域,在37℃、1 mmol·L^(-1)IPTG诱导6 h条件下,MePOD10-pET28a融合蛋白能正确表达,纯化后的融合蛋白具有催化活性。
-
关键词
木薯
过氧化物酶
原核表达
酶活性
-
Keywords
Cassava
peroxidase
prokaryotic expression
enzyme activity
-
分类号
S533
[农业科学—作物学]
-
