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木薯MePOD10基因克隆及原核表达分析
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作者 何雪强 吴姝 +4 位作者 林慧靖 陈奥 王苗 史钊辉 闫语 《福建农业学报》 北大核心 2025年第1期10-17,共8页
【目的】克隆木薯(Manihot esculenta Crantz)过氧化物酶基因MePOD10并进行生物信息学分析、原核表达分析和蛋白酶动力学分析,为进一步研究MePOD10基因的功能提供参考。【方法】从木薯‘华南124’('South China 124','SC124... 【目的】克隆木薯(Manihot esculenta Crantz)过氧化物酶基因MePOD10并进行生物信息学分析、原核表达分析和蛋白酶动力学分析,为进一步研究MePOD10基因的功能提供参考。【方法】从木薯‘华南124’('South China 124','SC124')中扩增MePOD10基因编码区序列(coding sequence,CDS),对其进行生物信息学分析,并构建MePOD10-pET28a融合表达载体,再转化至BL21感受态细胞中进行蛋白诱导,通过SDS-PAGE以及Western blotting确定MePOD10蛋白的表达情况,纯化MePOD10蛋白后进行酶活性和动力学分析。【结果】MePOD10基因CDS序列长度为981 bp,编码326个氨基酸,蛋白分子量为35069.60 Da,理论等电点为6.59,属于不稳定疏水性蛋白。MePOD10含有植物过氧化物酶保守结构域,其氨基酸序列与橡胶树POD蛋白的相似性最高,为93.25%。在37℃、1 mmol·L^(-1)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导6 h条件下,上清和沉淀均有蛋白表达,纯化后的上清蛋白酶活性高于对照蛋白,以愈创木酚为底物时,随着底物浓度增加,MePOD10蛋白催化活性迅速增加,之后趋于平稳,说明MePOD10蛋白具有催化活性。【结论】MePOD10蛋白具有过氧化物酶(Peroxidase,POD)保守结构域,在37℃、1 mmol·L^(-1)IPTG诱导6 h条件下,MePOD10-pET28a融合蛋白能正确表达,纯化后的融合蛋白具有催化活性。 展开更多
关键词 木薯 过氧化物酶 原核表达 酶活性
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木薯生长素响应因子MeARF的克隆及互作蛋白的筛选
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作者 吴竞远 唐璐芝 +1 位作者 朱彬彬 赵惠萍 《热带生物学报(中英文)》 2025年第4期495-503,共9页
为了解析木薯(Manihot esculenta)中生长素响应因子(Auxin response factor,ARF)的功能和作用机理,本研究首先克隆了一个MeARF基因,然后通过生物信息学分析,构建了进化树明确了其亲缘关系。蛋白结构分析发现,该蛋白含有保守的B3结构域(B... 为了解析木薯(Manihot esculenta)中生长素响应因子(Auxin response factor,ARF)的功能和作用机理,本研究首先克隆了一个MeARF基因,然后通过生物信息学分析,构建了进化树明确了其亲缘关系。蛋白结构分析发现,该蛋白含有保守的B3结构域(B3 DNA binding domain,B3)和Phox and Bem1p(PB1)结构域。通过分析Me ARF在不同组织的表达量,发现MeARF在木薯的侧芽表达量较高。本研究还构建了pGADT7-MeARF的基因表达载体,然后通过酵母双杂交实验筛选木薯的cDNA文库,最终筛选到了与植物生长发育和免疫相关的候选蛋白。结果表明,MeARF可能参与了木薯的生长发育和免疫。 展开更多
关键词 生长素响应因子 木薯 蛋白结构 酵母双杂交 候选蛋白
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木薯MeAux/IAA19基因的克隆及功能初探
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作者 刘小丽 韦运谢 《热带生物学报》 2025年第3期363-369,共7页
为了探究Aux/IAA基因的初步功能,本研究克隆并鉴定了木薯(Manihot esculenta)MeIAA19基因,通过生物信息学分析发现,该基因编码244个氨基酸,具有典型Aux/IAA蛋白的PB1保守结构域。通过构建MeIAA19-pET32a原核表达载体,诱导表达出该蛋白,... 为了探究Aux/IAA基因的初步功能,本研究克隆并鉴定了木薯(Manihot esculenta)MeIAA19基因,通过生物信息学分析发现,该基因编码244个氨基酸,具有典型Aux/IAA蛋白的PB1保守结构域。通过构建MeIAA19-pET32a原核表达载体,诱导表达出该蛋白,并通过外源施加蛋白促进木薯植株活性氧爆发和MePRs基因表达量。基因表达分析表明,MeIAA19基因的表达量在Xam侵染过程中随时间的延长而增加。本研究结果显示,木薯MeIAA19基因可能参与了木薯免疫。 展开更多
关键词 木薯 Aux/IAA蛋白 原核表达 表达分析 功能分析
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MeDAWDLE基因的克隆和蛋白功能验证
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作者 谭梦婷 徐浩然 曾鸿秋 《热带生物学报》 2025年第3期370-378,共9页
为探究MeDAWDLE蛋白功能,以木薯‘华南124号’为材料,通过PCR扩增对MeDAWDLE进行分离和鉴定。分析进化树发现,MeDAWDLE蛋白与苹果中的DAWDLE蛋白具有76.3%的同源性。蛋白序列的理化性质分析显示,MeDAWDLE蛋白大小为52 kDa,理论等电点为5... 为探究MeDAWDLE蛋白功能,以木薯‘华南124号’为材料,通过PCR扩增对MeDAWDLE进行分离和鉴定。分析进化树发现,MeDAWDLE蛋白与苹果中的DAWDLE蛋白具有76.3%的同源性。蛋白序列的理化性质分析显示,MeDAWDLE蛋白大小为52 kDa,理论等电点为5.04,表达分析发现MeDAWDLE在木薯不同组织器官中均有表达,并在胁迫条件下表达上调。通过构建表达载体完成蛋白诱导,并在进一步的蛋白功能分析中发现,MeDAWDLE能显著提升木薯的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及抗病能力,表明MeDAWDLE可能在木薯的胁迫响应中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 木薯 DAWDLE蛋白 载体构建 原核表达
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木薯RXam2的原核蛋白表达及抗病功能分析
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作者 唐璐芝 吴竞远 +2 位作者 陈元来 朱彬彬 赵惠萍 《热带生物学报(中英文)》 2025年第4期561-569,共9页
为挖掘木薯(Manihot esculenta)抗病基因,本研究克隆了一个特异性免疫受体相关基因Resistance to Xam(MeRXam2),对其蛋白结构进行分析,发现该基因的编码序列(Coding sequence,CDS)区域为3561 bp,蛋白大小约为132.847 kDa,通过实时荧光定... 为挖掘木薯(Manihot esculenta)抗病基因,本研究克隆了一个特异性免疫受体相关基因Resistance to Xam(MeRXam2),对其蛋白结构进行分析,发现该基因的编码序列(Coding sequence,CDS)区域为3561 bp,蛋白大小约为132.847 kDa,通过实时荧光定量(Real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)分析发现,在病原菌侵染下MeRXam2表达量随着时间的增加而增加,在24 h表达量达到最大,这表明MeRXam2参与到木薯抗病反应中。此外,通过同源重组构建MeRXam2-pET32a蛋白表达载体,进行蛋白的诱导及测定,并且通过对木薯叶片组织进行外源喷施MeRXam2蛋白后,研究结果发现,其细菌数明显低于对照株系,该蛋白能减缓细菌的侵染,该研究为木薯分子育种提供了理论依据和候选蛋白。 展开更多
关键词 木薯 基因克隆 原核表达 免疫应答
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水稻OsNHX5基因的亚细胞定位及表达分析
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作者 王丹阳 范亚飞 +4 位作者 周扬 罗明华 江行玉 罗越华 夏幽泉 《热带生物学报》 2019年第2期106-110,134,共6页
采用PCR方法从水稻中克隆出1个Na^+/H^+逆转运蛋白基因OsNHX5,构建了该基因的亚细胞定位表达载体,利用注射烟草法对OsNHX5进行亚细胞定位,利用荧光定量PCR技术研究OsNHX5基因在盐胁迫下的表达模式。结果表明,OsNHX5与拟南芥AtNHX5和AtN... 采用PCR方法从水稻中克隆出1个Na^+/H^+逆转运蛋白基因OsNHX5,构建了该基因的亚细胞定位表达载体,利用注射烟草法对OsNHX5进行亚细胞定位,利用荧光定量PCR技术研究OsNHX5基因在盐胁迫下的表达模式。结果表明,OsNHX5与拟南芥AtNHX5和AtNHX6的亲缘关系较近,该蛋白定位于细胞内膜系统上;荧光定量PCR结果表明,叶中OsNHX5基因的表达受KCl胁迫诱导上调表达,而根中OsNHX5基因的表达变化不明显。OsNHX5是一个细胞内膜系统上的K^+/H^+逆转运蛋白,可为耐盐水稻的分子育种提供理论依据。 展开更多
关键词 水稻 K^+/H^+逆转运蛋白 OsNHX5基因 表达分析 亚细胞定位
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