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特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立和优化
被引量:
9
1
作者
杨小敏
方瑶
+3 位作者
顾江
陈海
王海光
毛旭虎
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第14期1427-1431,共5页
目的以16S rRNA编码序列为靶基因,建立特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法并优化。方法以类鼻疽伯克霍尔德菌标准菌株K96243的16S rRNA编码序列为靶序列,通过Primer Premier 5软件搜索特异的引物,以该菌为模板,优化特异引物PCR的退...
目的以16S rRNA编码序列为靶基因,建立特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法并优化。方法以类鼻疽伯克霍尔德菌标准菌株K96243的16S rRNA编码序列为靶序列,通过Primer Premier 5软件搜索特异的引物,以该菌为模板,优化特异引物PCR的退火温度、退火时间和反应循环数等条件。得到最优PCR反应条件后,将该方法用于检测临床分离的类鼻疽伯克霍尔德菌菌株和常见细菌感染病原体(大肠杆菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌、甲型链球菌和乙型链球菌),评价该方法的有效性和特异性。结果共设计3对引物,分别扩增16S rRNA编码序列283~672、760~1 061、771~1 193片段,优化后PCR反应条件为:94℃预变性4 min,94℃变性40 s,54.5℃退火20 s,72℃延伸40 s,24个循环,最后延伸1 min;特异性分析发现此方法能将类鼻疽伯克霍尔德菌与其他常见感染病原菌进行有效地鉴别诊断。结论成功建立并优化一种快速鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌的方法,通过此方法能有效的从单个菌落中和基因组水平鉴定临床分离的8株类鼻疽伯克霍尔德菌。
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关键词
类鼻疽伯克霍尔德菌
16SRRNA基因
特异引物PCR
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职称材料
题名
特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立和优化
被引量:
9
1
作者
杨小敏
方瑶
顾江
陈海
王海光
毛旭虎
机构
海南医学院附属医院感染病教研室
第三军医大学
医学
检验系临床微生物及免疫学
教研室
海南
省三亚市人民
医院
检验科
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第14期1427-1431,共5页
基金
“重大新药创制”科技重大专项(2008ZXJ09014-007)~~
文摘
目的以16S rRNA编码序列为靶基因,建立特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法并优化。方法以类鼻疽伯克霍尔德菌标准菌株K96243的16S rRNA编码序列为靶序列,通过Primer Premier 5软件搜索特异的引物,以该菌为模板,优化特异引物PCR的退火温度、退火时间和反应循环数等条件。得到最优PCR反应条件后,将该方法用于检测临床分离的类鼻疽伯克霍尔德菌菌株和常见细菌感染病原体(大肠杆菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌、甲型链球菌和乙型链球菌),评价该方法的有效性和特异性。结果共设计3对引物,分别扩增16S rRNA编码序列283~672、760~1 061、771~1 193片段,优化后PCR反应条件为:94℃预变性4 min,94℃变性40 s,54.5℃退火20 s,72℃延伸40 s,24个循环,最后延伸1 min;特异性分析发现此方法能将类鼻疽伯克霍尔德菌与其他常见感染病原菌进行有效地鉴别诊断。结论成功建立并优化一种快速鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌的方法,通过此方法能有效的从单个菌落中和基因组水平鉴定临床分离的8株类鼻疽伯克霍尔德菌。
关键词
类鼻疽伯克霍尔德菌
16SRRNA基因
特异引物PCR
Keywords
Burkholderia pseudomallei
16S rRNA encoding gene
primer-specific PCR
分类号
R378.99 [医药卫生—病原生物学]
R446.5 [医药卫生—诊断学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立和优化
杨小敏
方瑶
顾江
陈海
王海光
毛旭虎
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
9
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