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基于自噬角度探究A2AR对内毒素诱导的Caco-2肠上皮细胞炎性损伤的影响 被引量:1
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作者 陈禺 王小吉 李合 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第9期1636-1642,共7页
目的探究腺苷A2A受体(A2AR)对内毒素脂多糖(LPS)诱导的Caco-2肠上皮细胞炎性损伤的影响及机制。方法首先将Caco-2细胞分为对照组、LPS组(10μg/ml LPS处理12 h)、A2AR激动剂(CGS21680)组(10μmol/L CGS21680预处理10 min)、CGS21680+LPS... 目的探究腺苷A2A受体(A2AR)对内毒素脂多糖(LPS)诱导的Caco-2肠上皮细胞炎性损伤的影响及机制。方法首先将Caco-2细胞分为对照组、LPS组(10μg/ml LPS处理12 h)、A2AR激动剂(CGS21680)组(10μmol/L CGS21680预处理10 min)、CGS21680+LPS组(10μmol/L CGS21680预处理10 min、10μg/ml LPS处理12 h),CCK-8法测定各组细胞活力,ELISA法测定各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的分泌水平,实时荧光定量PCR检测各组细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平,Western blot分析各组细胞中自噬相关蛋白微管相关轻链蛋白3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin1)的蛋白表达水平;再将Caco-2细胞分为对照组、LPS组(10μg/ml LPS处理12 h)、CGS21680+LPS组(10μmol/L CGS21680预处理10 min、10μg/ml LPS处理12 h)、CGS21680+LPS+雷帕霉素(Rapa)组(10μmol/L CGS21680预处理10 min、10μg/ml LPS与5μmol/L Rapa处理12 h),CCK-8法测定各组细胞活力,ELISA法测定各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌水平。结果与对照组比较,LPS组Caco-2细胞活力显著降低(P<0.05),上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平显著升高(P<0.05),细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA相对表达量均显著上调(P<0.05),并检测到LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与Beclin1蛋白相对表达量显著上调(P<0.05);与LPS组比较,CGS21680+LPS组Caco-2细胞活力显著升高(P<0.05),上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平显著降低(P<0.05),细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA相对表达量均显著下调(P<0.05),且LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与Beclin1蛋白相对表达量显著下调(P<0.05);此外,与CGS21680+LPS组比较,CGS21680+LPS+Rapa组Caco-2细胞活力又显著降低(P<0.05),上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平也显著升高(P<0.05)。结论使用A2AR激动剂能够减轻内毒素LPS诱导的Caco-2肠上皮细胞炎性损伤,提高细胞活力,这可能与其抑制自噬水平有关。 展开更多
关键词 腺苷A2A受体 Caco-2肠上皮细胞 炎症性肠病 脂多糖 细胞损伤 自噬
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辣椒素通过上调MTSS1表达抑制结肠癌细胞侵袭、迁移的实验研究 被引量:3
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作者 黄虹 黄蝶 +1 位作者 王瑞杰 余壮明 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第3期31-37,共7页
目的探究辣椒素通过上调肿瘤转移抑制因子1(MTSS1)抑制结肠癌细胞侵袭、迁移的机制。方法实验1:10、25、50、100μmol/L辣椒素组分别加入终浓度为10、25、50、100μmol/L辣椒素,对照组不添加辣椒素,恒温箱中培养24 h;实验2:对照组正常培... 目的探究辣椒素通过上调肿瘤转移抑制因子1(MTSS1)抑制结肠癌细胞侵袭、迁移的机制。方法实验1:10、25、50、100μmol/L辣椒素组分别加入终浓度为10、25、50、100μmol/L辣椒素,对照组不添加辣椒素,恒温箱中培养24 h;实验2:对照组正常培养,100μmol/L辣椒素组添加终浓度为100μmol/L辣椒素,100μmol/L辣椒素+对照siRNA组、100μmol/L辣椒素+MTSS1 siRNA组在100μmol/L辣椒素组的基础上分别添加终浓度为50 nmol/L对照siRNA、MTSS1 siRNA,转染4 h更换为终浓度100μmol/L辣椒素培养液。CCK8检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭情况;划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中辣椒素受体(TRPV1)、MTSS1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白水平。结果不同浓度辣椒素处理细胞发现,与对照组相比,25、50、100μmol/L辣椒素组细胞增殖抑制率升高,10、25、50、100μmol/L辣椒素组细胞中TRPV1、MTSS1蛋白水平升高,细胞侵袭数量、迁移百分比、细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05)。干扰MTSS1并添加100μmol/L辣椒素发现,与对照组相比,100μmol/L辣椒素组、100μmol/L辣椒素+对照siRNA组、100μmol/L辣椒素+MTSS1 siRNA组细胞侵袭数量、迁移百分比、细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,细胞中MTSS1蛋白水平升高(P<0.05);分别与100μmol/L辣椒素组、100μmol/L辣椒素+对照siRNA组相比,100μmol/L辣椒素+MTSS1 siRNA组细胞侵袭数量、迁移百分比、细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平升高,细胞中MTSS1蛋白水平降低(P<0.05)。结论辣椒素通过上调MTSS1表达抑制结肠癌细胞侵袭、迁移,从而起到对结肠癌的保护作用。 展开更多
关键词 辣椒素 肿瘤转移抑制因子1 结肠癌细胞 侵袭 迁移
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盐酸石蒜碱通过调控circSEPT9/miR-654-5p影响结直肠癌SW620细胞增殖及凋亡的机制 被引量:4
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作者 周晓华 李合 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期44-49,共6页
目的探讨盐酸石蒜碱(lycoline hydrochloride, LH)对人结直肠癌细胞SW620细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法不同剂量的LH处理SW620细胞(LH-L组、LH-M组、LH-H组),同时将正常培养的SW620细胞记为Con组;实验分组:si-NC组、si-... 目的探讨盐酸石蒜碱(lycoline hydrochloride, LH)对人结直肠癌细胞SW620细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法不同剂量的LH处理SW620细胞(LH-L组、LH-M组、LH-H组),同时将正常培养的SW620细胞记为Con组;实验分组:si-NC组、si-circSEPT9组、LH+pcDNA-circSEPT9组、LH+anti-miR-654-5p组;利用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成及凋亡;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测circSEPT9、miR-654-5p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测circSEPT9与miR-654-5p的靶向关系;Western blot法检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved Caspase-9)蛋白表达量。结果与Con组比较,LH-L组、LH-M组、LH-H组细胞增殖抑制率、miR-654-5p的表达量、细胞凋亡率和cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9蛋白水平升高(均P<0.05),细胞克隆形成数减少(均P<0.05),circSEPT9的表达量降低(均P<0.05),且呈剂量依赖性;circSEPT9可靶向调控miR-654-5p的表达;与si-NC组比较,si-circSEPT9组miR-654-5p的表达量、细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9蛋白水平升高(均P<0.05),细胞克隆形成数减少(均P<0.05);与LH组比较,LH+pcDNA-circSEPT9组、LH+anti-miR-654-5p组miR-654-5p的表达量、细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9蛋白水平降低(均P<0.05),细胞克隆形成数增多(均P<0.05)。结论盐酸石蒜碱可通过调控circSEPT9/miR-654-5p表达而抑制结直肠癌细胞增殖、克隆形成及诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 结直肠癌 盐酸石蒜碱 circSEPT9 miR-654-5p 增殖 凋亡
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