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血清反应因子全长及N端片段过表达慢病毒载体的构建及其对心脏干细胞分化的影响
被引量：
4
1
作者
雷洪
王可可
+5 位作者
哈艳平
贾亚楠
李汝佳
申志华
郭峻莉
揭伟
《临床与实验病理学杂志》
CSCD
北大核心
2017年第10期1109-1115,共7页
目的探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及N端片段(SRF-N,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)分化的影响。方法从c DNA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-N表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3FLAG-S...
目的探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及N端片段(SRF-N,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)分化的影响。方法从c DNA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-N表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin),转化感受态细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将SRF-Full及SRF-N过表达质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装慢病毒。磁激活细胞分选法分离乳SD大鼠c-Kit+CSC,将SRF-Full及SRF-N过表达慢病毒感染CSC并经TGF-β1诱导,定量PCR分析下游分化基因mRNA水平的变化。结果成功扩增出SRF-Full及SRF-N编码序列并正确连接入线性化载体,获得的阳性转化子经测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为2×108TU/m L的慢病毒颗粒,Western blot检测到预期Flag融合蛋白。重组慢病毒感染CSC后细胞核中见e GFP信号。TGF-β1诱导CSC出现心肌细胞分化基因(Nkx2.5、Gata4、c Tn I)及平滑肌细胞分化基因(SM22α)的表达,内皮细胞分化(v WF)无影响,SRF-Full促进CSC的心肌细胞分化,而SRF-N则抑制这种分化。结论成功构建SRFFull及SRF-N过表达重组慢病毒质粒。SRF-Full促进而SRF-N减弱TGF-β1诱导CSC的心肌细胞分化。
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关键词
血清反应因子
血清反应因子N端片段
质粒构建
心脏干细胞
细胞分化
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职称材料
题名
血清反应因子全长及N端片段过表达慢病毒载体的构建及其对心脏干细胞分化的影响
被引量：
4
1
作者
雷洪
王可可
哈艳平
贾亚楠
李汝佳
申志华
郭峻莉
揭伟
机构
广东医科大学基础
医学院
病理学系
广东医科大学基础
医学院
病理生理学教研室
海南医学院第一附属医院心血管研究所
出处
《临床与实验病理学杂志》
CSCD
北大核心
2017年第10期1109-1115,共7页
基金
国家自然科学基金(81460042)
广东省教育厅科技创新项目基金(KJCX20130088)
+1 种基金
广东省“扬帆计划”高层次人才项目(4YF16007G)
2015年国家留学人员科技活动择优资助项目
文摘
目的探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及N端片段(SRF-N,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)分化的影响。方法从c DNA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-N表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin),转化感受态细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将SRF-Full及SRF-N过表达质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装慢病毒。磁激活细胞分选法分离乳SD大鼠c-Kit+CSC,将SRF-Full及SRF-N过表达慢病毒感染CSC并经TGF-β1诱导,定量PCR分析下游分化基因mRNA水平的变化。结果成功扩增出SRF-Full及SRF-N编码序列并正确连接入线性化载体,获得的阳性转化子经测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为2×108TU/m L的慢病毒颗粒,Western blot检测到预期Flag融合蛋白。重组慢病毒感染CSC后细胞核中见e GFP信号。TGF-β1诱导CSC出现心肌细胞分化基因(Nkx2.5、Gata4、c Tn I)及平滑肌细胞分化基因(SM22α)的表达,内皮细胞分化(v WF)无影响,SRF-Full促进CSC的心肌细胞分化,而SRF-N则抑制这种分化。结论成功构建SRFFull及SRF-N过表达重组慢病毒质粒。SRF-Full促进而SRF-N减弱TGF-β1诱导CSC的心肌细胞分化。
关键词
血清反应因子
血清反应因子N端片段
质粒构建
心脏干细胞
细胞分化
Keywords
serum response factor
N-terminal fragment of serum response factor
plasmid construction
cardiac stem cell
cell differentiation
分类号
Q21 [生物学—细胞生物学]
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题名
作者
出处
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被引量
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1
血清反应因子全长及N端片段过表达慢病毒载体的构建及其对心脏干细胞分化的影响
雷洪
王可可
哈艳平
贾亚楠
李汝佳
申志华
郭峻莉
揭伟
《临床与实验病理学杂志》
CSCD
北大核心
2017
4
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