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曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I(SmCaMK I)基因的生物信息学分析与表达鉴定 被引量:1
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作者 李奕基 陈新新 +3 位作者 符瑞佳 陈小静 吕刚 梁培 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1044-1050,1057,共8页
目的开展SmCaMK I(曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I)的潜在生物学特征分析和功能研究。方法利用相关网站和软件对SmCaMK I的同源性核苷酸序列比对分析、保守位点预测、构建分子进化树、编码氨基酸的淋巴细胞表位进行分析预测。此外,... 目的开展SmCaMK I(曼氏迭宫绦虫钙/钙调素依赖蛋白激酶I)的潜在生物学特征分析和功能研究。方法利用相关网站和软件对SmCaMK I的同源性核苷酸序列比对分析、保守位点预测、构建分子进化树、编码氨基酸的淋巴细胞表位进行分析预测。此外,SmCaMK I进行扩增,并克隆到表达载体pET-28α(+)中进行蛋白的表达纯化,制备大鼠免疫血清进行虫体免疫组织定位分析。结果 SmCaMK I是一个全长基因,由1 068bp组成,编码355个氨基酸。SmCaMK I与细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫的CaMK I保守功能域的氨基酸序列一致性分别为89%和88%,与人的CaMK I氨基酸序列一致性仅仅只有44%。分子进化树分析中SmCaMK I与绦虫属的亲缘关系最近,与其他物种亲缘性较远。与人类CaMK I相比,淋巴细胞表位具有统计学差异。SmCaMK I能够定位在成虫的睾丸和虫卵,在裂头蚴中大量表达和特异定位于体表。结论SmCaMK I是参与虫体生长发育繁殖的重要蛋白分子,还可能是一个潜在的疫苗靶标蛋白。 展开更多
关键词 曼氏迭宫绦虫 SmCaMK I 生物信息学分析 原核表达 免疫组织化学定位
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曼氏裂头蚴糖原磷酸化酶的生物学特性分析及功能域克隆、表达 被引量:1
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作者 谭钦月 王清吟 +6 位作者 符瑞佳 周晓君 刘亚妹 王妹妹 林于金 吕刚 梁培 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期311-316,共6页
目的通过生物信息学软件分析曼氏裂头蚴(Sparganum mansoni,Sm)糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase,GP)的生物学特性,并对SmGP功能域(fSmGP)进行基因克隆及蛋白原核表达。方法利用生物信息学相关软件,分析Sm GP基因的生物信息学特征... 目的通过生物信息学软件分析曼氏裂头蚴(Sparganum mansoni,Sm)糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase,GP)的生物学特性,并对SmGP功能域(fSmGP)进行基因克隆及蛋白原核表达。方法利用生物信息学相关软件,分析Sm GP基因的生物信息学特征。通过PCR扩增得到功能域序列片段,克隆至原核表达载体pET-28α,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达fSmGP,并对表达蛋白进行western blot鉴定。结果Sm GP蛋白由519个氨基酸残基组成,相对分子质量为59.80 kDa,等电点为6.95,由C、H、N、O、S 5种原子组成。SmGP的序列与其他物种的氨基酸序列一致性在70%以上。其氨基酸序列中具有32个磷酸化位点、10个潜在的B细胞表位和15个潜在的T细胞表位。在二级结构中,以α螺旋为主,三维空间结构分析显示以二聚体形式存在,且分子中的功能位点空间分布集中。PCR、双酶切鉴定、测序结果均表明pET-28α-fSmGP的功能区重组质粒构建成功;western blot结果显示成功诱导fSmGP蛋白表达。结论SmGP属于Glycosyltransferase-GTB-type超基因家族,是一个高度保守的蛋白分子,但在蛋白分子的C端是功能区域较为集中和表位集中的区域,表达该功能域为后续对fSmGP免疫学分析等实验提供了指导,同时也为研究曼氏裂头蚴的糖代谢规律奠定了一定基础。 展开更多
关键词 曼氏裂头蚴 糖原磷酸化酶 生物信息学分析 原核表达
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中国恙虫病流行及临床研究进展(2010-2020) 被引量:16
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作者 谢晓菲 王高玉 +6 位作者 黄艺 唐川宁 彭箬岩 胡小媛 杜江 秦爱平 尹飞飞 《海南医学院学报》 2023年第19期1505-1509,共5页
恙虫病是由恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)感染引起的急性发热性疾病。主要通过恙螨幼虫叮咬传播,啮齿类动物在恙虫病传播过程中发挥重要作用。随着气候变化和人类活动范围的扩大等原因,我国恙虫病感染病例数和流行区域呈明... 恙虫病是由恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi,Ot)感染引起的急性发热性疾病。主要通过恙螨幼虫叮咬传播,啮齿类动物在恙虫病传播过程中发挥重要作用。随着气候变化和人类活动范围的扩大等原因,我国恙虫病感染病例数和流行区域呈明显增加和北扩趋势。本文基于文献总结分析了2010~2020年我国各地区恙虫病发病情况、流行病学特征、临床研究等进展。结果表明Kato、Karp、Gilliam型为我国恙虫病东方体主要流行基因型;恙虫病在我国各地区均有分布,其中云南、广州、福建等地是高发区;传播媒介种类呈明显地理差异;本病发病高峰期与季节温度、人群年龄、职业等相关。对我国恙虫病流行趋势变化、人群感染风险、环境影响等因素的研究,将为优化媒介防控措施、完善临床诊治方案、提高突发疫情的应急处置能力及精准防控策略的制定提供科学的指导。 展开更多
关键词 恙虫病 恙虫病东方体 流行区域 流行趋势 临床研究
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曼氏裂头蚴6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的基因克隆、蛋白表达及转录水平分析
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作者 郝润莲 刘锦腾 +5 位作者 王大勇 林于今 王妹妹 左世亮 王亚妹 梁培 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期963-969,共7页
目的分析曼氏迭宫绦虫中6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(Sm 6PGDH)的潜在的生物学特征和获得纯化蛋白。方法通过NCBI和ExPASy网站中在线软件,预测Sm 6PGDH基因序列的生物信息学特征。通过PCR技术扩增得到Sm 6PGDH的全长序列和构建pET-28a(+)-Sm 6... 目的分析曼氏迭宫绦虫中6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(Sm 6PGDH)的潜在的生物学特征和获得纯化蛋白。方法通过NCBI和ExPASy网站中在线软件,预测Sm 6PGDH基因序列的生物信息学特征。通过PCR技术扩增得到Sm 6PGDH的全长序列和构建pET-28a(+)-Sm 6PGDH重组质粒,利用双酶切和测序手段鉴定重组质粒。利用western blot鉴定重组蛋白和定量PCR分析在不同浓度葡萄糖培养的裂头蚴体内的转录水平。结果Sm 6PGDH蛋白由491个氨基酸组成,理论相对分子质量约为53.84 kDa。该蛋白分子中无信号肽。Sm 6PGDH序列与绦虫、人的同源基因一致性分别为75%和65%以上。Sm 6PGDH氨基酸序列中具有39个磷酸化位点、1个O-糖基化位点和9个B细胞线性表位。通过原核蛋白表达,成功得到可溶性的融合蛋白,并且在不同浓度葡萄糖培养的裂头蚴体内Sm 6PGDH的转录水平升高。结论构建了Sm 6PGDH重组质粒并获得纯化蛋白,为在裂头蚴的糖代谢的规律研究中提供了物质保障。 展开更多
关键词 曼氏裂头蚴 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 生物信息学分析 药物靶标
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