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犬同种异体椎间盘复合髓核细胞移植初探
被引量：
2
1
作者
辛洪奎
张超
+4 位作者
王德利
吴剑宏
王超峰
何勍
阮狄克
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期835-842,共8页
目的：探讨同种异体椎间盘复合髓核细胞移植的转归，观察转人端粒酶逆转录酶human telomerase reverse transcriptase，hTERT）基因髓核细胞介入椎间盘移植的生物学效应。方法：常规分离8周龄比格犬髓核细胞，将PKH-26标记的传2代髓核...
目的：探讨同种异体椎间盘复合髓核细胞移植的转归，观察转人端粒酶逆转录酶human telomerase reverse transcriptase，hTERT）基因髓核细胞介入椎间盘移植的生物学效应。方法：常规分离8周龄比格犬髓核细胞，将PKH-26标记的传2代髓核细胞（NPc）和转hTERT基因髓核细胞（hTERT—NPc）分别注射入冷冻保存的同种异体椎间盘内构建组织工程化同种异体椎间盘。选择12月龄同种犬18只随机分为3组，分别植入hTERT—NPc组织工程化的同种异体椎间盘（A组）、NPc组织工程化的同种异体椎间盘（B组）以及未组织工程化的同种异体椎间盘（C组）。每只犬于术后4、8、12周行正侧位X线片及MRI检查，观察移植椎间盘同宿主椎体愈合情况、移植椎间盘高度和信号变化情况：手术后12周麻醉状态下处死实验动物取L1～L7段脊柱标本进行生物力学测试，取移植椎间盘进行组织学观察。结果：X线及MRI检查结果显示3组移植椎间盘与宿主椎体均实现了良好的骨性融合，其中C组椎间盘术后出现了呈进展趋势的退行性改变，至移植后12周，其椎间盘高度及髓核信号比灰度值明显低于A、B两组（P〈0．05）。生物力学显示术后12周时，C组移植椎间盘在屈伸和旋转方向的活动度显著性大于A、B两组（P〈0．05），A组与B组无显著性差异（P〉0．05）。激光共聚焦显微镜观察到A、B组移植椎间盘髓核区域内有红色荧光细胞；光学显微镜下观察A、B两组移植椎间盘结构保持较好，外形类似软骨细胞的髓核细胞数量较多，排列较为规则；C组髓核形态保持欠佳，结构较为紊乱，髓核细胞数量明显减少，细胞形态欠饱满，退行性改变明显。RT—PCR分析显示术后12周时A组髓核内可检测到hTERTmRNA的阳性表达。结论：犬同种异体椎间盘移植后可在宿主体内存活，通过复合NPc可延缓椎间盘移植后的退行性改变：hTERT-NPc介入具有更好的保持异体椎间盘功能的潜力，有望保证同种异体椎间盘移植的远期疗效。
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关键词
椎间盘退变
椎间盘移植
同种异体
人端粒酶逆转录酶
基因转染
髓核细胞
犬
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职称材料
深低温保存温度及时间对椎间盘生物活性的影响
被引量：
2
2
作者
王超锋
阮狄克
+2 位作者
张超
辛洪奎
徐成
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期365-369,共5页
目的:探讨深低温保存温度及保存时间对椎间盘生物活性的影响。方法:取1岁龄Beagle犬新鲜椎间盘72个,分为对照组(A组,n=8)、-80℃保存组(B组,n=32)和-196℃保存组(C组,n=32)。B和C组在冷冻保存液中分别保存于-80℃低温冰箱及-196℃液氮中...
目的:探讨深低温保存温度及保存时间对椎间盘生物活性的影响。方法:取1岁龄Beagle犬新鲜椎间盘72个,分为对照组(A组,n=8)、-80℃保存组(B组,n=32)和-196℃保存组(C组,n=32)。B和C组在冷冻保存液中分别保存于-80℃低温冰箱及-196℃液氮中,在保存2w、2m、6m及12m时每组每个时间点取8个椎间盘,通过溴化吡啶/二乙酸荧光素(EB/FDA)荧光染色法检测椎间盘组织中不同部位的细胞存活率,以二甲基亚甲蓝(DMMB)染色法检测髓核组织蛋白多糖(PG)含量,以羟脯氨酸检测法测定纤维环组织中的总胶原含量;对照组取标本后直接进行以上检测。结果:B和C组椎间盘在保存至2w时各部位细胞存活率较A组明显下降,2m^12m保存期间,B、C两组椎间盘各部位的细胞存活率均维持在相对恒定的水平,但均较2w时下降;B组及C组外层纤维环细胞存活率在保存2w和2m时无明显差别(P>0.05),在保存6m及12m时C组明显高于B组(P<0.05);C组内层纤维环及髓核组织细胞存活率在各检测时间点均明显高B组(P<0.05)。B、C两组在各检测时间点PG含量均较A组明显降低,在保存2m^12m期间,C组PG含量均高于B组(P<0.05)。B、C两组总胶原蛋白含量在保存期间随时间逐渐降低,但两组间未见明显差异(P>0.05)。结论:利用-196℃保存椎间盘组织,无论在细胞总的存活率及PG含量上均优于-80℃保存;-196℃保存12个月时椎间盘细胞存活率及PG含量均维持在相对稳定的水平,能满足同种异体椎间盘移植的要求。
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关键词
椎间盘
深低温保存
细胞活性
细胞存活率
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职称材料
颈椎融合加速相邻节段退变:真实还是虚构?
被引量：
4
3
作者
阮狄克
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期6-7,共2页
颈椎融合会加速相邻节段退变吗？人工颈椎间盘置换能防止相邻节段退变吗？这是当今脊柱外科领域争论的热点问题。
关键词
相邻节段
颈椎融合
退变
颈椎间盘置换
外科领域
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职称材料
题名
犬同种异体椎间盘复合髓核细胞移植初探
被引量：
2
1
作者
辛洪奎
张超
王德利
吴剑宏
王超峰
何勍
阮狄克
机构
海军总医院骨科暨全军腰椎间盘病诊治中心
出处
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期835-842,共8页
基金
国家自然科学基金重点项目(编号:30730095)
文摘
目的：探讨同种异体椎间盘复合髓核细胞移植的转归，观察转人端粒酶逆转录酶human telomerase reverse transcriptase，hTERT）基因髓核细胞介入椎间盘移植的生物学效应。方法：常规分离8周龄比格犬髓核细胞，将PKH-26标记的传2代髓核细胞（NPc）和转hTERT基因髓核细胞（hTERT—NPc）分别注射入冷冻保存的同种异体椎间盘内构建组织工程化同种异体椎间盘。选择12月龄同种犬18只随机分为3组，分别植入hTERT—NPc组织工程化的同种异体椎间盘（A组）、NPc组织工程化的同种异体椎间盘（B组）以及未组织工程化的同种异体椎间盘（C组）。每只犬于术后4、8、12周行正侧位X线片及MRI检查，观察移植椎间盘同宿主椎体愈合情况、移植椎间盘高度和信号变化情况：手术后12周麻醉状态下处死实验动物取L1～L7段脊柱标本进行生物力学测试，取移植椎间盘进行组织学观察。结果：X线及MRI检查结果显示3组移植椎间盘与宿主椎体均实现了良好的骨性融合，其中C组椎间盘术后出现了呈进展趋势的退行性改变，至移植后12周，其椎间盘高度及髓核信号比灰度值明显低于A、B两组（P〈0．05）。生物力学显示术后12周时，C组移植椎间盘在屈伸和旋转方向的活动度显著性大于A、B两组（P〈0．05），A组与B组无显著性差异（P〉0．05）。激光共聚焦显微镜观察到A、B组移植椎间盘髓核区域内有红色荧光细胞；光学显微镜下观察A、B两组移植椎间盘结构保持较好，外形类似软骨细胞的髓核细胞数量较多，排列较为规则；C组髓核形态保持欠佳，结构较为紊乱，髓核细胞数量明显减少，细胞形态欠饱满，退行性改变明显。RT—PCR分析显示术后12周时A组髓核内可检测到hTERTmRNA的阳性表达。结论：犬同种异体椎间盘移植后可在宿主体内存活，通过复合NPc可延缓椎间盘移植后的退行性改变：hTERT-NPc介入具有更好的保持异体椎间盘功能的潜力，有望保证同种异体椎间盘移植的远期疗效。
关键词
椎间盘退变
椎间盘移植
同种异体
人端粒酶逆转录酶
基因转染
髓核细胞
犬
Keywords
Intervertebral disc degeneration
Intervertebral disc transplantation
Human telomerase reverse transcriptase
Viral transfection
Nucleus Pulposus cells
Beagle dogs
分类号
R318 [医药卫生—生物医学工程]
R681.5 [医药卫生—骨科学]
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职称材料
题名
深低温保存温度及时间对椎间盘生物活性的影响
被引量：
2
2
作者
王超锋
阮狄克
张超
辛洪奎
徐成
机构
海军总医院骨科暨全军腰椎间盘病诊治中心
出处
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期365-369,共5页
基金
国家自然科学基金(重点)资助项目(编号:30730095)
文摘
目的:探讨深低温保存温度及保存时间对椎间盘生物活性的影响。方法:取1岁龄Beagle犬新鲜椎间盘72个,分为对照组(A组,n=8)、-80℃保存组(B组,n=32)和-196℃保存组(C组,n=32)。B和C组在冷冻保存液中分别保存于-80℃低温冰箱及-196℃液氮中,在保存2w、2m、6m及12m时每组每个时间点取8个椎间盘,通过溴化吡啶/二乙酸荧光素(EB/FDA)荧光染色法检测椎间盘组织中不同部位的细胞存活率,以二甲基亚甲蓝(DMMB)染色法检测髓核组织蛋白多糖(PG)含量,以羟脯氨酸检测法测定纤维环组织中的总胶原含量;对照组取标本后直接进行以上检测。结果:B和C组椎间盘在保存至2w时各部位细胞存活率较A组明显下降,2m^12m保存期间,B、C两组椎间盘各部位的细胞存活率均维持在相对恒定的水平,但均较2w时下降;B组及C组外层纤维环细胞存活率在保存2w和2m时无明显差别(P>0.05),在保存6m及12m时C组明显高于B组(P<0.05);C组内层纤维环及髓核组织细胞存活率在各检测时间点均明显高B组(P<0.05)。B、C两组在各检测时间点PG含量均较A组明显降低,在保存2m^12m期间,C组PG含量均高于B组(P<0.05)。B、C两组总胶原蛋白含量在保存期间随时间逐渐降低,但两组间未见明显差异(P>0.05)。结论:利用-196℃保存椎间盘组织,无论在细胞总的存活率及PG含量上均优于-80℃保存;-196℃保存12个月时椎间盘细胞存活率及PG含量均维持在相对稳定的水平,能满足同种异体椎间盘移植的要求。
关键词
椎间盘
深低温保存
细胞活性
细胞存活率
Keywords
Intervertebral disc
Cryopreserve
Cytoactive
Survival ratio of cell
分类号
R318 [医药卫生—生物医学工程]
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职称材料
题名
颈椎融合加速相邻节段退变:真实还是虚构?
被引量：
4
3
作者
阮狄克
机构
海军总医院骨科暨全军腰椎间盘病诊治中心
出处
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期6-7,共2页
文摘
颈椎融合会加速相邻节段退变吗？人工颈椎间盘置换能防止相邻节段退变吗？这是当今脊柱外科领域争论的热点问题。
关键词
相邻节段
颈椎融合
退变
颈椎间盘置换
外科领域
分类号
R681.5 [医药卫生—骨科学]
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犬同种异体椎间盘复合髓核细胞移植初探
辛洪奎
张超
王德利
吴剑宏
王超峰
何勍
阮狄克
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
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职称材料
2
深低温保存温度及时间对椎间盘生物活性的影响
王超锋
阮狄克
张超
辛洪奎
徐成
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
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职称材料
3
颈椎融合加速相邻节段退变:真实还是虚构?
阮狄克
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
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