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分子氢对雄性小鼠生殖系统高水平小剂量电离辐射损伤的防护作用 被引量：2
1
作者 郭佳铭 和生辉 +6 位作者 熊泽森 刘哲 赵海男 刘鹏飞 颜宏利 高福 李百龙 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1188-1195,共8页
目的探讨分子氢对雄性小鼠生殖系统高水平小剂量电离辐射损伤的防护作用及机制。方法将小鼠精原细胞系GC-1 spg细胞分为对照组、加氢组、4 Gy照射组、4 Gy照射加氢组,在各组细胞处理后24 h时采用流式细胞术检测细胞凋亡率。将72只雄性BA... 目的探讨分子氢对雄性小鼠生殖系统高水平小剂量电离辐射损伤的防护作用及机制。方法将小鼠精原细胞系GC-1 spg细胞分为对照组、加氢组、4 Gy照射组、4 Gy照射加氢组,在各组细胞处理后24 h时采用流式细胞术检测细胞凋亡率。将72只雄性BALB/c小鼠分为对照组、加氢组、0.25 Gy照射组、0.25 Gy照射加氢组、0.5 Gy照射组、0.5 Gy照射加氢组,每组12只。小鼠加氢处理采用饮用富氢水联合呼吸高浓度氢气法。各组小鼠经相应处理后24 h分离睾丸组织进行H-E染色,并于内眦静脉取血,采用ELISA试剂盒检测促性腺激素释放激素(GnRH)、血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮含量。照射后4周分离小鼠双侧附睾制备精子悬液,以精子彗星电泳实验检测精子DNA损伤情况。结果 4 Gy照射加氢组GC-1 spg细胞的24 h凋亡率低于4 Gy照射组,差异有统计学意义(t=7.186,P<0.01)。加氢处理缓解了0.5 Gy照射导致的小鼠睾丸组织损伤,纠正了0.25 Gy、0.5 Gy照射诱发的FSH水平升高(t0.25 Gy=3.195 8,P0.25 Gy=0.019;t0.5 Gy=10.723 4,P0.5 Gy<0.05),并减轻了0.25 Gy、0.5 Gy照射后4周小鼠精子DNA彗星拖尾程度和DNA损伤情况(尾部面积:t0.25 Gy=16.592 3,t0.5 Gy=15.891 5;尾部DNA含量:t0.25 Gy=11.296 5,t0.5 Gy=13.785 0;尾部DNA百分含量:t0.25 Gy=26.834 0,t0.5 Gy=10.325 7;尾长:t0.25 Gy=16.865 4,t0.5 Gy=15.441 2;尾矩:t0.25 Gy=26.979 4,t0.5 Gy=13.174 2;Olive尾矩:t0.25 Gy=24.752 4,t0.5 Gy=6.896 1;P均<0.05)。结论分子氢通过降低精原细胞凋亡、调节激素紊乱、减轻精子DNA损伤等方式对雄性小鼠生殖系统高水平小剂量辐射损伤发挥防护作用。 展开更多
关键词 分子氢 辐射防护 精原细胞 细胞凋亡 雄激素类
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泛素羧基末端水解酶L1C90S和I93M点突变不影响小鼠卵母细胞成熟
2
作者 许亚军 张瑜 +5 位作者 石燕 印惠荣 汪伟伟 胡婷婷 松迪 孙兆贵 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1217-1223,共7页
目的通过观察泛素羧基末端水解酶L1(UCHL1)点突变蛋白与野生型蛋白过量对小鼠卵母细胞成熟的影响,并分析其在小鼠卵母细胞离体成熟过程中的作用及作用方式。方法通过原核重组蛋白技术制备UCHL1点突变(C90S和I93M)和野生型蛋白与谷胱甘... 目的通过观察泛素羧基末端水解酶L1(UCHL1)点突变蛋白与野生型蛋白过量对小鼠卵母细胞成熟的影响,并分析其在小鼠卵母细胞离体成熟过程中的作用及作用方式。方法通过原核重组蛋白技术制备UCHL1点突变(C90S和I93M)和野生型蛋白与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白,通过显微注射技术将UCHL1野生型蛋白与GST的融合蛋白、UCHL1点突变蛋白与GST的融合蛋白、GST、PBS分别注射到小鼠未成熟卵母细胞,或在体外培养基中添加UCHL1野生型蛋白与GST的融合蛋白,分析野生型UCHL1过量、UCHL1(I93M)点突变蛋白添加及泛素水解酶活性缺失的UCHL1(C90S)点突变蛋白添加对卵母细胞生发泡破裂(GVBD)率的影响。分离UCHL1(I93M)点突变小鼠与野生型小鼠的生发泡期卵母细胞,体外培养3 h后比较其GVBD率。结果显微注射UCHL1野生型蛋白及其点突变体与GST的融合蛋白的各组之间、注射GST组、注射PBS组卵母细胞GVBD率差异均无统计学意义,在培养基中添加UCHL1蛋白与GST的融合蛋白组卵母细胞GVBD率与无注射无添加对照组相比差异也无统计学意义(P均>0.05)。注射UCHL1(C90S)与GST的融合蛋白组有少量生发泡期卵母细胞体外发育为MⅡ期卵母细胞后呈现极体较对照组偏大的现象。UCHL1(I93M)点突变小鼠生发泡期卵母细胞体外GVBD率与野生型小鼠比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在小鼠卵母细胞中添加外源性UCHL1、有致病作用的UCHL1(I93M)突变体或泛素水解酶活性丧失的UCHL1(C90S)突变体均不影响卵母细胞成熟的GVBD进程,UCHL1(I93M)点突变小鼠卵母细胞GVBD率亦无异常,但UCHL1(C90S)点突变可能影响极体的形成。 展开更多
关键词 泛素羧基末端水解酶L1 生发泡破裂 卵母细胞 蛋白显微注射 重组蛋白质类
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冻融胚胎复苏后培养时间对临床妊娠率的影响 被引量：5
3
作者 冯书改 刘苡萱 +12 位作者 张慧琴 颜宏利 朱旻 杜惠 张文静 印惠荣 松迪 刘敏 林莎莎 胡婷婷 王玲 洪毅 施敏凤 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期334-337,共4页
目的探讨卵裂期冻融胚胎复苏后体外培养时间对冻融胚胎移植(FET)周期临床妊娠率的影响。方法收集2016年1月至12月在海军军医大学(第二军医大学)长海医院生殖医学中心接受FET助孕的692例患者的临床资料。根据胚胎复苏后至移植前体外培养... 目的探讨卵裂期冻融胚胎复苏后体外培养时间对冻融胚胎移植(FET)周期临床妊娠率的影响。方法收集2016年1月至12月在海军军医大学(第二军医大学)长海医院生殖医学中心接受FET助孕的692例患者的临床资料。根据胚胎复苏后至移植前体外培养的天数将患者分为3组:复苏后未培养组、复苏后培养1 d组、复苏后培养2 d组,分析比较3组患者的妊娠结局。结果 3组患者的年龄、体质量指数、不孕年限、基础卵泡刺激激素水平和子宫内膜准备方案差异均无统计学意义(P均>0.05)。复苏后未培养组、复苏后培养1 d组、复苏后培养2 d组胚胎丢失率分别为0.0%(0/706)、13.3%(64/481)、43.0%(114/265),3组间差异有统计学意义(P<0.01)。3组胚胎移植数和移植日子宫内膜厚度差异均无统计学意义(P均>0.01);复苏后培养2 d组和复苏后培养1 d组优质胚胎移植率均低于复苏后未培养组(P均<0.01),复苏后培养2 d组临床妊娠率高于复苏后未培养组(P<0.01)。结论卵裂期冻融胚胎复苏后体外培养1~2 d后移植,虽然增加胚胎丢失率,但可筛选具有发育潜能的胚胎,提高临床妊娠率。 展开更多
关键词 体外培养 卵裂 桑葚胚 囊胚 冻融胚胎移植
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氢气通过减少活性氧生成抑制线粒体凋亡发挥对小鼠精原细胞的电离辐射防护作用 被引量：4
4
作者 马龙 蔡山林 +4 位作者 郝伟 高福 李百龙 郭佳铭 颜宏利 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1085-1090,共6页
目的探索H_(2)对小鼠精原细胞电离辐射损伤的防护效应及机制。方法将小鼠精原细胞系GC-1细胞分为4组:对照组、H_(2)组、照射组和照射加H_(2)组。照射组和照射加H_(2)组细胞予单次^(60)Co γ射线照射,累积辐射剂量为8 Gy(剂量率为0.897 G... 目的探索H_(2)对小鼠精原细胞电离辐射损伤的防护效应及机制。方法将小鼠精原细胞系GC-1细胞分为4组:对照组、H_(2)组、照射组和照射加H_(2)组。照射组和照射加H_(2)组细胞予单次^(60)Co γ射线照射,累积辐射剂量为8 Gy(剂量率为0.897 Gy/min)。H_(2)组和照射加H_(2)组细胞于照射前使用H_(2)细胞培养系统(75% H_(2)、20% O_(2)和5% CO_(2))培养1 h。照射后24 h,用CCK-8和流式细胞术分别检测照射和H_(2)处理对GC-1细胞活力和凋亡的影响。照射后2 h,用2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和线粒体膜电位JC-1荧光探针分别检测照射和H_(2)处理对GC-1细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位的影响。照射后24 h,用蛋白质印迹法检测照射和H_(2)处理对GC-1细胞线粒体凋亡通路蛋白B淋巴细胞瘤相关蛋白x(Bax)、细胞色素c(Cyt-c)和cleaved-caspase 3(caspase 3活化产物)表达的影响。结果 CCK-8检测结果显示H_(2)提高了照射后GC-1细胞的活力(P<0.01),流式细胞术检测结果显示H_(2)降低了照射后GC-1细胞的凋亡率(P<0.01)。特异性荧光探针染色结果显示,H_(2)不仅抑制照射后GC-1细胞内ROS的产生,还抑制照射后GC-1细胞线粒体膜电位的降低(P<0.01或P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,H_(2)抑制照射后GC-1细胞内线粒体凋亡蛋白Bax、Cyt-c和cleaved-caspase 3的表达(P<0.01或P<0.05)。结论 H_(2)通过减少ROS生成保护线粒体膜电位、抑制线粒体凋亡通路,对^(60)Co γ射线导致的小鼠精原细胞电离辐射损伤起防护作用。 展开更多
关键词 氢 电离辐射 活性氧 线粒体凋亡通路 精原细胞
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受精第3天胚胎卵裂速度和囊胚发育潜能的关系 被引量：2
5
作者 汪伟伟 松迪 +5 位作者 许亚军 胡婷婷 林莎莎 王及氓 袁雪菲 印惠荣 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期577-580,共4页
目的探讨受精第3天胚胎卵裂速度是否可以预测囊胚发育潜能及辅助生殖临床结局。方法回顾性分析2016年1月1日至2018年12月31日于我中心行体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)治疗的150例不孕症患者的临床资料及所有366枚... 目的探讨受精第3天胚胎卵裂速度是否可以预测囊胚发育潜能及辅助生殖临床结局。方法回顾性分析2016年1月1日至2018年12月31日于我中心行体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)治疗的150例不孕症患者的临床资料及所有366枚新鲜囊胚移植的胚胎数据。根据受精第3天卵裂球的细胞数目将胚胎分为慢发育组(细胞数目≤6个,n=78)、正常发育组(细胞数目7~9个,n=230)和快发育组(细胞数目≥10个,n=58)。分析比较3组的囊胚形成率、优质囊胚形成率、胚胎种植率、临床妊娠率及活产率。结果慢发育组、正常发育组和快发育组囊胚形成率分别为7.7%(6/78)、55.7%(128/230)和29.3%(17/58),其中正常发育组的囊胚形成率最高,与其他两组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);3组优质囊胚形成率分别为0(0/6)、7.0%(9/128)和11.8%(2/17),其中快发育组最高,与正常发育组比较差异有统计学意义(P<0.05);胚胎种植率分别为0(0/18)、50.6%(80/158)和63.3%(19/30),其中快发育组最高,与正常发育组比较差异有统计学意义(P<0.05)。正常发育组临床妊娠率为53.7%(58/108)、活产率为41.4%(24/58);快发育组临床妊娠率为63.0%(17/27),活产率为47.1%(8/17);正常发育组与快发育组临床妊娠率和活产率比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论受精第3天细胞数目7~9的卵裂胚囊胚形成率最高,细胞数目≥10的卵裂胚优质囊胚形成率、胚胎种植率、临床妊娠率及活产率较高,提示快速发育的胚胎有正常的发育潜能。 展开更多
关键词 第3天胚胎 卵裂 囊胚形成率 胚胎种植率 优质囊胚形成率 临床妊娠率 活产
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PRDM12、FOXE1、B3GAT2、VIM、SFRP2基因在结直肠癌组织中的甲基化水平 被引量：3
6
作者 徐正 颜宏利 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1169-1174,共6页
目的检测结直肠癌组织中PR结构域蛋白12(PRDM12)、叉头框E1(FOXE1)、β-1,3-葡糖醛转移酶2(B3GAT2)、波形蛋白(VIM)、分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因的甲基化水平,初步评估上述基因作为结直肠癌早期筛查标志物的潜力。方法选取海军军... 目的检测结直肠癌组织中PR结构域蛋白12(PRDM12)、叉头框E1(FOXE1)、β-1,3-葡糖醛转移酶2(B3GAT2)、波形蛋白(VIM)、分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因的甲基化水平,初步评估上述基因作为结直肠癌早期筛查标志物的潜力。方法选取海军军医大学(第二军医大学)长海医院31例接受手术切除治疗的结直肠癌患者的石蜡切片标本,使用焦磷酸测序法检测癌组织和相应癌旁正常组织中PRDM12、FOXE1、B3GAT2、VIM、SFRP2-1、SFRP2-2基因启动子的甲基化水平。结果31例结直肠癌患者癌组织中PRDM12、FOXE1、B3GAT2、VIM、SFRP2-1、SFRP2-2基因启动子甲基化指数均高于相应癌旁正常组织,差异均有统计学意义(P均<0.01)。在31例结直肠癌患者中,PRDM12、FOXE1、B3GAT2、VIM、SFRP2-1、SFRP2-2基因启动子高度甲基化率分别为87.1%(27/31)、90.3%(28/31)、80.6%(25/31)、77.4%(24/31)、74.2%(23/31)、64.5%(20/31);在18例早期(TNMⅠ~Ⅱ期)结直肠癌患者中,PRDM12、FOXE1、B3GAT2、VIM、SFRP2-1、SFRP2-2基因启动子高度甲基化率分别为88.9%(16/18)、94.4%(17/18)、83.3%(15/18)、77.8%(14/18)、83.3%(15/18)、61.1%(11/18)。结论PRDM12和FOXE1基因在结直肠癌组织中出现异常甲基化,初步判断两者有潜力成为结直肠癌早期筛查的分子标志物。 展开更多
关键词 焦磷酸测序 PR结构域蛋白12 叉头框E1 DNA甲基化 结直肠肿瘤
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粒状头样蛋白2下调诱导上皮间质转化促进肿瘤细胞对吉非替尼耐药
7
作者 洪永刚 郝立强 +1 位作者 毕峰瑞 颜宏利 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1102-1108,共7页
目的探讨粒状头样蛋白2(GRHL2)在肿瘤靶向治疗药物表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用和可能机制。方法利用吉非替尼浓度逐步递增的体外诱导方法培养人结直肠癌细胞DiFi和人肺腺癌细胞HCC4006,获得... 目的探讨粒状头样蛋白2(GRHL2)在肿瘤靶向治疗药物表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用和可能机制。方法利用吉非替尼浓度逐步递增的体外诱导方法培养人结直肠癌细胞DiFi和人肺腺癌细胞HCC4006,获得吉非替尼耐药细胞株。通过RNA测序方法筛选在耐药细胞株与其亲代细胞中差异表达的基因并进行实时荧光定量PCR验证。使用pcDNA3.1-GRHL2质粒转染耐药细胞株使GRHL2过表达,用CCK-8法检测细胞对吉非替尼的敏感性。采用蛋白质印迹法检测耐药细胞株中上皮标志物E-cadherin和间质标志物Vimentin的表达变化,并通过CellMinerTM数据库分析60株人肿瘤细胞系中GRHL2表达与E-cadherin和Vimentin表达的关系。结果成功获得DiFi和HCC4006的耐药细胞株。通过RNA测序和实时荧光定量PCR验证发现GRHL2在耐药细胞株中表达下调,而在耐药细胞株中过表达GRHL2后细胞恢复了对吉非替尼的敏感性。蛋白质印迹分析表明耐药细胞株中上皮标志物E-cadherin表达下调,而间质标志物Vimentin表达上调;CellMinerTM数据库分析表明GRHL2的表达与E-cadherin/Vimentin比值高度一致。结论 GRHL2表达下调通过诱导上皮间质转化介导肿瘤细胞对吉非替尼的耐药。 展开更多
关键词 靶向治疗 继发性耐药 吉非替尼 粒状头样蛋白2 上皮间质转化
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