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血管性血友病因子裂解酶间隔区结构域突变对酶生物学功能的影响
1
作者
王萌
吴昊
+2 位作者
李华
赵艺鸿
金圣宇
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期900-907,共8页
目的:探讨血管性血友病因子裂解酶ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)间隔区结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解过程中的生物学功能,阐明ADAMTS13在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)发病机制中的作用。方法:将ADAMTS13间隔区结构...
目的:探讨血管性血友病因子裂解酶ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)间隔区结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解过程中的生物学功能,阐明ADAMTS13在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)发病机制中的作用。方法:将ADAMTS13间隔区结构域中的氨基酸残基TEDRLPR以点突变技术逐个基因突变(突变体M1~M7),将构建的ADAMTS13与其突变体质粒转染至人胚肾HEK293细胞,稳定表达后提纯重组蛋白。观察野生型和突变型ADAMTS13在变性条件、剪切应力作用和ADAMTS13抗体处理后裂解vWF的能力。结果:荧光共振能量转移(FRET)实验,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)对FRET-vWF73剪切能力降低(P<0.05)。变性条件下,野生型ADAMTS13可以将vWF多聚体裂解,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)的裂解活性明显降低(P<0.01)。在体外剪切应力作用下,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)裂解vWF多聚体的能力明显降低(P<0.01)。与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)与vWF之间的结合力差异无统计学意义(P>0.05),表明ADAMTS13的C末端与vWF之间存在多个结合位点。ADAMTS13抗体处理可在一定程度上抑制野生型和突变型ADAMTS13裂解vWF的能力。结论:间隔区突变后ADAMTS13的活性降低。ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)可能是ADAMTS13在底物识别时的重要作用位点。
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关键词
血管性血友病因子裂解酶
ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13
间隔区结构域
血管性血友病因子
血栓性血小板减少性紫癜
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题名
血管性血友病因子裂解酶间隔区结构域突变对酶生物学功能的影响
1
作者
王萌
吴昊
李华
赵艺鸿
金圣宇
机构
延边大学附属
医院
血液内科
浙江省绍兴市人民医院康复医学科
延边大学附属
医院
体检科
延边大学附属
医院
中心实验室
出处
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期900-907,共8页
基金
国家自然科学基金项目(81660026,82060032)
吉林省教育厅“十三五”科研项目[吉教科合字(2016)273号]。
文摘
目的:探讨血管性血友病因子裂解酶ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)间隔区结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解过程中的生物学功能,阐明ADAMTS13在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)发病机制中的作用。方法:将ADAMTS13间隔区结构域中的氨基酸残基TEDRLPR以点突变技术逐个基因突变(突变体M1~M7),将构建的ADAMTS13与其突变体质粒转染至人胚肾HEK293细胞,稳定表达后提纯重组蛋白。观察野生型和突变型ADAMTS13在变性条件、剪切应力作用和ADAMTS13抗体处理后裂解vWF的能力。结果:荧光共振能量转移(FRET)实验,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)对FRET-vWF73剪切能力降低(P<0.05)。变性条件下,野生型ADAMTS13可以将vWF多聚体裂解,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)的裂解活性明显降低(P<0.01)。在体外剪切应力作用下,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)裂解vWF多聚体的能力明显降低(P<0.01)。与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)与vWF之间的结合力差异无统计学意义(P>0.05),表明ADAMTS13的C末端与vWF之间存在多个结合位点。ADAMTS13抗体处理可在一定程度上抑制野生型和突变型ADAMTS13裂解vWF的能力。结论:间隔区突变后ADAMTS13的活性降低。ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)可能是ADAMTS13在底物识别时的重要作用位点。
关键词
血管性血友病因子裂解酶
ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13
间隔区结构域
血管性血友病因子
血栓性血小板减少性紫癜
Keywords
Von Willebrand factor lyase
ADAM metalloproteinase with thrombospondin type 1 motifs 13
Spacer domain
Von Willebrand factor
Thrombotic thrombocytopenic purpura
分类号
R554.6 [医药卫生—血液循环系统疾病]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
血管性血友病因子裂解酶间隔区结构域突变对酶生物学功能的影响
王萌
吴昊
李华
赵艺鸿
金圣宇
《吉林大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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