文摘目的:建立药用植物悬浮细胞系,筛选稳定合成次生代谢产物的转基因生产细胞株。方法:诱导胡萝卜(Daucus carota L.)愈伤组织,并建立胡萝卜悬浮细胞系。利用植物双元表达载体p MC-GUS转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101并侵染胡萝卜悬浮细胞,经潮霉素筛选得到阳性克隆,24孔板培养后离心检测GUS表达,GUS染色较深克隆100 m L锥形瓶传代1月,再次染色确认基因整合稳定性。结果:驯化获得胡萝卜悬浮细胞系,转基因后筛选得到阳性克隆,经GUS检测获得表达较高的细胞克隆,克隆于100 m L锥形瓶传代1月,GUS染色确认基因已稳定整合至胡萝卜悬浮细胞基因组。结论:成功驯化获得胡萝卜悬浮细胞系,并通过转基因技术筛选得到表达GUS蛋白的转基因悬浮细胞株,基因稳定整合至胡萝卜细胞基因组。该方法筛选得到的转基因细胞株具备开发成为生产细胞系的潜能。
