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钩端螺旋体OmpR家族相关TCS 鉴定及功能初探 被引量:1
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作者 戴欣珏 夏文浩 +2 位作者 任雨轩 车名花 胡玮琳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期197-202,共6页
目的建立钩端螺旋体(钩体)OmpR家族双组分系统(TCS)的鉴定方法,初步探讨OmpR家族TCS在钩体感染人巨噬细胞过程中对钩体主要外膜蛋白(OMPs)表达水平的调控作用。方法采用生物信息学技术预测致病性钩体赖株TCS的组氨酸激酶(HK)和应答调节... 目的建立钩端螺旋体(钩体)OmpR家族双组分系统(TCS)的鉴定方法,初步探讨OmpR家族TCS在钩体感染人巨噬细胞过程中对钩体主要外膜蛋白(OMPs)表达水平的调控作用。方法采用生物信息学技术预测致病性钩体赖株TCS的组氨酸激酶(HK)和应答调节蛋白(RR)OmpR功能结构域。采用激酶活性检测试剂盒和细菌双杂交技术进一步验证各HK激酶活性以及各HK与RR的相互作用。采用qRT-PCR法检测HK抗血清封闭前后钩体主要OMPs基因mRNA水平的变化。结果钩体56601株中LA2828、LA1710含有HATPase_c激酶催化结构域,LA2827、LA1709含有Response_reg与OmpR功能结构域,提示其分别可构成HK/OmpR-TCS。体外重组HK-2828和HK-1710蛋白均具有激酶活性,且分别与OmpR-2827和OmpR-1709存在直接的相互作用。HK-2828抗体封闭处理可使感染过程中显著下降的外膜蛋白编码基因lipL32、lipL41和ompL1的mRNA水平明显回升。结论成功构建钩体OmpR家族-TCS鉴定及功能探究体系,为阐明感染过程中问号钩体OMPs表达改变调控机制,以及制定基因工程疫苗OMPs抗原筛选新策略提供依据。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 双组分系统 外膜蛋白
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基于微流控芯片PCR结合免疫层析技术检测产毒型艰难梭菌方法的建立与性能评价
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作者 程泓睿 宋小军 +6 位作者 陈毓 张萌 蔡梦婷 朱坤 邰玉蕾 应士波 金大智 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期142-149,共8页
目的 采用微流控芯片PCR结合免疫层析技术,建立产毒型艰难梭菌检测方法,评价其性能。方法 根据艰难梭菌tcdB和tpi基因,设计引物,建立产毒型艰难梭菌微流控芯片PCR结合免疫层析检测方法,对其特异性、检测限、重复性和稳定性进行评价。收... 目的 采用微流控芯片PCR结合免疫层析技术,建立产毒型艰难梭菌检测方法,评价其性能。方法 根据艰难梭菌tcdB和tpi基因,设计引物,建立产毒型艰难梭菌微流控芯片PCR结合免疫层析检测方法,对其特异性、检测限、重复性和稳定性进行评价。收集临床腹泻患者粪便样本,平行采用Xpert C.difficile/Epi、VIDAS CDAB和本试验方法进行检测,检测结果不一致的样本进行艰难梭菌分离培养和tcdB毒素基因PCR鉴定。结果 本方法与其他腹泻相关病原菌均无交叉反应,两个浓度的tcdB和tpi基因阳性质粒(10^(5)和10^(2) copies/μL)检测重复性均为100%,且采用分别保存3、6、9和12个月的PCR试剂和制备的免疫层析试纸条进行2个浓度质粒检测,结果均呈现阳性。产毒型艰难梭菌检测限为10 copies/μL。本试验方法检测到艰难梭菌阳性33例(33/215,15.3%),与Xpert C.difficile/Epi方法检测结果的一致性(Kappa值为0.965)。以Xpert C.difficile/Epi检测结果为标准,本方法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为94.3%、100.0%、100.0%和98.9%,显著高于VIDAS CDAB方法(60.0%、98.9%、91.3%、92.7%)(Kappa=0.714,OR=157.50,95%CI:62.03~847.28,P=0.013)。结论 本试验建立的微流控芯片PCR结合免疫层析方法特异性、稳定性和重复性均良好,可快速、准确地检测临床腹泻样本中的产毒型艰难梭菌,可用于门急诊、社区医疗服务中心、流行病学现场等的艰难梭菌感染筛查。 展开更多
关键词 艰难梭菌 微流控芯片 免疫层析 检测
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艰难梭菌毒素B2型蛋白重组表达及活性分析 被引量:1
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作者 林兴豪 张凯 +6 位作者 王梦婕 杨鸣 顾汉阳 薛笑兰 罗永能 金大智 胡珲 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期498-503,共6页
目的 构建艰难梭菌高毒力株2型毒素B(TcdB2)的枯草芽胞杆菌工程株,获得高效表达的生物活性TcdB2蛋白。方法 以ST1/RT027型菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得TcdB2全长基因片段,构建到PHT01载体中,转化枯草芽胞杆菌WB800N菌株,进行原... 目的 构建艰难梭菌高毒力株2型毒素B(TcdB2)的枯草芽胞杆菌工程株,获得高效表达的生物活性TcdB2蛋白。方法 以ST1/RT027型菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得TcdB2全长基因片段,构建到PHT01载体中,转化枯草芽胞杆菌WB800N菌株,进行原核表达获得TcdB2全长蛋白,进一步通过细胞毒性试验验证重组TcdB2的生物活性。结果 成功构建了高效表达TcdB2的枯草芽胞杆菌工程株,并获得具有细胞毒性的重组蛋白TcdB2。结论 具有生物活性的重组TcdB2蛋白,为进一步研究艰难梭菌高毒力株的致病机制和作为疫苗候选靶标等奠定了基础。 展开更多
关键词 艰难梭菌 毒素B 枯草芽胞杆菌 表达 细胞毒性
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某院精神科住院患者艰难梭菌定植的分子流行病学特征
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作者 王玲 林珊 +7 位作者 黄益花 段慈东 田梦伦 沈宇航 宋小军 陈毓 赵龙友 金大智 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期584-592,共9页
目的研究精神科住院患者艰难梭菌定植的分子流行病学特征,并探讨定植的相关因素。方法于2020年6月1日至9月30日期间,收集丽水市第二人民医院精神科住院患者的粪便样本。分离培养艰难梭菌,并进行毒素基因鉴定、多位点序列分型和抗生素敏... 目的研究精神科住院患者艰难梭菌定植的分子流行病学特征,并探讨定植的相关因素。方法于2020年6月1日至9月30日期间,收集丽水市第二人民医院精神科住院患者的粪便样本。分离培养艰难梭菌,并进行毒素基因鉴定、多位点序列分型和抗生素敏感性试验。结合患者的临床资料,分析艰难梭菌定植的相关因素。结果共收集粪便样本442份,分离到24株(5.4%)艰难梭菌。其中,20株为TcdA和TcdB毒素基因阳性、二元毒素基因阴性(A+B+CDT-),3株为A-B+CDT-,1株为A+B+CDT+。共鉴定出14种序列分型(ST),包括1株高毒力ST11型。所有菌株对甲硝唑、万古霉素、利福平和哌拉西林敏感,但对环丙沙星(95.8%)、克林霉素(87.5%)和红霉素(62.5%)的耐药率较高。二元Logistic回归分析结果显示,在不同科室中,年龄(≥60岁)、住院天数(>200 d)和服用劳拉西泮片与老年精神科患者艰难梭菌定植具有显著相关性(OR=3.762~15.556,P<0.05),而住院天数(>20 d)与早期干预科患者艰难梭菌定植具有显著相关性(OR=0.004,P<0.001)。结论研究发现精神科住院患者存在5.4%的艰难梭菌定植率,年龄较大、住院天数较长且长期服用精神治疗性药物的患者与艰难梭菌定植间存在相关性,需加强院内感染防控监测进而遏制艰难梭菌在精神科的暴发和传播。 展开更多
关键词 艰难梭菌定植 精神科 分子特征 相关因素
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可实时监测的小鼠原发性肝癌模型建立及应用 被引量:1
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作者 方权 郑晓光 +7 位作者 孙越 陈倪静 骆境怡 王琦轩 康蓉 吴佳琪 何小柏 陈林洁 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期346-354,共9页
目的构建可实时监测的小鼠原发性肝癌(HCC)模型。方法通过高压水动力学转染技术,PB转座子系统和小鼠活体成像技术建立可实时监测的、由特定癌基因驱动的小鼠原发性肝癌模型。结果YAP5SA基因诱导表达的小鼠原发性肝癌可以成功模拟Hippo... 目的构建可实时监测的小鼠原发性肝癌(HCC)模型。方法通过高压水动力学转染技术,PB转座子系统和小鼠活体成像技术建立可实时监测的、由特定癌基因驱动的小鼠原发性肝癌模型。结果YAP5SA基因诱导表达的小鼠原发性肝癌可以成功模拟Hippo信号通路失活的肝癌亚型;通过每隔1周连续检测,整合YAP5SA-IRES-Fluc的小鼠荧光峰值信号在早期逐渐降低,于3周左右,荧光峰值信号与对照组相比,出现明显差异;PTEN-YAP5SA+模型组的荧光信号峰值与YAP5SA+对照组的荧光信号峰值相比,整体均值偏高;索拉菲尼给药1周后,本模型小鼠的荧光信号停止上升,呈现平稳的趋势。结论成功构建了一种可实时监测的小鼠原发性肝癌模型,可以进行不同肝癌亚型的分子表征,并以此为基础,为临床筛选肝癌靶向药物提供新方法。 展开更多
关键词 肝癌亚型 实时监测 肿瘤驱动基因 PB转座子
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