蛋白质组学技术及其在工业微生物研究中的应用 被引量：3

1

作者 王亚军 王超儿 +1 位作者 朱津 罗希 《发酵科技通讯》 CAS 2016年第2期123-128,共6页

随着后基因组时代的到来,蛋白质组学的研究受到越来越多的关注,双向凝胶电泳和生物质谱技术是蛋白质组学研究的两大工具。微生物被广泛应用于食品、化工、医药等领域,随着这些领域的快速发展,利用蛋白质组学技术解析微生物代谢途径及调... 随着后基因组时代的到来,蛋白质组学的研究受到越来越多的关注,双向凝胶电泳和生物质谱技术是蛋白质组学研究的两大工具。微生物被广泛应用于食品、化工、医药等领域,随着这些领域的快速发展,利用蛋白质组学技术解析微生物代谢途径及调控机制越来越受到重视,从而为进一步的菌种改良提供理论依据。主要综述了蛋白质组学相关技术及其在工业微生物代谢途径与调控机制研究中的应用进展。 展开更多

关键词 蛋白质组学 双向电泳 质谱 微生物育种

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D-阿洛酮糖及其合成研究进展 被引量：4

2

作者 贾东旭 孙晨奕 +6 位作者 彭晨 柳志强 李勉 王红艳 陈凯茜 程新平 陈德水 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期211-217,共7页

D-阿洛酮糖是一种具有保健功能的己酮糖,可以预防糖尿病、维持正常血脂水平,避免传统甜味剂对人体造成的代谢负担,具有重要的应用价值,但在自然界中含量稀少,近年来涌现多种D-阿洛酮糖的合成方法。文章围绕D-阿洛酮糖的功能、化学合成... D-阿洛酮糖是一种具有保健功能的己酮糖,可以预防糖尿病、维持正常血脂水平,避免传统甜味剂对人体造成的代谢负担,具有重要的应用价值,但在自然界中含量稀少,近年来涌现多种D-阿洛酮糖的合成方法。文章围绕D-阿洛酮糖的功能、化学合成法和生物酶异构化法等内容开展综述,重点阐述了D-阿洛酮糖3-差向异构酶的来源及性质、结构及催化机制、分子改造、多酶偶联、食品级表达等方面的研究进展,旨在推进生物转化制备D-阿洛酮糖的工业发展,为保障公众营养健康提供新思路。 展开更多

关键词 稀有糖 D-阿洛酮糖3-差向异构酶 分子改造 生物转化

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硫模块启动子对提高L-甲硫氨酸的生物合成的影响及发酵培养条件的优化 被引量：2

3

作者 金利群 金伟熔 柳志强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期8-16,共9页

研究生物合成硫模块对L-甲硫氨酸产量的影响并优化了发酵条件。利用实验室构建的重组菌株,用trc启动子替换基因组上cysK的组成型启动子,在质粒pA*H上插入glpE和nrdH基因;通过构建PG3启动子文库,获得转录强度最高的p32启动子,进一步优化... 研究生物合成硫模块对L-甲硫氨酸产量的影响并优化了发酵条件。利用实验室构建的重组菌株,用trc启动子替换基因组上cysK的组成型启动子,在质粒pA*H上插入glpE和nrdH基因;通过构建PG3启动子文库,获得转录强度最高的p32启动子,进一步优化硫模块,最后通过对培养基的优化提高了硫代硫酸盐的供给,从而提高L-甲硫氨酸产量。结果表明:使用构建得到的E.coli W3110 JAHFEBL trc-cysK/pA*H-p32-nrdH-glpE菌株,发酵48 h后L-甲硫氨酸摇瓶水平产量达到1.3 g/L,较对照组提升了41.5%;通过对培养基的进一步优化,L-甲硫氨酸产量最终达到2.3 g/L,相比未优化的发酵水平提高了77.0%,且该研究为其他含硫氨基酸的生物合成提供了基础。 展开更多

关键词 L-甲硫氨酸 启动子优化 硫同化模块 生物合成 硫代硫酸盐

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瑞舒伐他汀侧链(3R,5S)-6-R-取代基-3,5-二羟基己酸叔丁酯合成研究进展 被引量：2

4

作者 何人宝 胡忠梁 +4 位作者 金逸中 林娇华 张晓健 王亚军 柳志强 《发酵科技通讯》 CAS 2017年第3期188-192,共5页

瑞舒伐他汀是一种高效的羟甲戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂,能有效降低低密度脂蛋白(LDL)胆固醇,且无副作用,被称为"超级他汀".瑞舒伐他汀是由疏水性母核和开环侧链构成,其手性侧链是合成中的难点.目前,化学法和生物酶法... 瑞舒伐他汀是一种高效的羟甲戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂,能有效降低低密度脂蛋白(LDL)胆固醇,且无副作用,被称为"超级他汀".瑞舒伐他汀是由疏水性母核和开环侧链构成,其手性侧链是合成中的难点.目前,化学法和生物酶法合成瑞舒伐他汀关键手性侧链(3R,5S)-6-R-取代基-3,5-二羟基己酸叔丁酯受到研究者广泛的关注.主要介绍了不对称还原合成(3R,5S)-6-R-取代基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的研究进展. 展开更多

关键词 (3R 5S)-6-R-取代基-3 5-二羟基己酸叔丁酯 瑞舒伐他汀 手性中间体 不对称还原

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耐高温葡萄糖异构酶重组菌发酵与转化条件研究 被引量：2

5

作者 贾东旭 周霖 +6 位作者 王腾 於淳安 廖承军 陈德水 王红艳 廖小颖 金利群 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期13-19,共7页

耐高温的葡萄糖异构酶(glucose isomerase,GI)在高温下可将D-葡萄糖异构化为D-果糖,获得的高果糖浆可作为甜味剂应用于食品诸多领域。对Thermus oshimai GI重组菌发酵产酶条件和全细胞转化D-葡萄糖生成D-果糖工艺进行研究。确定诱导温... 耐高温的葡萄糖异构酶(glucose isomerase,GI)在高温下可将D-葡萄糖异构化为D-果糖,获得的高果糖浆可作为甜味剂应用于食品诸多领域。对Thermus oshimai GI重组菌发酵产酶条件和全细胞转化D-葡萄糖生成D-果糖工艺进行研究。确定诱导温度28℃,诱导剂终浓度0.1 mmol/L,发酵培养基添加5 mmol/L Mn^(2+)的最优产酶发酵条件;将最优转化体系放大,包括20 g/L湿菌体、10 mmol/L Mn^(2+)和200 g/L底物,于95℃和pH 7.5条件下生物转化4 h,D-果糖得率高达57.34%。该工艺具备一步法生产F55型高果糖浆的可能性,可简化后续浓缩分离等步骤,为进一步使用食品安全的表达系统生产F55型高果糖浆提供理论依据。 展开更多

关键词 THERMUS oshimai葡萄糖异构酶 工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28b/ToGI D-葡萄糖 D-果糖 细胞催化 转化

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米曲霉脂肪酶催化鱼油酯酯交换制备高含量EPA/DHA甘油酯的研究 被引量：2

6

作者 郑建永 张石自 +2 位作者 王升帆 李俊 汪钊 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期111-114,共4页

利用米曲霉脂肪酶催化甘油酯型鱼油和乙酯型鱼油的酯酯交换反应制备高含量EPA/DHA甘油酯,考察了底物摩尔比、反应温度、酶添加量和摇床转速对酶催化反应的影响,得到了最优酶催化反应条件:甘油酯型鱼油与乙酯型鱼油摩尔比1∶3,酶添加量1... 利用米曲霉脂肪酶催化甘油酯型鱼油和乙酯型鱼油的酯酯交换反应制备高含量EPA/DHA甘油酯,考察了底物摩尔比、反应温度、酶添加量和摇床转速对酶催化反应的影响,得到了最优酶催化反应条件:甘油酯型鱼油与乙酯型鱼油摩尔比1∶3,酶添加量14%,反应温度70℃,摇床转速150 r/min。在最优的酶催化反应条件下反应18 h,产物甘油酯型鱼油EPA和DHA含量可达到39.72%。在优化条件下对米曲霉WZ007菌丝体重复使用6次,甘油酯型鱼油产品中的EPA和DHA含量仍保持在34.51%。 展开更多

关键词 脂肪酶 鱼油 EPA DHA 酯酯交换 米曲霉

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转氨酶的固定化及酶学性质研究 被引量：3

7

作者 董正伟 朱芳莹 +2 位作者 朱文渊 田宋奎 柳志强 《发酵科技通讯》 CAS 2016年第2期81-87,共7页

利用环氧树脂载体进行固定化转氨酶的研究,通过单因素优化确定了较优的酶固定化条件:ES-103b树脂载体、转氨酶和辅酶磷酸吡哆醛最佳质量比为50∶6∶5,在p H为7.0的1mol/L磷酸钾缓冲液介质中吸附25 h。将得到的固定化颗粒重新置于pH为9.0... 利用环氧树脂载体进行固定化转氨酶的研究,通过单因素优化确定了较优的酶固定化条件:ES-103b树脂载体、转氨酶和辅酶磷酸吡哆醛最佳质量比为50∶6∶5,在p H为7.0的1mol/L磷酸钾缓冲液介质中吸附25 h。将得到的固定化颗粒重新置于pH为9.0的100 mmol/L磷酸钾缓冲液中,30℃保温30 h。取出后置于pH为8.5的3 mol/L甘氨酸-NaOH缓冲液中,25℃保温12 h,制得固定化转氨酶,其比活力为52.7 U/g(湿载体),酶活回收率达到49.3%。酶学性质研究表明:固定化转氨酶催化反应最适pH、温度分别为7.0、50℃;固定化酶热稳定性及p H稳定性明显提高,50℃条件下的半衰期为20.2 d;在pH 8.0的三乙醇胺缓冲液中(4℃),10 d后酶活仍保持初始酶活的82.3%。 展开更多

关键词 转氨酶 固定化 磷酸吡哆醛 比酶活 酶学性质

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耐高温葡萄糖异构酶的全细胞固定化条件研究 被引量：1

8

作者 贾东旭 王腾 +4 位作者 孙嘉诚 金利群 廖承军 陈德水 王红艳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期8-15,共8页

对三羟甲基磷交联Thermus oshimai葡萄糖异构酶重组菌的固定化工艺进行研究。确定所用硅藻土载体粒径36.8μm、聚凝剂聚乙烯亚胺分子质量为70 000 Da、交联剂合成前体为四羟甲基硫酸磷;运用最优的固定化条件:0.3 g硅藻土、5 mmol/L Mn^(... 对三羟甲基磷交联Thermus oshimai葡萄糖异构酶重组菌的固定化工艺进行研究。确定所用硅藻土载体粒径36.8μm、聚凝剂聚乙烯亚胺分子质量为70 000 Da、交联剂合成前体为四羟甲基硫酸磷;运用最优的固定化条件:0.3 g硅藻土、5 mmol/L Mn^(2+)、0.12%(体积分数)聚乙烯亚胺絮凝1 h、1.5%(体积分数)三羟甲基硫酸磷交联1.5 h,所制备的固定化细胞酶活可达138.4 U/g。应用该催化剂于85℃和1 100 mmol/L D-葡萄糖底物条件下连续催化10批次,催化剂仍保留91%以上酶活,D-果糖转化率始终维持在51.7%以上。该工艺可以连续生产高果糖浓度高果糖浆,有效简化后续分离提取工艺,为进一步使用符合食品工业要求的表达系统连续制备高果糖浆奠定基础。 展开更多

关键词 THERMUS oshimai葡萄糖异构酶 工程菌Escherichia COLI BL21(DE3)/pET28b/ToGI 交联固定化 三羟甲基磷 高温异构化反应

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添加剂提高酶稳定性研究进展 被引量：5

9

作者 王亚军 曹块 《发酵科技通讯》 CAS 2016年第3期188-192,共5页

酶作为一种高效的生物催化剂,以其独特的优势广泛应用于化工、医药、食品、能源等各领域。然而,大多数酶在反应时会遇到高温、高盐、极端p H等逆境,容易造成酶的失活,进而降低生产效率,这严重限制其在工业上的推广和应用。因此,强化酶... 酶作为一种高效的生物催化剂,以其独特的优势广泛应用于化工、医药、食品、能源等各领域。然而,大多数酶在反应时会遇到高温、高盐、极端p H等逆境,容易造成酶的失活,进而降低生产效率,这严重限制其在工业上的推广和应用。因此,强化酶稳定性已成为当前研究的热点和难点。添加稳定剂是一种简单、经济、有效的提高酶稳定性的方法,对几种不同类型添加剂的特点及其在改善酶稳定性方面的应用作了综述,并从结构和功能的角度进一步解释了相关机理。 展开更多

关键词 酶 稳定性 添加剂

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微生物醛酮还原酶结构、功能及其在生物催化中的应用 被引量：6

10

作者 史丽珍 应彬彬 王亚军 《发酵科技通讯》 CAS 2017年第4期198-204,共7页

微生物醛酮还原酶(AKR)作为醛酮还原酶超家族的重要构成之一,广泛存在于自然界的各种微生物中,可对一系列天然和非天然的底物进行代谢.通常,微生物AKR是大小约为37 kDa的单体蛋白,具有典型的(α/β)8桶状结构和保守的辅酶结合区域.微生... 微生物醛酮还原酶(AKR)作为醛酮还原酶超家族的重要构成之一,广泛存在于自然界的各种微生物中,可对一系列天然和非天然的底物进行代谢.通常,微生物AKR是大小约为37 kDa的单体蛋白,具有典型的(α/β)8桶状结构和保守的辅酶结合区域.微生物AKR是NAD(P)H依赖型氧化还原酶,遵循由催化四联体Asp-Tyr-Lys-His推动的强制顺序反应机制.许多微生物AKR被应用于不同的生物转化中,主要包括木糖醇、维生素C前体2-酮-L-古龙酸和各类医药、化工中间体手性醇的合成. 展开更多

关键词 醛酮还原酶 分类 结构 生物催化 手性醇

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他克莫司的发酵生产研究 被引量：4

11

作者 傅立峰 金美英 +3 位作者 单昱东 曹小燕 刘鹏 柳志强 《发酵科技通讯》 CAS 2018年第1期38-42,47,共6页

他克莫司属于第四代免疫抑制剂,是一种大环内酯类抗生素,具有较强的免疫抑制特性.首先对他克莫司生产菌株摇瓶发酵培养条件进行了优化,种子培养基中以1.5g/L的葡萄糖为碳源,种子培养时间40h,接种量10%,500mL摇瓶发酵培养基装液量为20mL... 他克莫司属于第四代免疫抑制剂,是一种大环内酯类抗生素,具有较强的免疫抑制特性.首先对他克莫司生产菌株摇瓶发酵培养条件进行了优化,种子培养基中以1.5g/L的葡萄糖为碳源,种子培养时间40h,接种量10%,500mL摇瓶发酵培养基装液量为20mL.进一步在20t发酵罐中进行放大实验,采取分批补料方式在第4天和第5天进行补料,控制溶氧在20%,最终他克莫司的质量浓度为1 150μg/mL.此外,通过对发酵提取技术和下游分离纯化工艺进行优化,发现粗提取时选择活性炭PT-A303进行萃取、脱色处理,再经过结晶、Q5亲和层析,可有效地去除结构类似物杂质,得到质量稳定的产品,最终他克莫司的收率达86.6%,纯度达99.5%. 展开更多

关键词 他克莫司 发酵 提取 精制

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维生素生物制造研究现状与展望

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作者 黄良刚 周俊平 +2 位作者 蔡雪 柳志强 郑裕国 《食品科学技术学报》 2025年第3期14-25,共12页

维生素是一类可维持生物体正常生理功能的重要有机小分子物质,大部分维生素人体无法自主合成,因而需要通过食物或药品补充以满足自身需求。随着健康饮食理念的不断深化以及“双碳”战略的深入推进,发展维生素生物制造技术具有重要意义... 维生素是一类可维持生物体正常生理功能的重要有机小分子物质,大部分维生素人体无法自主合成,因而需要通过食物或药品补充以满足自身需求。随着健康饮食理念的不断深化以及“双碳”战略的深入推进,发展维生素生物制造技术具有重要意义。我国作为全球维生素生产大国,在高端维生素及关键中间体生产领域仍存在技术瓶颈。以典型水溶性维生素B5(VB5)为例,系统总结了维生素合成技术的发展现状,阐述了VB5从第一代化学合成技术、第二代化学-酶催化或酶催化技术到第三代全生物发酵合成技术的研究进展及其合成路线,介绍了维生素制造技术的迭代变迁。重点梳理了糖摄取系统强化、中心碳代谢流重定向、辅因子平衡、竞争途径调控及转运系统优化等多策略在VB5第三代全生物发酵合成技术中的应用,提出了系统代谢工程改造耦联发酵工艺优化等跨学科的研究方向,旨在推动维生素生物制造技术的持续创新,为我国维生素产业的高质量发展和国际竞争力的提升提供有力保障。 展开更多

关键词 维生素 生物制造 维生素B5 代谢工程 绿色制造

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产S-腺苷蛋氨酸酵母菌的诱变选育 被引量：3

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作者 秦海彬 牛坤 王远山 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期23-27,共5页

以选育产S-腺苷蛋氨酸的高产酿酒酵母菌株为目标,利用常温常压等离子体和137 Csγ-射线对菌株进行诱变。通过5轮常温常压等离子体诱变和4轮γ-射线诱变,结合乙硫氨酸、制霉菌素抗性筛选,获得突变株AC-10,摇瓶发酵48 h,其S-腺苷蛋氨酸产... 以选育产S-腺苷蛋氨酸的高产酿酒酵母菌株为目标,利用常温常压等离子体和137 Csγ-射线对菌株进行诱变。通过5轮常温常压等离子体诱变和4轮γ-射线诱变,结合乙硫氨酸、制霉菌素抗性筛选,获得突变株AC-10,摇瓶发酵48 h,其S-腺苷蛋氨酸产量达到1.15 g/L,与出发菌株相比提高了130.0%。摇瓶发酵最适条件为30℃、初始pH 5.5。经5 L发酵罐分批补料发酵68 h,S-腺苷蛋氨酸产量达到5.62 g/L。 展开更多

关键词 S-腺苷蛋氨酸 酿酒酵母 诱变选育

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琥珀酸半醛脱氢酶GabD4的表达、纯化及酶学性质分析 被引量：1

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作者 贾东旭 刘东 郑裕国 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期97-101,共5页

人工合成琥珀酸半醛脱氢酶Gab D4基因,经蛋白表达和纯化,对其酶学性质进行研究。结果表明,Gab D4的最适反应温度为37℃;最适p H为7.5（磷酸盐缓冲液）或9.0（甘氨酸-氢氧化钠缓冲液）;金属离子中,Cu2＋对Gab D4酶活力的影响较大;Gab D4... 人工合成琥珀酸半醛脱氢酶Gab D4基因,经蛋白表达和纯化,对其酶学性质进行研究。结果表明,Gab D4的最适反应温度为37℃;最适p H为7.5（磷酸盐缓冲液）或9.0（甘氨酸-氢氧化钠缓冲液）;金属离子中,Cu2＋对Gab D4酶活力的影响较大;Gab D4对3~5个碳的醛底物具有更高的催化效率;以乙醛为底物,计算得到米氏常数（Km）、最大反应速率（Vmax）分别为6.86 mmol/L和20.6μmol/（min·mg protein）。该结果为深入了解Gab D4的酶学性质提供参考。 展开更多

关键词 醛脱氢酶 重组表达 分离纯化 酶学性质

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补料分批发酵条件优化提高D-泛酸的产量

15

作者 周海岩 周斌 +2 位作者 邹树平 张博 柳志强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期8-13,共6页

D-泛酸是一种B族维生素,广泛应用于饲料、食品、医药等行业。由于化学法合成D-泛酸的成本高、环境污染大,采用生物发酵法生产D-泛酸显得尤为重要。为了实现重组大肠杆菌DPA21/pBCST3D的高产,在5 L发酵罐水平进行了发酵参数的优化,并在... D-泛酸是一种B族维生素,广泛应用于饲料、食品、医药等行业。由于化学法合成D-泛酸的成本高、环境污染大,采用生物发酵法生产D-泛酸显得尤为重要。为了实现重组大肠杆菌DPA21/pBCST3D的高产,在5 L发酵罐水平进行了发酵参数的优化,并在补料分批发酵实验中对β-丙氨酸和葡萄糖的流加方式和浓度进行优化,进一步提高了D-泛酸的产量。通过优化确定了培养条件为温度30℃、pH 6.8、溶氧15%;β-丙氨酸补料方式为与葡萄糖混合且质量浓度为40 g/L,通过比较2种不同的葡萄糖流加方式,最终选择以脉冲式5~10 g/L的补料方式进行。在以上的发酵条件下,D-泛酸的产量达到41.5 g/L,较初始条件下提高了41.3%。研究结果为D-泛酸的工业化生产奠定了基础。 展开更多

关键词 大肠杆菌 D-泛酸 Β-丙氨酸 发酵优化 补料分批发酵

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不同醛脱氢酶对重组克雷伯氏菌生产3-羟基丙酸的影响

16

作者 贾东旭 陈铁男 +3 位作者 周佳锋 牛坤 秦海彬 金利群 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期15-21,共7页

PCR扩增Cupriavidus necator Gab D4和Azospirillum brasilense KGSADH醛脱氢酶基因,分别与经改造获得卡那霉素抗性的p UC19质粒(p UC19Kan)连接,再转化至Klebsiella pneumoniae DSM2026,获得重组菌KpKan/KGSADH和KpKan/Gab D4。经摇瓶... PCR扩增Cupriavidus necator Gab D4和Azospirillum brasilense KGSADH醛脱氢酶基因,分别与经改造获得卡那霉素抗性的p UC19质粒(p UC19Kan)连接,再转化至Klebsiella pneumoniae DSM2026,获得重组菌KpKan/KGSADH和KpKan/Gab D4。经摇瓶发酵,KpKan/KGSADH和KpKan/Gab D4的最高3-羟基丙酸(3-HP)产量分别为3.66与2.56 g/L,与未导入醛脱氢酶的K.pneumoniae对照菌相比,分别提高了352%与216%。对其他产物的研究表明,2株重组菌的1,3-丙二醇(1,3-PDO)的产量低于对照菌,而2,3-丁二醇(2,3-BD)和乙酸产量高于对照菌。该研究首次将C.necator Gab D4醛脱氢酶基因导入K.pneumoniae,并对比了KpKan/KGSADH与KpKan/Gab D4的3-HP产量,实验中确定的性能优良的发酵菌株为继续提高3-HP产量提供了帮助。 展开更多

关键词 克雷伯氏菌 甘油 醛脱氢酶 3-羟基丙酸

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来源于Rhodohalobacter barkolensis的昆布多糖酶RbLam16的重组表达及生产条件优化

17

作者 周海岩 周建宝 +2 位作者 易晓男 李勉 柳志强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期9-15,共7页

为实现昆布多糖酶的异源表达以及提高工程菌的产酶水平,将来源于Rhodohalobacter barkolensis的昆布多糖酶RbLam16基因经密码子优化后克隆至pPIC9K质粒,并重组到毕赤酵母GS115中。分泌表达的重组酶经镍柱纯化后对其酶学性质进行表征;为... 为实现昆布多糖酶的异源表达以及提高工程菌的产酶水平,将来源于Rhodohalobacter barkolensis的昆布多糖酶RbLam16基因经密码子优化后克隆至pPIC9K质粒,并重组到毕赤酵母GS115中。分泌表达的重组酶经镍柱纯化后对其酶学性质进行表征;为提高酶的表达量,对重组毕赤酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明:RbLam16能够在毕赤酵母GS115中高效分泌表达;以来源于海带的昆布多糖作为水解底物时,RbLam16最适反应温度及pH分别为55℃和pH 7.0;通过热稳定性及pH稳定性研究发现,RbLam16在55℃保温30 min后,残留酶活力在90%以上;在50 mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.0)中保存24 h后残留酶活力高达90%;金属离子Mn 2+和Co 2+对酶活力有促进作用,而Cu 2+、乙二胺四乙酸和十二烷基硫酸钠可严重抑制酶活力。发酵条件优化结果显示,在发酵液初始pH为6.0、培养温度为28℃以及每24 h添加体积分数1.5%的甲醇条件下发酵120 h,发酵上清液中酶活力达到27.42 U/mL,与初始酶活力相比提高了26.42%。RbLam16的高效催化水平以及较高的热稳定性和酸碱耐受力为其在食品、能源开发等领域的应用提供更多的可能。 展开更多

关键词 昆布多糖酶 毕赤酵母 异源表达 酶学性质

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定点饱和突变提高L-脯氨酸-4-羟化酶的酶活 被引量：2

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作者 周海岩 李会帅 +1 位作者 王培 柳志强 《发酵科技通讯》 CAS 2018年第4期193-198,共6页

为了提高L-脯氨酸-4-羟化酶(P4H)合成反式-4-羟基-L-脯氨酸(4-Hyp)的能力,首先对实验室前期构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET-28b-p4h的P4H进行三维结构模拟和"热点"氨基酸分析,选择了7个位于"疏水口袋"附... 为了提高L-脯氨酸-4-羟化酶(P4H)合成反式-4-羟基-L-脯氨酸(4-Hyp)的能力,首先对实验室前期构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET-28b-p4h的P4H进行三维结构模拟和"热点"氨基酸分析,选择了7个位于"疏水口袋"附近的氨基酸残基(Y205,K207I241,F137,T142,V53和R45)进行定点饱和突变,得到P4H酶活力明显提高的突变型酶F137R和Y205K。采用F137R和Y205K催化转化0.35g/L L-脯氨酸产物4(Hyp质量浓度分别为55.09mg/L和52.29mg/L),比野生型酶分别提高了58%和50%。经过分子对接比较发现,突变型P4H的活性中心没有发生显著变化,酶活的提高可能是由于突变作用使蛋白构型发生了轻微改变,增加了该酶与底物或辅底物的亲和力引起的。该结果为进一步利用P4H生物合成4-Hyp提供了重要的理论基础。 展开更多

关键词 L-脯氨酸4-羟化酶 反式-4-羟基-L-脯氨酸 生物催化 定点饱和突变

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代谢工程改造Escherichia coli生产3-羟基丙酸

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作者 程秀丽 秦海彬 +1 位作者 熊涛 牛坤 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期35-41,共7页

以提高3-羟基丙酸的产量为目标,对实验室构建的基因工程大肠杆菌进行改造,敲除形成副产物1,3-丙二醇的主要酶基因——乙醛脱氢酶基因yqh D,得到E.coli W3110Δyqh D(p CDFDuet-tac-gpd1-TUkgsadh/p ACYCDuet-tac-dha B1-4),该工程菌摇... 以提高3-羟基丙酸的产量为目标,对实验室构建的基因工程大肠杆菌进行改造,敲除形成副产物1,3-丙二醇的主要酶基因——乙醛脱氢酶基因yqh D,得到E.coli W3110Δyqh D(p CDFDuet-tac-gpd1-TUkgsadh/p ACYCDuet-tac-dha B1-4),该工程菌摇瓶发酵产量达到2.53 g/L,相比未敲除yqh D基因的菌株,产量提高了5.8倍。另外,敲除了甘油代谢途径中的抑制因子glpR基因,得到E.coli W3110ΔglpR(p CDFDuet-tac-gpd1-TUkgsadh/p ACYCDuet-tac-dha B1-4),该工程菌摇瓶发酵产量达到2.86 g/L,相比未敲除glpR基因的菌株,产量提高了6.7倍。后经5 L罐发酵培养后,3-羟基丙酸的产量提升到15.4 g/L。该实验为进一步利用大肠杆菌工程菌发酵生产3-羟基丙酸提供了研究基础。 展开更多

关键词 3-羟基丙酸 甘油代谢 基因敲除 重组大肠杆菌

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醇脱氢酶不对称还原2-[3-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-羟基丙基]苯甲酸甲酯

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作者 余道福 张晓健 +2 位作者 黄建峰 陈翔 柳志强 《发酵科技通讯》 CAS 2016年第4期220-225,共6页

孟鲁司特钠是主要的抗哮喘药物之一,2-[3-(S)-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-羟基丙基]苯甲酸甲酯是孟鲁斯特钠的关键手性砌块。以实验室筛选到的醇脱氢酶不对称还原2-[3-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-羟基丙基]苯甲酸甲... 孟鲁司特钠是主要的抗哮喘药物之一,2-[3-(S)-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-羟基丙基]苯甲酸甲酯是孟鲁斯特钠的关键手性砌块。以实验室筛选到的醇脱氢酶不对称还原2-[3-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-羟基丙基]苯甲酸甲酯,制备2-[3-(S)-[3-[2-(7-氯-2-喹啉基)乙烯基]苯基]-3-羟基丙基]苯甲酸甲酯。在辅酶添加量为0.1 g/L,底物浓度为219.3 mmol/L,菌体用量为30 g/L,p H 7.5,45℃反应7 h后,底物转化率达到100%,时空产率为31.2 mmol/(L·h),产物e.e.值大于99.9%。通过分批补料,反应5 h,底物转化率达到100%,e.e.>99.9%,时空产率达43.7 mmol/(L·h),是一次性投料的1.4倍。 展开更多

关键词 醇脱氢酶 孟鲁司特钠 不对称还原

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