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WSSV对锯缘青蟹的致病性及血清酶指标影响
被引量：
12
1
作者
刘问
钱冬
+1 位作者
潘清清
严小军
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期1112-1117,共6页
锯缘青蟹(Scylla serrata)俗称青蟹,是我国重要的海水养殖蟹类。近年来,浙江、福建、广东等青蟹主要养殖地区出现了严重的青蟹病害。对浙江省养殖青蟹的发病原因和流行病学调查发现,白斑综合征病毒(White spotsyndrome virus,WSSV)与青...
锯缘青蟹(Scylla serrata)俗称青蟹,是我国重要的海水养殖蟹类。近年来,浙江、福建、广东等青蟹主要养殖地区出现了严重的青蟹病害。对浙江省养殖青蟹的发病原因和流行病学调查发现,白斑综合征病毒(White spotsyndrome virus,WSSV)与青蟹发病存在较大相关性。为进一步研究WSSV对青蟹的致病性和发病机理,作者采用白斑综合征病毒的除菌过滤液,以1∶10—1∶10000稀释度注射感染青蟹,结果表明1∶10、1∶100感染组的青蟹死亡率达100%,1∶1000感染组死亡率为66.7%,1∶10000感染组死亡率为38.9%。根据攻毒悬液的病毒浓度计算出WSSV对青蟹的LD50为1.19×106拷贝/只(7.93×103拷贝/g组织);取WSSV感染青蟹血淋巴进行PCR检测,攻毒死亡青蟹的WSSV检出率为100%,表明WSSV对青蟹有很强的致病力。分析病毒感染濒死蟹的血清酚氧化酶(PO)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)等主要酶指标,发现病毒感染青蟹的PO、POD和SOD活力明显低于对照组,而ALP、GPT和GOT的活力则明显高于对照组;用WSSV单克隆抗体对感染蟹进行免疫组化分析,发现WSSV主要侵染青蟹的鳃、甲壳下表皮、心脏、肠、胃等组织的上皮细胞,尤其以鳃上皮细胞损害最为严重。
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关键词
锯缘青蟹
白斑综合征病毒
致病性
酶指标
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职称材料
白斑综合征病毒单克隆抗体的制备及BA-ELISA方法的建立
被引量：
2
2
作者
刘问
钱冬
严小军
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第S1期49-52,共4页
白斑综合征病毒(white spot syndrom virus,WSSV)是甲壳类动物的重要病原,作者采用提纯的WSSV免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA法筛选阳性孔,经有限稀释法克隆,共得到3株能特异分泌抗WSSV的单克隆抗体(M...
白斑综合征病毒(white spot syndrom virus,WSSV)是甲壳类动物的重要病原,作者采用提纯的WSSV免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA法筛选阳性孔,经有限稀释法克隆,共得到3株能特异分泌抗WSSV的单克隆抗体(Mab)的杂交瘤细胞(1E9、1E10、4F5)。将3株杂交瘤细胞注射小鼠,制备腹水单克隆抗体,ELISA效价为1∶104~105。1E9、4F5的抗体亚型均为IgG1,1E10的抗体亚型为IgG2b。特异性实验表明:3株单抗与虾类病原桃拉综合征病毒(TSV)、罗氏沼虾诺达病毒(MrNV)、哈维氏弧菌(V.harveyi)均无交叉反应。Western bolt分析表明:单抗1E9与病毒28kD外膜蛋白特异性结合。采用生物素标记纯化后的单抗1E9,并建立了生物素-亲和素酶联免疫吸附法(Biotin-Adivin ELISA,BA-ELISA)用于WSSV的检测,该方法对提纯病毒的检测灵敏度约为4 ng,对病虾血淋巴的检测灵敏度达1∶25000。
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关键词
白斑综合征病毒
单克隆抗体
BA-ELISA
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职称材料
题名
WSSV对锯缘青蟹的致病性及血清酶指标影响
被引量：
12
1
作者
刘问
钱冬
潘清清
严小军
机构
宁波大学生命科学与生物工程学院
浙江省淡水水产研究所鱼病研究室
浙江省
三门县海洋与渔业局
出处
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期1112-1117,共6页
基金
浙江省重大科技攻关项目(2005C12038)资助
文摘
锯缘青蟹(Scylla serrata)俗称青蟹,是我国重要的海水养殖蟹类。近年来,浙江、福建、广东等青蟹主要养殖地区出现了严重的青蟹病害。对浙江省养殖青蟹的发病原因和流行病学调查发现,白斑综合征病毒(White spotsyndrome virus,WSSV)与青蟹发病存在较大相关性。为进一步研究WSSV对青蟹的致病性和发病机理,作者采用白斑综合征病毒的除菌过滤液,以1∶10—1∶10000稀释度注射感染青蟹,结果表明1∶10、1∶100感染组的青蟹死亡率达100%,1∶1000感染组死亡率为66.7%,1∶10000感染组死亡率为38.9%。根据攻毒悬液的病毒浓度计算出WSSV对青蟹的LD50为1.19×106拷贝/只(7.93×103拷贝/g组织);取WSSV感染青蟹血淋巴进行PCR检测,攻毒死亡青蟹的WSSV检出率为100%,表明WSSV对青蟹有很强的致病力。分析病毒感染濒死蟹的血清酚氧化酶(PO)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)等主要酶指标,发现病毒感染青蟹的PO、POD和SOD活力明显低于对照组,而ALP、GPT和GOT的活力则明显高于对照组;用WSSV单克隆抗体对感染蟹进行免疫组化分析,发现WSSV主要侵染青蟹的鳃、甲壳下表皮、心脏、肠、胃等组织的上皮细胞,尤其以鳃上皮细胞损害最为严重。
关键词
锯缘青蟹
白斑综合征病毒
致病性
酶指标
Keywords
Scylla serrata
WSSV
Pathogenicity
Enzyme activity
分类号
S945.4 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
白斑综合征病毒单克隆抗体的制备及BA-ELISA方法的建立
被引量：
2
2
作者
刘问
钱冬
严小军
机构
宁波大学生命科学与生物工程学院
浙江省淡水水产研究所鱼病研究室
出处
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第S1期49-52,共4页
基金
浙江省重大科技攻关项目(2005C12038)
浙江省科技厅院所重点资助项目(2006F12005)
文摘
白斑综合征病毒(white spot syndrom virus,WSSV)是甲壳类动物的重要病原,作者采用提纯的WSSV免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA法筛选阳性孔,经有限稀释法克隆,共得到3株能特异分泌抗WSSV的单克隆抗体(Mab)的杂交瘤细胞(1E9、1E10、4F5)。将3株杂交瘤细胞注射小鼠,制备腹水单克隆抗体,ELISA效价为1∶104~105。1E9、4F5的抗体亚型均为IgG1,1E10的抗体亚型为IgG2b。特异性实验表明:3株单抗与虾类病原桃拉综合征病毒(TSV)、罗氏沼虾诺达病毒(MrNV)、哈维氏弧菌(V.harveyi)均无交叉反应。Western bolt分析表明:单抗1E9与病毒28kD外膜蛋白特异性结合。采用生物素标记纯化后的单抗1E9,并建立了生物素-亲和素酶联免疫吸附法(Biotin-Adivin ELISA,BA-ELISA)用于WSSV的检测,该方法对提纯病毒的检测灵敏度约为4 ng,对病虾血淋巴的检测灵敏度达1∶25000。
关键词
白斑综合征病毒
单克隆抗体
BA-ELISA
Keywords
white spot syndrome virus(WSSV)
monoclonal antibodies
BA-ELISA
分类号
S945.4 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
WSSV对锯缘青蟹的致病性及血清酶指标影响
刘问
钱冬
潘清清
严小军
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
12
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
白斑综合征病毒单克隆抗体的制备及BA-ELISA方法的建立
刘问
钱冬
严小军
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
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