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虾源干酪乳杆菌对罗氏沼虾生长、免疫与抗病力影响的研究
1
作者 黄雷 王子位 +6 位作者 袁雪梅 郑阿钦 陈静 彭先启 钱涛 原居林 姚嘉赟 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第4期402-411,共10页
干酪乳杆菌是广泛应用于水产养殖中的益生菌,但其对罗氏沼虾的作用尚不明确。本实验从罗氏沼虾肠道中分离到一株乳酸菌GCGR-16株,对分离株进行形态学观察、生化特性鉴定、16S rRNA基因的PCR扩增及序列分析,以鉴定该菌株的种属。采用牛... 干酪乳杆菌是广泛应用于水产养殖中的益生菌,但其对罗氏沼虾的作用尚不明确。本实验从罗氏沼虾肠道中分离到一株乳酸菌GCGR-16株,对分离株进行形态学观察、生化特性鉴定、16S rRNA基因的PCR扩增及序列分析,以鉴定该菌株的种属。采用牛津杯法和时间-杀菌曲线试验(Time-kill assay,TKA)测定分离菌对副溶血弧菌的抑制作用。结果显示,GCGR-16株为革兰氏阳性菌,与干酪乳杆菌的生化特征一致,且与干酪乳杆菌ATCC393株16S rRNA基因序列的同源性达100%。牛津杯法结果显示,分离菌培养液过滤组(上清液)、培养液组(pH4.0)、中性菌液组(pH7.0)的抑菌圈直径分别为15 mm、13 mm和11 mm;TKA结果显示,GCGR-16株培养液滤液组中副溶血弧菌的OD600nm值始终低于PBS对照组,表明该菌滤液含副溶血弧菌的抑菌活性成分。为探究干酪乳杆菌GCGR-16株对罗氏沼虾生长、免疫反应及抗病力的影响,在罗氏沼虾日粮中分别添加2 kg/t和4 kg/t的分离菌冻干粉,于实验第84 d测定各组罗氏沼虾的生长参数,于实验前及实验后第7 d、14 d、28 d、42 d、56 d、84 d,通过体外吞噬活性试验测定各组虾不同时间点的血清对金黄色葡萄球菌的吞噬百分比(PP)和吞噬指数(PI),并采用试剂盒测定各组虾肝胰腺及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)的含量。于分离菌饲喂实验结束后,采用1.5×10^(6)cfu/mL副溶血弧菌对各组虾攻毒。结果显示,4 kg/t和2 kg/t干酪乳杆菌添加组罗氏沼虾的体质量和亩产量均显著高于对照组(P<0.05),其中4 kg/t组罗氏沼虾的生长性能最佳,其体质量与亩产量分别较对照组提高25.4%和20.2%;4 kg/t组和2 kg/t组罗氏沼虾血清在各时间点的PP、PI,肝胰腺及血清中SOD、CAT、LZM、AKP的含量均显著高于对照组(P<0.05)。攻毒后7 d各组虾均不同程度死亡,死亡虾均出现肝胰腺发白、糜烂萎缩等剖检症状,存活虾活动能力明显减弱,未攻毒组虾均健活。4 kg/t组与2 kg/t组罗氏沼虾的存活率均显著高于对照组(P<0.05),两个剂量干酪乳杆菌对罗氏沼虾的保护率分别为33.3%与25.9%。综上所述,本研究首次证实罗氏沼虾体内分离的干酪乳杆菌GCGR-16株可有效提高罗氏沼虾的生长、免疫及抗病性能,为虾源益生菌的开发提供科学依据。 展开更多
关键词 罗氏沼虾 干酪乳杆菌 细菌鉴定 免疫作用 抗病力
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两种四氢异喹啉类药物体外抗大口黑鲈蛙虹彩病毒效果的研究
2
作者 王慧 袁雪梅 +3 位作者 陈静 焦锦彪 葛海霞 姚嘉赟 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第5期465-472,共8页
为探究四氢异喹啉类药物β-咔啉-3-羧酸乙酯(β-CCE)和Boc-D-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(Boc-DTic-OH)对大口黑鲈蛙虹彩病毒(LMBV)的体外抗病毒效果,本研究利用显微观察法测定细胞病变(CPE)效应、荧光定量PCR(qPCR)法检测病毒拷贝数以及... 为探究四氢异喹啉类药物β-咔啉-3-羧酸乙酯(β-CCE)和Boc-D-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(Boc-DTic-OH)对大口黑鲈蛙虹彩病毒(LMBV)的体外抗病毒效果,本研究利用显微观察法测定细胞病变(CPE)效应、荧光定量PCR(qPCR)法检测病毒拷贝数以及CCK-8法测定细胞活力,从阻断、抑制及直接杀灭3个方面,分析β-CCE和Boc-D-Tic-OH的体外抗LMBV的活性。结果显示,β-CCE和Boc-D-Tic-OH对胖头鱼肌肉细胞(FHM)的安全浓度分别为10μg/mL和100μg/mL,阻断结果显示两种药物均可显著降低FHM的CPE,其阻断率均在95%以上,药物处理组病毒拷贝数极显著低于LMBV对照组(P<0.01);抑制结果显示,两种药物可一定程度降低FHM的CPE,10μg/mLβ-CCE处理组对病毒的抑制率为76.86%,β-CCE处理组以及100μg/mL、10μg/mL Boc-D-Tic-OH处理组病毒拷贝数均极显著低于LMBV对照组(P<0.01),β-CCE、Boc-D-Tic-OH发挥最好阻断效果的作用时间分别为2 h和1 h;药物作用6 h抑制效果最好;直接杀灭结果显示,0.1μg/mLβ-CCE能一定程度降低FHM的CPE,0.1μg/mLβ-CCE和10μg/mL Boc-D-Tic-OH对病毒的直接杀灭率最高,分别为90.93%和102.21%,且可极显著降低病毒拷贝数(P<0.01),两种发挥最佳直接杀灭作用的时间为2 h。上述结果表明,两种四氢异喹啉类药物均具有较好的体外抗LMBV效果,本研究为抗LMBV药物的研制提供参考。 展开更多
关键词 大口黑鲈 蛙虹彩病毒 四氢异喹啉类药物 抗病毒活性
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罗氏沼虾源弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及致病性分析 被引量：1
3
作者 赵梦瑶 陈静 +4 位作者 姚嘉赟 袁雪梅 黄雷 彭先启 张海琪 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第2期137-143,共7页
为探究患病罗氏沼虾的病原及其感染的防治措施,本研究从浙江省某养殖场采集10只患病罗氏沼虾的肝胰腺、鳃及肌肉样品分离获得一株优势菌。通过对该优势菌经革兰氏染色镜检及生化鉴定,结果表明分离菌为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freund... 为探究患病罗氏沼虾的病原及其感染的防治措施,本研究从浙江省某养殖场采集10只患病罗氏沼虾的肝胰腺、鳃及肌肉样品分离获得一株优势菌。通过对该优势菌经革兰氏染色镜检及生化鉴定,结果表明分离菌为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)。采用PCR分别扩增分离菌的16S r RNA和gyr B基因序列,测序后经BLAST检索与这两种基因同源性均最高的菌株;通过MEGA 7.0软件中的Clustal W方法将分离菌与从Gen Bank中获得的同源性较高的菌株序列进行多序列比对,采用MEGA 7.0软件中的邻接法构建分离菌与上述菌株16S r RNA和gyr B基因的系统发育树。BLAST检索结果显示,分离菌与弗氏柠檬酸杆菌(KC210829.1)16S r RNA基因序列的同源性高达99.93%;与弗氏柠檬酸杆菌(KF156750.1)gyr B基因序列的同源性达98.76%。16S r RNA和gyr B基因的进化树结果显示,分离菌均与弗氏柠檬酸杆菌聚为一支,且支持率高达99%。进一步表明引起罗氏沼虾发病的病原为弗氏柠檬酸杆菌。将分离菌分别以1.02×10^(9)cfu/m L~1.02×10^(4)cfu/m L 6种浓度感染健康罗氏沼虾,每日观察并记录罗氏沼虾的发病症状及死亡率,根据Probit回归法计算分离菌对罗氏沼虾的半数致死量(LD50)。结果显示,1.02×10^(6)cfu/m L以上浓度的弗氏柠檬酸杆菌均能够导致罗氏沼虾出现体型消瘦、行动迟缓无活力的症状,1.02×10^(5)cfu/m L以下浓度的弗氏柠檬酸杆菌并不致罗氏沼虾出现症状。经统计该菌株对罗氏沼虾的LD50为1.01×10^(7)cfu/m L,表明该菌株对罗氏沼虾的致病性较强。采用PCR分别检测该分离菌株的定居因子基因(cfa)、尿素酶基因簇(ure G、ure F、ure E、ure D)、Vi抗原基因(via B)、外膜蛋白基因(omp X)等7种毒力相关基因,结果显示该菌株分别扩增到375 bp(cfa)、119 bp(ure G)、300 bp(ure F)、247 bp(ure E)、243 bp(ure D)、875 bp(via B)及250 bp(oomp X)的7种毒力基因。采用K-B纸片扩散法测定分离菌对10类共35种药物的敏感性,结果显示该分离菌对β-内酰胺类的头孢他啶和头孢曲松、多肽素类的多黏菌素B、氨基糖苷类的庆大霉素以及拉氧头孢这5种药物敏感,对β-内酰胺类的青霉素、氯霉素类的氟苯尼考、多肽类的万古霉素及苯唑醂、克林霉素和新生霉素等27种药物呈不同程度的耐药性,且为多重耐药菌。综上所述,本研究从患病罗氏沼虾中分离到了一株弗氏柠檬酸杆菌,该菌携带多种毒力基因,对罗氏沼虾的致病性较强,为进一步研究弗氏柠檬酸杆菌对水产动物的致病性及对罗氏沼虾弗氏柠檬酸杆菌病的防治提供参考依据。 展开更多
关键词 罗氏沼虾 弗氏柠檬酸杆菌 致病性 毒力基因 药敏分析
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快速检测十足目虹彩病毒1 RPA-LFD方法的建立及初步应用 被引量：5
4
作者 袁雪梅 陈静 +5 位作者 黄雷 蔺凌云 潘晓艺 彭先启 焦锦彪 姚嘉赟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期505-510,共6页
为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察... 为建立一种高效、快速、简便的十足目虹彩病毒1(DIV1)检测方法,本研究以DIV1 ATPase基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,采用方阵法优化反应温度和时间,结果显示,重组酶聚合酶扩增技术(RPA)最优反应温度为37℃,时间为15 min,结果观察时间为5 min,检测过程总时长为20 min,初步建立了DIV1的重组酶聚合酶扩增技术结合侧向流试纸条方法(RPA-LFD)。提取其他7种常见虾类病原基因组与DIV1基因组,采用该方法检测,分析其特异性;构建重组质粒标准品p UC57-DIV1,10倍倍比稀释后采用该方法检测,分析其灵敏性;以3种不同浓度的重组质粒标准品为模板进行批间、批内重复性试验。结果显示,该方法能特异性检测DIV1,与虾类其他常见易感病原均无交叉反应;其对重组质粒标准品的检测限为1×10^(1)拷贝/μL;批内和批间重复性试验的检测结果均一致,重复性好。利用该方法与已发表的荧光定量PCR(qPCR)同时检测15份感染DIV1的罗氏沼虾样品及40份临床样品,结果显示,该方法的阳性检测率为69.09%(38/55),阴性率为30.91%(17/55),与q PCR检测结果一致,二者的阳性符合率、阴性符合率、总符合率均为100%。综上所述,本研究建立的RPA-LFD方法检测DIV1具有快速、简便、灵敏度高且特异性强的特点,且不需要精密昂贵的仪器设备,为基层实验室及现场检测提供了可行技术手段。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增 侧向流试纸条技术 十足目虹彩病毒I
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黄颡鱼杆套病毒TaqMan qPCR检测方法的建立与应用
5
作者 王亿文 潘晓艺 +4 位作者 蔺凌云 刘思玉 姚嘉赟 王甘翔 沈锦玉 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2024年第6期48-56,共9页
黄颡鱼杆套病毒(Yellow catfish nidovirus,YCNdV)是近年来在养殖黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)中新发现的病毒性病原,为找到灵敏检测该病毒的方法,本研究根据YCNdV的衣壳基因序列设计特异性引物及探针,对反应体系和反应条件进行优化... 黄颡鱼杆套病毒(Yellow catfish nidovirus,YCNdV)是近年来在养殖黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)中新发现的病毒性病原,为找到灵敏检测该病毒的方法,本研究根据YCNdV的衣壳基因序列设计特异性引物及探针,对反应体系和反应条件进行优化,建立了TaqMan qPCR方法,并与套氏PCR进行了临床样品的检出率比较。结果显示:反应体系优化后的引物和探针终浓度分别为0.4μmol/L和0.1μmol/L,获得的最佳退火延伸温度为58℃,该条件下,最低检测限为4 copies的pMD19-YCNdV.cap质粒标准品;标准曲线线性关系好且线性范围广(3.37×10^(10)~3.37×100 copies/μL),相关系数(R^(2))为0.9984,扩增效率为91.3%;特异性检测结果表明,与黄颡鱼小RNA病毒(Yellow catfish picornavirus,YCPrV)、草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型(Grass carp reovirus genotypeⅡ,GCRV-Ⅱ)、鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)、大口黑鲈弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV)、大口黑鲈蛙虹彩病毒(Largemouth bass virus,LMBV)、传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)、鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)和锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)均无交叉扩增信号;重复性实验结果显示,组间和组内变异系数均小于0.6%;对保存的32份疑似黄颡鱼杆套病毒感染样品进行检测,结果表明,TaqMan qPCR检出率较套氏PCR高9.37个百分点;TaqMan qPCR检测发病黄颡鱼各组织发现,在脾、鳃和肾中YCNdV病毒载量显著高于其它组织。以上结果表明,本研究建立的TaqMan qPCR检测方法具有良好的特异性、重复性和超高的灵敏度,可用于YCNdV的定量检测,为YCNdV引起疾病的早防早治提供可靠检测手段。 展开更多
关键词 黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco) 杆套病毒 TaqMan qPCR 组织分布
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鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)灭活疫苗制备及其免疫效力测定 被引量：2
6
作者 潘晓艺 蔺凌云 +5 位作者 朱悦 姚嘉赟 尹文林 刘忆瀚 陈凡 沈锦玉 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1143-1150,共8页
鲫造血器官坏死病是由鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)引起的危害我国养殖鲫鱼(Carassius auratus)最严重的病毒性疾病。为制备有效预防鲫造血器官坏死病的灭活疫苗,以CyHV-2代表流行株CNDF-TB2015为疫苗株,以CSC细胞系进行病毒增殖,并采用不同... 鲫造血器官坏死病是由鲤疱疹病毒2型(CyHV-2)引起的危害我国养殖鲫鱼(Carassius auratus)最严重的病毒性疾病。为制备有效预防鲫造血器官坏死病的灭活疫苗,以CyHV-2代表流行株CNDF-TB2015为疫苗株,以CSC细胞系进行病毒增殖,并采用不同浓度的病毒对不同规格鲫鱼进行攻毒,建立攻毒模型。结果表明,培养的病毒滴度达10^(10)TCID_(50)/mL,以4×10^(7)TCID_(50)/尾的剂量腹腔注射感染体重300 g的鲫鱼可造成100%的死亡率。对病毒灭活剂甲醛、β-丙内酯和BEI灭活条件进行筛选优化,对疫苗免疫佐剂763A、IMS1312、铝胶和M402进行筛选,结果表明,浓度为10^(8.3) TCID_(50)/mL的病毒液最佳灭活条件为终浓度10 mmol/L的BEI 37℃灭活72 h,疫苗制备最佳佐剂为水佐剂IMS1312。对灭活疫苗的最小免疫剂量、最佳免疫剂量和有效免疫产生期进行测定,结果表明,要获得70%以上保护率的最小免疫剂量为8×10^(6)TCID_(50)/尾,最佳免疫剂量为4×10^(7)TCID_(50)/尾,在免疫4周后保护率可达80%,5周后保护率达到100%。制备的灭活疫苗为鲫造血器官坏死病的免疫预防提供了有力手段,也为其他水产动物病毒灭活疫苗的制备提供了借鉴。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒2型 鲫造血器官坏死病 灭活疫苗 免疫效力
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大口黑鲈虹彩病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：14
7
作者 巩金鹏 潘晓艺 +5 位作者 蔺凌云 姚嘉赟 黄雷 尹文林 刘忆瀚 沈锦玉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期508-513,543,共7页
为建立大口黑鲈虹彩病毒(LMBV)荧光定量PCR检测方法,本研究基于LMBV的主要衣壳蛋白(MCP)基因设计特异性引物及Taq Man探针,通过反应条件的优化,建立了LMBV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法以pMD-LMBV-MCP重组质粒为标准品... 为建立大口黑鲈虹彩病毒(LMBV)荧光定量PCR检测方法,本研究基于LMBV的主要衣壳蛋白(MCP)基因设计特异性引物及Taq Man探针,通过反应条件的优化,建立了LMBV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法以pMD-LMBV-MCP重组质粒为标准品,建立的标准曲线在4.6×10^(2)拷贝/μL~4.6×10^(8)拷贝/μL浓度范围内与Ct值具有良好的线性关系,相关系数(R2)为1,扩增效率(E)为99.2%。利用本实验建立的方法对传染性脾肾坏死病毒、大口黑鲈弹状病毒、神经坏死病毒、鲤春病毒血症病毒、草鱼呼肠弧病毒、传染性造血器官坏死病毒及LMBV进行检测,结果显示,该方法仅对LMBV产生特异性扩增,其他病原均为阴性,特异性强;该方法对重组质粒标准品的检测下限为46拷贝/μL,是常规PCR检测方法(4.6×10^(3)拷贝/μL)的100倍,敏感性高;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2.5%,重复性好。利用该方法对30份临床样品进行检测,结果显示LMBV阳性率为40%,显著高于常规PCR的13.3%;另外利用该方法对人工感染LMBV的大口黑鲈各组织进行病毒载量测定,结果显示其胃、肝、肠、脾和心脏的病毒载量高于其他组织。本研究建立的Taq Man荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于临床LMBV的检测和流行病学调查,为LMBV感染的早期诊断提供可靠的检测方法。 展开更多
关键词 大口黑鲈 蛙虹彩病毒 TaqMan荧光定量PCR
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抗大口黑鲈(Micropterus salmoides)蛙虹彩病毒药效模型的构建及其抗病毒中药筛选 被引量：5
8
作者 李秋语 黄小红 +9 位作者 郝贵杰 胡大雁 张成赛 牛晨 袁雪梅 黄雷 于喆 姚嘉赟 杨桂连 姜建湖 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1513-1522,共10页
大口黑鲈蛙虹彩病毒(LMBV)是一种严重危害大口黑鲈养殖的病害,但目前缺乏有效的防控手段。通过研究水温、鱼体大小以及攻毒剂量等条件对大口黑鲈感染蛙虹彩病毒的影响,构建体内抗病毒药效筛选模型,同时利用MTT法构建体外药物筛选模型,... 大口黑鲈蛙虹彩病毒(LMBV)是一种严重危害大口黑鲈养殖的病害,但目前缺乏有效的防控手段。通过研究水温、鱼体大小以及攻毒剂量等条件对大口黑鲈感染蛙虹彩病毒的影响,构建体内抗病毒药效筛选模型,同时利用MTT法构建体外药物筛选模型,进而通过体外和体内药效模型,对29种中草药进行抗病毒药效评价,对筛选出药效最佳的2种中药进行体外和体内抗病毒药效评价。结果表明:水温和鱼体大小是影响体内药效模型的2个关键因子,最佳体内药效模型条件为:水温为25℃,鱼体大小20 g,攻毒剂量为0.1 mL 10^(9.33) TCID_(50)/mL。结合体内和体外药效模型结果,筛选出紫花地丁和黄连这2种中药具有较好的抗病毒效果的中草药。体内药效结果表明:黄连和地丁的添加量为0.6 g/kg和1.2 g/kg时,其对大口黑鲈的保护率最高均达到40%,而两者用药后病毒在肝组织的抑制率分别可达71.5%和67.0%。组织病理学结果表明,当药物使用浓度为0.6 g/kg和1.2 g/kg时,可有效降低因大口黑鲈蛙虹彩病毒感染所导致的肝和肾等组织的病理学损伤。上述结果表明,黄连和地丁均具有较好的抗蛙虹彩病毒的作用。 展开更多
关键词 大口黑鲈(Micropterus salmoides) 蛙虹彩病毒 抗病毒模型 紫花地丁 黄连
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体外传代对大口黑鲈蛙虹彩病毒毒株毒力的影响 被引量：4
9
作者 王丛旭 潘晓艺 +5 位作者 周可欣 穆雪娇 姚嘉赟 蔺凌云 赵建华 沈锦玉 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期623-629,共7页
为研究不同代次大口黑鲈蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus,LMBV)的病毒特性变化及毒力差异,采用攻毒试验、qPCR、TCID 50及二代测序的方法,对LMBV分离株(LMBV-ZJDSS)F5、F35和F65进行致病性、组织中病毒载量变化、病毒滴度和不同... 为研究不同代次大口黑鲈蛙虹彩病毒(Largemouth bass ranavirus,LMBV)的病毒特性变化及毒力差异,采用攻毒试验、qPCR、TCID 50及二代测序的方法,对LMBV分离株(LMBV-ZJDSS)F5、F35和F65进行致病性、组织中病毒载量变化、病毒滴度和不同代次病毒基因组测序,在LMBV全基组中筛选出4个毒力基因,并对不同地区毒株的毒力基因进行分析。结果表明:攻毒浓度为108.5 TCID 50/mL时,F5、F35和F65代毒株15 d内引起大口黑鲈(Micropterus salmoides)的死亡率分别为60%、25%和5%;F65代毒株最早产生细胞病变效应(cytopathic effect,CPE);大口黑鲈肝脏、脾脏和肠的病毒载量较高,不同代次毒株在各组织中均有分布,96 h内F65代毒株在各器官组织的病毒载量呈上升趋势,48 h内F5代毒株在各器官组织的病毒载量呈上升趋势;对F5和F65代毒株的全基因组测序分析显示,E3、TNFR和ICP18基因编码区未发生突变,遗传稳定性较高,ICP46基因编码区有一处氨基酸由天冬氨酸突变为酪氨酸。研究表明,通过病毒的连续传代,病毒致细胞病变的速度加快,病毒对大口黑鲈的致病性减弱,病毒的毒力有所下降,毒力下降的原因可能是编码ICP46蛋白的氨基酸发生突变,且不同地区LMBV毒株毒力基因差异主要集中在TNFR上。 展开更多
关键词 大口黑鲈 大口黑鲈蛙虹彩病毒 体外传代 毒力基因
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基于SecA基因的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法的建立及进化分析 被引量：2
10
作者 周可欣 潘晓艺 +6 位作者 蔺凌云 黄雷 穆雪姣 王丛旭 姚嘉赟 劳顺健 沈锦玉 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1553-1560,共8页
为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法... 为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法应用于临床样品的检测。结果表明,优化后,引物和探针终浓度分别为0.3和0.1μmol/L,退火延伸温度60℃时,qPCR在9.85×1010—9.85×100copies内呈良好的线性关系,灵敏度最高达9.85 copies;重复性实验结果显示,组间和组内变异系数均小于1%;特异性结果表明,对无乳链球菌、弗氏柠檬酸杆菌和维氏气单胞菌等13种病菌均无扩增曲线;临床对42份大口黑鲈样品进行检测,结果表明,qPCR检出率比普通PCR提高14.24%;对发病大口黑鲈的组织及结节部位检测显示,结节部位菌载量大幅高于非结节部位,最高相差1000倍;SecA基因分析结果显示,SecA基因在传代中和种内高度保守,种间具有一定的离散性,是个很好的用于诺卡氏菌种鉴定的靶基因。研究建立的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法灵敏性高、特异性强、重复性好,可用于对鰤鱼诺卡氏菌病的早期诊断和定量检测,为诺卡氏菌病的早诊断早治疗提供了有效手段。 展开更多
关键词 鰤鱼诺卡氏菌 qPCR 诺卡氏菌病 大口黑鲈
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