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eGfp/Gus融合基因植物表达载体的构建和转化验证被引量：4: 1; 作者吴学龙何海燕 +1 位作者刘智宏黄锐之《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期645-650,共6页; 绿色荧光蛋白(Gfp)基因和葡萄糖醛酸糖苷酶(Gus)基因是广泛应用的2个报告基因,在定性和定量研究基因表达和启动子功能等方面各有优劣。为联合使用这2个报告基因,根据报告基因序列设计2对带有特异限制性内切酶位点的引物,PCR法分别扩增... 展开更多; 关键词 eGfp/Gus双报告基因植物表达载体瞬时表达转基因表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究被引量：9: 2; 作者杨坤吴学龙 +1 位作者朗春秀陈锦清《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第10期5002-5005,共4页; [目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用改良CTAB法提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再通过两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。[结果]两轮巢式PCR扩增... 展开更多; 关键词反向PCR 侧翼序列改良CTAB法转基因油菜; 在线阅读下载PDF 职称材料

甘蓝型油菜PEP转运子BnPPT1基因的克隆、序列分析和表达模式被引量：2: 3; 作者杨坤吴学龙 +2 位作者郎春秀刘智宏陈锦清《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期1-7,共7页; 磷酸烯醇式丙酮酸/磷酸转运子基因(Phosphoenolpyruvate/phosphate translocator1,PPT1)是细胞质体碳水化合物转运的一个关键基因,在植物莽草酸代谢和脂肪酸生物合成途径中起着重要作用。根据十字花科拟南芥PEP转运子AtPPT1基因序列与... 展开更多; 关键词 BnPPT1 基因克隆序列分析甘蓝型油菜; 在线阅读下载PDF 职称材料

甘蓝型油菜BnPex16p基因cDNA的克隆与表达: 4; 作者吴学龙刘智宏 +2 位作者何海燕郎春秀陈锦清《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期203-209,共7页; 利用模式植物拟南芥AtPex16p/SSE1基因序列与油菜数据库BBSRC BrassicaDB比对,得到甘蓝型油菜(Brassica napus)同源EST序列,拼接出油菜Pex16p基因全长cDNA电子克隆,然后设计全长引物,以甘蓝型油菜种子cDNA为模板,克隆Pex16p基因,得到全... 展开更多; 关键词过氧化物酶体油菜Pex16p基因序列分析甘蓝型油菜; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名eGfp/Gus融合基因植物表达载体的构建和转化验证被引量：4: 1; 作者吴学龙何海燕刘智宏黄锐之; 机构浙江省植物基因工程代谢重点实验室浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所; 出处《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期645-650,共6页; 基金 "863"研究计划(2008AA02Z103) 浙江省自然科学基金项目(Y306097); 文摘绿色荧光蛋白(Gfp)基因和葡萄糖醛酸糖苷酶(Gus)基因是广泛应用的2个报告基因,在定性和定量研究基因表达和启动子功能等方面各有优劣。为联合使用这2个报告基因,根据报告基因序列设计2对带有特异限制性内切酶位点的引物,PCR法分别扩增增强型Gfp(eGfp)和Gus基因,连接到植物表达载体pF-GC5941中,构建含CaMV35S启动子驱动的eGfp/Gus基因融合表达载体,命名为pFGC-DR。注射农杆菌法转化烟草叶片,以及花器官农杆菌浸泡法转化拟南芥,发现融合基因成功地在烟草叶片中瞬时表达和在拟南芥中稳定表达,表明融合报告基因在烟草和拟南芥中都能高效表达。; 关键词 eGfp/Gus双报告基因植物表达载体瞬时表达转基因表达; Keywords eGfp/Gus dual reporter gene plant expression vector transient expression transgenic plants; 分类号 Q943.2 [生物学—植物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究被引量：9: 2; 作者杨坤吴学龙朗春秀陈锦清; 机构浙江师范大学化学与生命科学学院浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省植物基因工程代谢重点实验室; 出处《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第10期5002-5005,共4页; 基金国家"863"计划项目(2006AA10A113) 浙江省自然科学基金项目(Y306097); 文摘 [目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用改良CTAB法提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再通过两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。[结果]两轮巢式PCR扩增得到1个大小为4.0kb的片段,其序列与油菜数据库中BH652424和BZ044084两序列同源性分别高达97.8%和63.4%。根据序列比对结果设计特异引物对进行PCR验证的结果,也证明了FS4转基因油菜中T-DNA的确插入在该位点。[结论]优化后的IPCR条件能成功分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。; 关键词反向PCR 侧翼序列改良CTAB法转基因油菜; Keywords Inverse PCR （IPCR） Flanking sequences Improved CTAB method Transgenic Brassica napus; 分类号 S565.4 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名甘蓝型油菜PEP转运子BnPPT1基因的克隆、序列分析和表达模式被引量：2: 3; 作者杨坤吴学龙郎春秀刘智宏陈锦清; 机构浙江师范大学化学与生命科学学院浙江省植物基因工程代谢重点实验室; 出处《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期1-7,共7页; 基金国家重点基金项目(30430450) 浙江省自然科学基金资助项目(Y306097); 文摘磷酸烯醇式丙酮酸/磷酸转运子基因(Phosphoenolpyruvate/phosphate translocator1,PPT1)是细胞质体碳水化合物转运的一个关键基因,在植物莽草酸代谢和脂肪酸生物合成途径中起着重要作用。根据十字花科拟南芥PEP转运子AtPPT1基因序列与油菜数据库BBSRC Brassica DB中相应ESTs设计全长引物,以甘蓝型油菜(Brassica napus)幼嫩叶片基因组DNA和种子cDNA为模板,克隆到了甘蓝型油菜PEP转运子基因全长序列,命名为BnPPT1。该基因基因组gDNA全长为2 075 bp,含有8个内含子,编码区长度为1 224 bp,编码407个氨基酸。序列比对结果表明,BnPPT1与同属于十字花科拟南芥AtPPT1转运子同源性很高,仅有个别氨基酸的差异。进一步采用半定量RT-PCR分析表明,BnPPT1基因在油菜各器官中表达差异很大,在幼嫩的子叶和茎中有较高丰度的表达,在中早期发育的种子中表达丰度逐步升高,种子成熟后期没有表达,暗示该基因在油菜籽粒中油份等物质积累中有重要功能。; 关键词 BnPPT1 基因克隆序列分析甘蓝型油菜; Keywords BnPPT1 molecular cloning sequence analysis Brassica napus; 分类号 S635.9 [农业科学—蔬菜学] Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名甘蓝型油菜BnPex16p基因cDNA的克隆与表达: 4; 作者吴学龙刘智宏何海燕郎春秀陈锦清; 机构浙江省植物基因工程代谢重点实验室; 出处《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期203-209,共7页; 基金国家863计划(2006AA10A1132007AA02Z128) 浙江省自然科学基金(Y306097); 文摘利用模式植物拟南芥AtPex16p/SSE1基因序列与油菜数据库BBSRC BrassicaDB比对,得到甘蓝型油菜(Brassica napus)同源EST序列,拼接出油菜Pex16p基因全长cDNA电子克隆,然后设计全长引物,以甘蓝型油菜种子cDNA为模板,克隆Pex16p基因,得到全长为1 101bp的cDNA,编码366个氨基酸的蛋白,命名为BnPex16p。Bn-Pex16p基因序列与拟南芥AtPex16p/SSE1同源,其蛋白与拟南芥同源蛋白具有完全相同的PTS2型过氧化物酶体定位肽,进化关系相近。半定量PCR(RT-PCR)发现BnPex16p基因在油菜幼嫩的根、茎、叶和种子中均有高丰度表达,在种子发育过程的中期和后期表达水平增加,暗示该基因在油脂的积累中有重要作用。; 关键词过氧化物酶体油菜Pex16p基因序列分析甘蓝型油菜; Keywords Peroxisome BnPexl6p Sequence analysis Brasslca napus; 分类号 Q785 [生物学—分子生物学] S565.4 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	eGfp/Gus融合基因植物表达载体的构建和转化验证	吴学龙何海燕刘智宏黄锐之	《浙江农业学报》 CSCD 北大核心	2011	4	在线阅读下载PDF 职称材料
2	优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究	杨坤吴学龙朗春秀陈锦清	《安徽农业科学》 CAS 北大核心	2010	9	在线阅读下载PDF 职称材料
3	甘蓝型油菜PEP转运子BnPPT1基因的克隆、序列分析和表达模式	杨坤吴学龙郎春秀刘智宏陈锦清	《浙江农业学报》 CSCD 北大核心	2011	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	甘蓝型油菜BnPex16p基因cDNA的克隆与表达	吴学龙刘智宏何海燕郎春秀陈锦清	《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料