硝普钠抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡的实验研究 被引量：4

1

作者 周永列 吕亚萍 +3 位作者 邱莲女 何国浓 林惠君 王文松 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2004年第12期1381-1387,共7页

目的 :观察外源性一氧化氮 (NO)供体硝普钠对K5 6 2细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用。方法 :将不同浓度的硝普钠与K5 6 2细胞在体外培养 ,观察其作用时间效应和剂量效应 ;用活细胞计数、MTT法观察硝普钠对K5 6 2细胞增殖的抑制作用 ;用... 目的 :观察外源性一氧化氮 (NO)供体硝普钠对K5 6 2细胞增殖抑制及诱导细胞凋亡作用。方法 :将不同浓度的硝普钠与K5 6 2细胞在体外培养 ,观察其作用时间效应和剂量效应 ;用活细胞计数、MTT法观察硝普钠对K5 6 2细胞增殖的抑制作用 ;用DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin V PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。同时设高铁氰化钾 (PFC)对照组和空白对照组。结果 :NO能抑制K5 6 2细胞生长 ,并在一定的剂量范围内呈现作用时间和剂量的量效关系 ,大部分细胞阻滞于G0 G1期 ;K5 6 2细胞与硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变 ,DNA片断化 ,亚G1峰检出并显著增加 ,AnnexinV PI和DNA片段原位末端标记表达增加等均证实NO能诱导K5 6 2细胞凋亡。而对照组并无此类变化。结论 :NO通过阻滞G0 G1期细胞显著抑制K5 6 2细胞的增殖 ,并有很强的致凋亡作用。 展开更多

关键词 硝普钠/一氧化氮 细胞株 K562 增殖 细胞凋亡

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木瓜蛋白酶体外对血小板聚集的抑制作用 被引量：13

2

作者 费鲜明 周永列 +3 位作者 祁金文 吴建国 邱莲女 王珍妮 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2009年第8期906-911,共6页

目的:以洗涤血小板为模型,观察木瓜蛋白酶在体外对血小板聚集的抑制作用,以探讨其抗血栓作用的可能机制。方法:将不同剂量木瓜蛋白酶与洗涤血小板作用,以血小板聚集分析仪检测ADP、花生四烯酸(AA)、胶原和凝血酶诱导的血小板最大聚集率... 目的:以洗涤血小板为模型,观察木瓜蛋白酶在体外对血小板聚集的抑制作用,以探讨其抗血栓作用的可能机制。方法:将不同剂量木瓜蛋白酶与洗涤血小板作用,以血小板聚集分析仪检测ADP、花生四烯酸(AA)、胶原和凝血酶诱导的血小板最大聚集率,以流式细胞仪检测活化血小板膜纤维蛋白原受体(FIB-R)和P-选择素表达水平,以SDS-PAGE分析血小板肌动蛋白聚合体的变化。检测ADP诱导的原发性高血压(PH)及急性心肌梗死(AMI)患者血小板最大聚集率和FIB-R表达水平。结果:木瓜蛋白酶剂量依赖性地抑制血小板聚集,降低血小板最大聚集水平,血小板聚集水平与木瓜蛋白酶剂量呈负相关(P<0.01)。木瓜蛋白酶剂量依赖性地抑制ADP诱导的血小板FIB-R表达,降低FIB-R表达水平(P<0.01)。木瓜蛋白酶降低ADP诱导的血小板膜P-选择素表达水平和抑制肌动蛋白聚合体增加(P<0.01)。木瓜蛋白酶抑制PH及AMI患者血小板聚集和FIB-R表达(P<0.01)。结论:木瓜蛋白酶通过抑制活化血小板膜纤维蛋白原受体的表达,并抑制肌动蛋白聚合以及释放反应从而剂量依赖性地抑制血小板的聚集反应,有抗血栓形成作用。 展开更多

关键词 木瓜蛋白酶 血小板聚集 纤维蛋白原受体 P-选择素 肌动蛋白聚合体

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四嗪二甲酰胺抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡的研究 被引量：10

3

作者 周永列 吕亚萍 +4 位作者 胡惟孝 邱莲女 王文松 杨忠愚 刘建栋 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期754-759,共6页

目的观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡作用。方法将不同浓度的ZGDHu-1与HepG2细胞在体外培养,用台盼蓝染色、MTT法、5′-溴-2′脱氧尿苷(B rdu)-ELISA法观察ZGDHu-1对HepG2细胞增殖的抑制作用;用细... 目的观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肝癌细胞株HepG2增殖并诱导细胞凋亡作用。方法将不同浓度的ZGDHu-1与HepG2细胞在体外培养,用台盼蓝染色、MTT法、5′-溴-2′脱氧尿苷(B rdu)-ELISA法观察ZGDHu-1对HepG2细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记、Ho-echst33258荧光染色和ELISA法测定DNA片段等技术检测细胞凋亡。结果ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系。HepG2细胞与ZG-DHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期;出现典型的细胞形态改变,DNA片断化,亚G1峰检出并增加,Annexin V+/PI-表达升高,细胞内DNA片段含量增加,Hoechst33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HepG2细胞凋亡。结论ZGDHu-1能抑制HepG2细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡。 展开更多

关键词 四嗪二甲酰胺 肝癌 细胞株 HepG2 增殖 细胞凋亡

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Bcl-2,Bax和线粒体膜蛋白在一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡中的改变 被引量：6

4

作者 周永列 邱莲女 +3 位作者 林惠君 王文松 吴建国 刘建栋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第4期445-449,共5页

本研究探讨外源性一氧化氮 (NO)供体硝普钠 (SNP)对HL 6 0细胞诱导凋亡的可能机制。将HL 6 0细胞与SNP在体外培养 ,用DNA片段原位末端标记法 (TUNEL)测定原位细胞凋亡率 ;用流式细胞仪测定细胞DNA倍体和周期分析及Bcl 2、Bax、线粒体膜... 本研究探讨外源性一氧化氮 (NO)供体硝普钠 (SNP)对HL 6 0细胞诱导凋亡的可能机制。将HL 6 0细胞与SNP在体外培养 ,用DNA片段原位末端标记法 (TUNEL)测定原位细胞凋亡率 ;用流式细胞仪测定细胞DNA倍体和周期分析及Bcl 2、Bax、线粒体膜蛋白表达率的变化。结果表明 :SNP可诱导HL 6 0细胞凋亡 ,两者之间有明显的量效和时效关系。 1.0mmol/LSNP作用 4 8小时后 ,HL 6 0细胞的凋亡率分别为亚二倍体峰 (4 2 .2± 3.5 ) % ,TUNEL测定凋亡细胞率为 (5 2 .5± 7.6 ) % ,显著高于空白对照组和同浓度的高铁氰化钾 (PFC)组 ;Bax基因蛋白和线粒体膜蛋白 (APO2 .7)表达增加 ,bcl 2基因蛋白表达降低。Bax、Bcl 2和APO2 .7的表达率与SNP两者之间也有明显的量效和时效关系。结论 :外源性一氧化氮供体诱导HL 6 0细胞凋亡过程中 ,线粒体膜蛋白表达显著上调并伴随Bax和Bcl 2蛋白的表达改变。 展开更多

关键词 一氧化氮 细胞凋亡 HL-60细胞 BCL-2蛋白 BAX蛋白 线粒体膜蛋白

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四嗪二甲酰胺体外诱导NB4细胞增殖、凋亡与分化作用的研究 被引量：6

5

作者 周永列 吕亚萍 +4 位作者 胡惟孝 邱莲女 王文松 吴建国 刘建栋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期880-886,共7页

为了观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)对白血病细胞株NB4的增殖、分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。将不同浓度的ZGDHu-1与NB4细胞在体外培养,并以全反式维甲酸作阳性药物对照,观察ZGDHu-1对NB4细胞增殖抑制、凋亡和分化的作用。... 为了观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)对白血病细胞株NB4的增殖、分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。将不同浓度的ZGDHu-1与NB4细胞在体外培养,并以全反式维甲酸作阳性药物对照,观察ZGDHu-1对NB4细胞增殖抑制、凋亡和分化的作用。用流式细胞术检测ZGDHu-1诱导NB4细胞分化和调亡过程中bcl-2和bax的表达变化,以及P38MAPK和STAT3磷酸化水平,同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT-mRNA表达的变化。结果表明:ZGDHu-1对NB4细胞增殖和活力抑制呈时间和剂量的量效关系,48和72小时的IC50分别为450和200ng/ml。NB4细胞经ZGDHu-1作用后,大部分细胞阻滞于G2-M期,G0/1期细胞减少;细胞出现典型的形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加,Annexin-V/PI标记升高;Hoechst33258荧光染色后见凋亡细胞的特征性改变,这些均证实ZGDHu-1能诱导NB4细胞凋亡。NB4细胞经2-100ng/mlZGDHu-1作用3天后,细胞部分分化,NBT阳性率增加,细胞表面CD11b、CD13表达增高。ZGDHu-1作用NB4细胞后,bcl-2表达无变化,但bax表达显著增加,bax/bcl-2的比值升高,磷酸化P38MAPK表达增强,而磷酸化STAT3表达无变化,端粒酶hTERT-mRNA的表达随ZGDHu-1作用的浓度增加而显著下调。结论:ZGDHu-1能抑制NB4细胞增殖,诱导细胞分化,促进细胞凋亡,其机制可能与bax表达上调、P38MAPK活化增强和端粒酶逆转录酶受抑有关。 展开更多

关键词 四嗪二甲酰胺 NB4细胞株 有丝分裂原激活蛋白激酶 BAX/BCL-2 端粒酶逆转录酶 白血病

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硝普钠诱导K562细胞凋亡机制的研究 被引量：5

6

作者 周永列 吕亚萍 +2 位作者 邱莲女 王文松 林惠君 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期983-988,共6页

为了研究外源性一氧化氮供体硝普钠诱导K562细胞凋亡机制,将不同浓度的硝普钠与K562细胞在体外培养,同时设高铁氰化钾(PFC)对照组和空白对照。用AnnexinV/PI双标记、DNA片段原位末端标记法、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析等方法... 为了研究外源性一氧化氮供体硝普钠诱导K562细胞凋亡机制,将不同浓度的硝普钠与K562细胞在体外培养,同时设高铁氰化钾(PFC)对照组和空白对照。用AnnexinV/PI双标记、DNA片段原位末端标记法、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析等方法检测细胞凋亡;用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位(ΔΨm);以双氢罗丹明123(dihydrorhodamin123,DRH)和2',7'二氯双氢荧光素二乙酸酯(2',7'dichlorodihydrofluoresceindiacetate,DCFHDA)为荧光探针,测定线粒体内和细胞胞质内过氧化物;用流式细胞术测定线粒体膜蛋白和bcl2、bax、bad、p53和Fas凋亡调控基因蛋白。结果表明:K562细胞经硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加,annexinV/PI和DNA片段原位末端标记表达增加,这些结果均证实NO能诱导K562细胞凋亡,大部分细胞阻滞于G0/G1期。硝普钠诱导K562细胞凋亡过程中,胞质和线粒体内活性氧自由基增加,线粒体跨膜电位降低,bcl2基因蛋白表达下调,同时bax、bad、p53、Fas和线粒体膜蛋白表达均上调。结论:NO诱导K562细胞凋亡是通过产生活性氧自由基,使p53基因表达增加,下调bcl2基因和使bax、bad基因表达上调,线粒体膜通渗性转运孔开放,ΔΨm降低来实现的,此外还存在Fas系统激活途径。 展开更多

关键词 硝普钠 一氧化氮 K562细胞 细胞凋亡 线粒体膜电位 活性氧自由基

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四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株SHI-1凋亡及其分子机制研究 被引量：5

7

作者 周永列 吕亚萍 +4 位作者 胡惟孝 邱莲女 王文松 刘建栋 吴建国 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期483-489,共7页

本研究探讨四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)诱导白血病细胞株SHI-1凋亡作用的机制。以不同浓度的ZGDHu-1在体外培养SHI-1细胞,用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Ho-echst33258荧光染色等分析细胞凋亡。用R... 本研究探讨四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)诱导白血病细胞株SHI-1凋亡作用的机制。以不同浓度的ZGDHu-1在体外培养SHI-1细胞,用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Ho-echst33258荧光染色等分析细胞凋亡。用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位(ΔΨm),用流式细胞术检测ZGDHu-1诱导SHI-1细胞凋亡过程中bcl-2、bax、p53、Fas蛋白和线粒体膜蛋白的表达变化。用RT-PCR观察经ZGDHu-1作用后SHI-1细胞bcl-2、bax、p53基因表达改变;同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT-mRNA表达的变化。结果表明:ZGDHu-1能诱导SHI-1细胞凋亡,呈作用时间和剂量的量效关系,出现典型的细胞形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加;Annexin-V/PI和Hoechst33258荧光染色后细胞发生凋亡的特征性改变。SHI-1细胞经不同浓度的ZGDHu-1体外培养后,bcl-2基因和蛋白有所下调,但主要是bax基因和蛋白上调,导致bax/bcl-2比值明显增高,p53基因和蛋白与Fas蛋白表达也上调,均呈剂量依赖性。随ZGDHu-1作用浓度的增加,ΔΨm下降,而线粒体膜蛋白表达显著升高,端粒酶hTERT-mRNA的表达显著下调。结论:ZGDHu-1通过上调p53基因、bax基因和bax/bcl-2比值,使线粒体跨膜电位显著下降的线粒体通路是ZGDHu-1诱导细胞凋亡的途径之一,Fas也参与其中,端粒酶有可能是其抗肿瘤的作用靶点。 展开更多

关键词 四嗪二甲酰胺 细胞株 SHI-1 细胞凋亡 线粒体 端粒酶

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四嗪二甲酰胺对白血病细胞株HL-60体外作用的研究 被引量：6

8

作者 周永列 吕亚萍 +4 位作者 胡惟孝 邱莲女 王文松 杨忠愚 刘建栋 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2006年第9期1006-1012,共7页

目的：观察四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）体外抑制白血病细胞株HL-60增殖，诱导细胞分化和凋亡作用，并对其作用机制进行初步探讨。方法：将不同浓度的ZGDHu-1与HL-60细胞在体外培养，台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用；... 目的：观察四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1）体外抑制白血病细胞株HL-60增殖，诱导细胞分化和凋亡作用，并对其作用机制进行初步探讨。方法：将不同浓度的ZGDHu-1与HL-60细胞在体外培养，台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用；用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V／PI双标记和DNA片段原位末端标记法等分析细胞凋亡。通过NBT试验、细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14、CD64和细胞形态学检测ZGDHu-1对HL-60细胞的分化作用。用Rh123／PI测定线粒体跨膜电位（△ψm），用流式细胞术检测Bcl-2、Box、P53、Fas和线粒体膜蛋白的表达变化。结果：ZGDHu-1呈现作用时间和剂量的量效性抑制HL-60细胞增殖和活力，10ng·ml^-1 ZGDHu-1作用HL-60细胞24～72h后，MTr法检测细胞增殖抑制率分别为（7．3±0．3）％、（15．8±1．0）％和（21．3±1．2）％，均显著高于对照组（P〈0．01）；48h、72h的IC50分别为180、180ng·ml^-1。HL-60细胞经ZGDHu-1作用后，大部分细胞阻滞于G2-M期，G0/1期细胞减少；出现典型的细胞形态改变，DNA片端化，经50～1000ng·ml^-1的ZGDHu-1作用后，SubG1由（3.2±1．6）％上升至（67．7±5.9）％，与对照组（0．7±0.5）％比较，具有显著性差异（P〈0．05），Annexin-V／PI标记升高，TUNEL染色后的凋亡细胞的特征性改变等均证实ZGDHu-1能诱导HL-60细胞凋亡。HL-60细胞经10～100ng·ml^-1 ZGDHu-1作用3d后，细胞发生部分分化，NBT阳性率增加，细胞表面CD11b、CD13、CD14、CD64表达增加。ZGDHu-1诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中，Bcl-2表达无变化，但Box表达显著增加，Bax／Bcl-2的比值升高，Fas表达增强，而P53表达无变化。随ZGDHu-1作用的浓度增加，△ψm下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高。结论：ZGDHu-1能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力，低浓度时诱导HL-60细胞向粒单系分化，高浓度时促进细胞凋亡，其机制可能与Bax表达上调，线粒体膜电位下降等有关。 展开更多

关键词 四嗪二甲酰胺 细胞株HL-60 细胞凋亡 细胞分化

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连续荧光监测法测定蛋白酶体活性及其在筛选蛋白酶体抑制剂中的应用 被引量：4

9

作者 周永列 吕亚萍 +1 位作者 许武林 胡惟孝 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2008年第10期1127-1133,共7页

目的:建立用连续荧光监测法测定蛋白酶体活性的方法,研究其在筛选蛋白酶体抑制剂中的应用价值。方法:用特异性荧光多肽底物Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(Suc-LLVT-AMC)、Z-Val-Val-Arg-AMC(ZVVA-AMC)、Z-Leu-Leu-Glu-βNA(ZLLG-βNA),分别... 目的:建立用连续荧光监测法测定蛋白酶体活性的方法,研究其在筛选蛋白酶体抑制剂中的应用价值。方法:用特异性荧光多肽底物Suc-Leu-Leu-Val-Tyr-AMC(Suc-LLVT-AMC)、Z-Val-Val-Arg-AMC(ZVVA-AMC)、Z-Leu-Leu-Glu-βNA(ZLLG-βNA),分别测定蛋白酶体的糜凝乳蛋白酶样(chy-motrypsin-like,CT-L)、胰蛋白酶样(trypsin-like,T-L)和肽基谷氨酰肽水解酶样(PGPH-like,PGPH-L)活性,对测定条件优化,并进行方法学评价。用该法测定了硼替佐米(PS-341)和四嗪二甲酰胺(ZG-DHu-1)对纯20S蛋白酶体和B16、Namalwa细胞蛋白酶体提取物抑制作用。结果:连续荧光监测法测定蛋白酶体活性的最适pH为8.2;0.3g/LSDS仅对CT-L活性有激活作用;CT-L、T-L、PGPH-L的Km分别为3.55、4.12、4.88μmol/L;酶反应进程曲线的线性期达20min;线性范围为测定纯20S蛋白酶体时,其蛋白浓度分别达100、120、100μg/L,测定B16细胞蛋白酶体提取物时,其蛋白浓度均达200mg/L;精密度的批内CV为(2.25～5.78),批间CV在(3.75～8.42)。用该法测定了PS-341对20S蛋白酶体CT-L、T-L、PGPH-L的抑制活性,其IC50分别为12.36、12.42、24.40nmol/L;测定ZGDHu-1对20S蛋白酶体抑制活性,IC50分别为2.24、0.92、0.51μmol/L。结论:连续荧光监测法测定蛋白酶体活性为快速、有效、大规模筛选蛋白体抑制剂类药物提供了一个技术平台,也为临床上应用蛋白酶体抑制剂治疗提供了一个有用的检测指标。 展开更多

关键词 连续荧光监测法 蛋白酶体 抑制剂 硼替佐米 四嗪二甲酰胺

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一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡过程中活性氧自由基和抗氧化能力的变化 被引量：3

10

作者 周永列 吕亚萍 +1 位作者 邱莲女 王文松 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期579-583,共5页

为了研究外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)诱导HL-60细胞凋亡过程中活性氧自由基和抗氧化能力的变化,将HL-60细胞与SNP在体外培养,用MTT法观察NO对细胞的抑制作用;用透射电子显微镜和光学显微镜观察细胞结构的变化;用DNA凝胶电泳、细... 为了研究外源性一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)诱导HL-60细胞凋亡过程中活性氧自由基和抗氧化能力的变化,将HL-60细胞与SNP在体外培养,用MTT法观察NO对细胞的抑制作用;用透射电子显微镜和光学显微镜观察细胞结构的变化;用DNA凝胶电泳、细胞DNA含量、Annexin-Ⅴ/PI法等分析细胞凋亡;用双氢罗丹明123(DHR)标记、流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS),并同时测定细胞内谷胱甘肽(GSH)和3种抗氧化酶的活性。结果表明:SNP能抑制HL-60细胞生长,典型的细胞形态改变、DNA片段化、亚二倍体峰比例增加、DNA末端标记和Annexin-Ⅴ+/PI-表达增加等证实NO能诱导白血病细胞凋亡,且两者之间有明显的量效和时效关系。在此过程中,细胞内ROS水平增加,细胞内谷胱甘肽和过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性降低。ROS含量和CAT、GST、GPX活性与SNP之间也有明显的量效关系。结论:细胞内活性氧自由基增加和抗氧化能力下降在外源性一氧化氮供体诱导HL-60细胞凋亡中发挥了重要作用。 展开更多

关键词 一氧化氮 硝普钠 细胞凋亡 HL-60细胞 活性氧 抗氧化能力

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大萼香茶菜甲素通过线粒体途径诱导HL-60白血病细胞凋亡 被引量：3

11

作者 吴建国 周永列 +6 位作者 夏大静 王珍妮 夏骏 邱莲女 吴茅 林慧君 费鲜明 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2009年第7期741-747,共7页

目的:观察大萼香茶菜甲素(macrocalyxinA,MA)体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法:不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexi... 目的:观察大萼香茶菜甲素(macrocalyxinA,MA)体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法:不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Ho-echst 33258荧光染色等分析其促细胞凋亡效应;流式细胞术和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax、P53、Fas、线粒体膜蛋白(Apo2.7)、线粒体跨膜电位(ΔΨm)与Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化水平,研究其促凋亡机制。结果:MA呈现作用时间和剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖和活力;HL-60细胞经MA作用后,Wright-Giemsa染色和Ho-echst荧光染色后细胞出现典型的凋亡小体,细胞阻滞于G0/G1期,DNA片段化,亚二倍体明显增高,Annexin-V/PI标记升高;MA诱导HL-60细胞凋亡过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白(Apo2.7)、caspase-3表达显著增加,Bax/Bcl-2比值升高,ΔΨm下降。结论:MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导细胞凋亡,其机制通过上调Bax基因和Bax/Bcl-2比值,使线粒体膜电位下降、膜通透性增高,最终使caspase-3激活而促进凋亡。 展开更多

关键词 大萼香茶菜甲素 白血病 细胞凋亡 线粒体

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金丝桃素对病毒性心肌炎小鼠慢性期的心肌保护作用 被引量：3

12

作者 李乐 张益玲 +2 位作者 陶厚权 丁宝兴 王本兰 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期363-366,共4页

目的探讨金丝桃素(Hyp)对病毒性心肌炎小鼠慢性期心肌损害的影响。方法 60只健康雄性Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立病毒性心肌炎心肌纤维化模型;另外10只注射Eagle's MEM液作为对照,两个月后存活小鼠随机分为4组:模型组... 目的探讨金丝桃素(Hyp)对病毒性心肌炎小鼠慢性期心肌损害的影响。方法 60只健康雄性Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立病毒性心肌炎心肌纤维化模型;另外10只注射Eagle's MEM液作为对照,两个月后存活小鼠随机分为4组:模型组,Hyp大、小剂量组,卡托普利组;分别以Hyp及卡托普利每日灌胃给药一次,对照组及模型组给予同体积的生理盐水,30 d后,观察各组小鼠死亡率及心肌病理改变;检测血清白介素-2(IL-2)、血清可溶性白介素-2受体(sIL-2R)、血清肌酸肌酶(CK),以及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达水平。结果与对照组相比,模型组小鼠死亡率显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);模型组小鼠心肌细胞肿胀、扭曲,纤维化程度明显,ICAM-1表达,IL-2、sIL-2R水平及CK活性升高,差异均有统计学意义(P<0.01);Hyp或卡托普利组小鼠的死亡率均比模型组低,心肌病理损害减轻,ICAM-1表达及血清IL-2、sIL-2R水平及CK活性降低。结论 Hyp对病毒性心肌炎慢性期的心肌损害有保护作用,可能与抑制ICAM-1的表达、降低血清IL-2、sIL-2R水平有关。 展开更多

关键词 心肌炎 金丝桃素 细胞间黏附分子 白细胞介素-2

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贯叶连翘提取物对扩张型心肌病大鼠血流动力学的影响 被引量：2

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作者 李乐 尚好 陶厚权 《浙江工业大学学报》 CAS 2013年第4期414-417,共4页

研究贯叶连翘提取物(Hypericum perforatum extract,HPE)对扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)大鼠血流动力学的影响.雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组(n=10)和模型组(n=46),模型组i.p盐酸多柔比星建立DCM模型,对照组给予等量... 研究贯叶连翘提取物(Hypericum perforatum extract,HPE)对扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)大鼠血流动力学的影响.雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组(n=10)和模型组(n=46),模型组i.p盐酸多柔比星建立DCM模型,对照组给予等量生理盐水;8周后DCM模型组存活大鼠随机分为治疗组(HPE组,n=13)和DCM模型组(n=17).治疗组i.g100mg/kg,每天2次,连续30d,对照组及DCM模型组给予等量生理盐水,MPA心功能分析仪测大鼠血流动力学指标.结果,DCM模型组大鼠一般情况恶化;治疗组大鼠死亡率显著下降,左心室收缩压(Left ventricular systolic pressure,LVSP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)均明显高于DCM组(p<0.05),左室舒张末压(Left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)明显低于DCM组(p<0.05).提示HPE能对抗DCM大鼠心衰,提高生存率,改善大鼠心脏的收缩及舒张功能. 展开更多

关键词 贯叶连翘提取物 大鼠 扩张性心肌病 血流动力学

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大萼香茶菜甲素对多发性骨髓瘤细胞株U266体外作用的研究 被引量：1

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作者 冯丽倩 周永列 +3 位作者 吕亚萍 夏骏 邱莲女 石浩 《中华中医药学刊》 CAS 2012年第4期723-726,I0002,共5页

目的:观察大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)体外对多发性骨髓瘤细胞株U266增殖、凋亡的作用,并初步探讨其机制。方法:以不同质量浓度的(2、4、8μg/mL)MA体外作用于U266细胞,运用细胞计数、PI染色、MTT比色法体外观察MA对U266细胞增... 目的:观察大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)体外对多发性骨髓瘤细胞株U266增殖、凋亡的作用,并初步探讨其机制。方法:以不同质量浓度的(2、4、8μg/mL)MA体外作用于U266细胞,运用细胞计数、PI染色、MTT比色法体外观察MA对U266细胞增殖抑制作用;采用细胞形态观察、Annexin V/PI双染色和DNA亚二倍体检测方法研究MA诱导U266细胞凋亡作用;用Western免疫印迹法检测β1、β1i、β2、β2i、β5、β5i、NF-κB、IκB-α蛋白表达。结果:MA抑制细胞增殖;MA可促进细胞凋亡,细胞瑞氏染色后出现典型的凋亡小体;AnnexinV+/P I-表达升高;亚G1峰显著增加;在Western免疫印迹中β2、β1i、β5i、NF-κB随着药物作用浓度的增高表达逐渐降低,而IκB为增高趋势,β1、β2、β2i无明显变化。结论:MA在体外对U266细胞增殖有明显抑制作用,并诱导细胞调亡。 展开更多

关键词 大萼香茶菜甲素 U266细胞 增殖 细胞凋亡

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硝普钠诱导K562细胞凋亡过程中STAT3/P38MAPK活化及端粒酶hTERT-mRNA表达的研究

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作者 周永列 吕亚萍 +4 位作者 吕火祥 邱莲女 王文松 林惠君 刘建栋 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期686-691,共6页

为了研究外源性一氧化氮供体硝普钠(SNP)诱导K562细胞凋亡过程中STAT3及P38MAPK活化及端粒酶hTERT-mRNA表达的变化,探讨硝普钠诱导K562细胞凋亡机制,用Annexin-V/PI双标记、DNA片段原位末端标记法、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析... 为了研究外源性一氧化氮供体硝普钠(SNP)诱导K562细胞凋亡过程中STAT3及P38MAPK活化及端粒酶hTERT-mRNA表达的变化,探讨硝普钠诱导K562细胞凋亡机制,用Annexin-V/PI双标记、DNA片段原位末端标记法、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析等方法检测细胞凋亡。用流式细胞术测定经硝普钠干预后K562细胞磷酸化P38MAPK和磷酸化STAT3的表达,同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT-mRNA表达的变化。结果表明K562细胞经硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变,DNA片段化,显现亚G1峰Ⅱ并显著增加。Annexin-V/PI和DNA片段原位末端标记表达增加。这些均证实NO能诱导K562细胞凋亡,大部分细胞阻滞于G0/G1期。SNP诱导K562细胞凋亡过程中,磷酸化P38MAPK和磷酸化STAT3的表达随SNP浓度的增加而表现为先增强后下降;K562细胞与2.0mmol/LSNP孵育不同的时间内,磷酸化P38MAPK的表达在12小时时达到高峰并持续至48小时,72小时后表达下降;磷酸化STAT3的表达在24小时时达高峰,48小时后表达即显著下降;端粒酶hTERT-mRNA的表达随SNP作用的浓度增加和时间延长而显著下调。结论SNP能诱导K562细胞凋亡,其机制可能与P38MAPK的活化、抑制端粒酶逆转录酶和STAT3的活化有关。 展开更多

关键词 硝普钠 一氧化氮 K562细胞 细胞凋亡 STAT3 P38MAPK 端粒酶 hTERT—mRNA

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信号转导抑制剂对TNFβ诱导L929细胞凋亡的研究 被引量：1

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作者 李芳芳 杨帆 +4 位作者 周晴 马志章 丁仁瑞 邱莲女 周永列 《浙江大学学报（理学版）》 CAS CSCD 2001年第2期189-195,共7页

本文采用 FDA- PI荧光染色 ,DNA电泳和流式细胞仪等实验手段研究了本实验室自行重组并纯化的人 TNFβ对 L92 9细胞的细胞毒效应 ,结果表明 TNFβ主要是诱导 L92 9细胞以凋亡的形式死亡 .实验还采用 8种信号转导抑制剂 ,观察它们对 TNF... 本文采用 FDA- PI荧光染色 ,DNA电泳和流式细胞仪等实验手段研究了本实验室自行重组并纯化的人 TNFβ对 L92 9细胞的细胞毒效应 ,结果表明 TNFβ主要是诱导 L92 9细胞以凋亡的形式死亡 .实验还采用 8种信号转导抑制剂 ,观察它们对 TNFβ杀伤 L92 9细胞的影响 ,以探讨细胞凋亡的信号转导途径 .初步研究表明 :磷脂酶 A2 ,Ca2 + 通道、丝氨酸蛋白酶的抑制剂能抑制 TNFβ对 L92 9细胞的杀伤 ,而且抑制剂的持续存在能更有效地发挥这一抑制作用 ;相反地 ,蛋白激酶 C和酪氨酸蛋白激酶的抑制剂可促进凋亡 ;而环加氧酶、磷脂酰肌醇 - 展开更多

关键词 人重组TNFβ 信号转导抑制剂 信号转导 L929细胞 细胞凋亡 细胞毒效应 抑制率 杀伤率

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大萼香茶菜甲素A通过抑制蛋白酶体诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡

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作者 陆玲娜 冯丽倩 +5 位作者 吕亚萍 夏骏 邱莲女 石浩 王卫忠 周永列 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1486-1491,共6页

本研究探讨大萼香茶菜甲素A(macrocalyxin A,MA)体外对多发性骨髓瘤细胞株蛋白酶体抑制作用及其诱导凋亡的分子机制。以不同浓度(2、4、8μg/ml)的MA体外作用于U266细胞,用Hochest染色法和Annexin V/PI双染色观察MA诱导U266细胞凋亡作用... 本研究探讨大萼香茶菜甲素A(macrocalyxin A,MA)体外对多发性骨髓瘤细胞株蛋白酶体抑制作用及其诱导凋亡的分子机制。以不同浓度(2、4、8μg/ml)的MA体外作用于U266细胞,用Hochest染色法和Annexin V/PI双染色观察MA诱导U266细胞凋亡作用;用Western blot检测泛素、蛋白酶体19S亚基S6'亚单位和蛋白酶体20S亚基中β1、β1i、β2、β2i、β5、β5i亚单位,以及BAD、BCL-2、FAS、FAS-L、MAPK、PARP、Pro-caspase 3、cleavedcaspase 3蛋白的表达。结果表明,随着MA作用时间的延长和剂量的增加,Hoechst 33258染色的细胞内出现致密颗粒或块状的荧光颗粒,Annexin V+/PI-细胞和总凋亡细胞(Annexin V+/PI-和Annexin V+/PI+)增加;MA可使U266细胞内泛素化水平增高,抑制20S蛋白酶体亚单位β1i、β2、β5i、和19S蛋白酶体泛素识别亚基S6'表达。与此同时,BCL-2、MAPK、PARP、pro-caspase 3表达随着药物作用浓度的增高而下调,BAD、FAS、FAS-L、cleaved-caspase 3表达则增加。结论:大萼香茶菜甲素A具有抑制蛋白酶体的作用,线粒体凋亡和死亡受体途径有可能参与MA诱导细胞的凋亡。 展开更多

关键词 大萼香茶菜甲素A 多发性骨髓瘤 U266细胞 细胞凋亡 蛋白酶体

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