家蚕孤雌生殖差异蛋白——热休克相关蛋白的生物信息学分析 被引量：5

1

作者 夏佳音 龙晓辉 +6 位作者 陈健 聂作明 王丹 吕正兵 徐杰 贺平安 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期568-573,共6页

应用双向凝胶电泳(2-DE)技术研究家蚕孤雌生殖蚁蚕和正常蚁蚕的总蛋白质的差异,得到与孤雌生殖相关的差异蛋白点,并对这些蛋白点进行基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF MS)分析,获得了相关差异蛋白的序列特征。将这... 应用双向凝胶电泳(2-DE)技术研究家蚕孤雌生殖蚁蚕和正常蚁蚕的总蛋白质的差异,得到与孤雌生殖相关的差异蛋白点,并对这些蛋白点进行基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF MS)分析,获得了相关差异蛋白的序列特征。将这些序列与已构建的家蚕cDNA文库及蛋白质数据库进行比对,得到3个差异蛋白为热休克相关蛋白。通过5-′RACE的方法克隆到3个差异蛋白的全基因序列,并对它们进行结构和特征分析,有助于进一步研究其与孤雌生殖的关系。 展开更多

关键词 家蚕 孤雌生殖 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱 差异蛋白 热休克蛋白 结构分析

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家蚕孤雌生殖差异脂蛋白30K lipoprotein precursor基因的克隆与生物信息学分析 被引量：4

2

作者 王丹 聂作明 +6 位作者 龙晓辉 刘立丽 陈健 吕正兵 陈芳 吴祥甫 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期205-210,共6页

应用二维凝胶电泳（2-DE）技术分离家蚕孤雌生殖蚁蚕总蛋白，并和正常蚁蚕总蛋白进行比较，得到46个可能与家蚕孤雌生殖相关的差异蛋白点。对这些差异蛋白点进行胶内酶解后基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱（MALDI-TOF-TOFMS）分... 应用二维凝胶电泳（2-DE）技术分离家蚕孤雌生殖蚁蚕总蛋白，并和正常蚁蚕总蛋白进行比较，得到46个可能与家蚕孤雌生殖相关的差异蛋白点。对这些差异蛋白点进行胶内酶解后基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱（MALDI-TOF-TOFMS）分析，经数据库搜索鉴定，确定其中一个差异蛋白点为脂蛋白30Klipoprotein precursor（30KLPP）。通过5′-RACE技术克隆到30KLPP脂蛋白的全长cDNA序列。生物信息学分析显示该差异蛋白基因全长917bp。编码261个氨基酸，理论分子质量为30．013kD，等电点为7．193；结构域和三级结构预测显示该蛋白包含1个Lipoprotein_11结构域和12个β-折叠。预测其信号肽概率为1．000，定位在1～20aa区域，即可能存在信号肽。细胞定位预测显示该蛋白可能分泌到胞外（SP值为0．934）。分析结果有助于进一步研究30KLPP脂蛋白结构与功能的关系。 展开更多

关键词 家蚕 孤雌生殖 脂蛋白30K LPP 基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱

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白介素-3研究进展 被引量：4

3

作者 张耀洲 吴祥甫 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第5期31-34,62,共5页

白细胞介素-3是白细胞介素家族重要成员之一,在机体的造血调节和免疫调节中起非常重要的作用。它的主要功能是能够迅速促进多能干细胞和各系祖细胞(与其他细胞因子协同作用)如CFU-GM、CFU-G、CFU-M、CFU-Meg、CFU-Ba的定向分化和成熟。I... 白细胞介素-3是白细胞介素家族重要成员之一,在机体的造血调节和免疫调节中起非常重要的作用。它的主要功能是能够迅速促进多能干细胞和各系祖细胞(与其他细胞因子协同作用)如CFU-GM、CFU-G、CFU-M、CFU-Meg、CFU-Ba的定向分化和成熟。IL-3与其他细胞因子的联合应用可增加化疗后肿瘤病人的中性粒细胞和血小板。 展开更多

关键词 白介素-3 肿瘤 干细胞 白细胞介素-3 CFU-GM 细胞因子 多能干细胞 中性粒细胞 协同作用 免疫调节 定向分化 祖细胞

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内皮抑素研究进展 被引量：2

4

作者 张耀洲 吴祥甫 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第1期1-5,11,共6页

内皮抑素是一种能够强烈抑制血管形成的抑制因子 ,能够有效地抑制肿瘤细胞的生长和转移 ,因此成为肿瘤研究领域的研究热点。就内皮抑素的发现 ,性质和结构 ,生物学功能 ,抑制作用机理 ,内皮抑素基因治疗以及目前在临床上的应用进行了简... 内皮抑素是一种能够强烈抑制血管形成的抑制因子 ,能够有效地抑制肿瘤细胞的生长和转移 ,因此成为肿瘤研究领域的研究热点。就内皮抑素的发现 ,性质和结构 ,生物学功能 ,抑制作用机理 ,内皮抑素基因治疗以及目前在临床上的应用进行了简要总结和概括。 展开更多

关键词 内皮抑素 治疗 瘤细胞 临床 血管形成 肿瘤研究 抑制肿瘤 生长 生物学功能 抑制因子

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家蚕核型多角体病毒遍在蛋白及结合肽的研究

5

作者 张文波 林蓉 +1 位作者 张耀洲 吴祥甫 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1038-1044,共7页

从家蚕核型多角体病毒镇江株 (BombyxmorinuclearpolyhedrosisvirusZhenjiangstrain ,BmNPV ZJ)基因组DNA中克隆遍在蛋白 (BmVUB)基因 .序列分析结果显示 ,BmVUB基因长 2 34bp ,编码 77个氨基酸 .BmVUB氨基酸序列内有一致HTH序列 ,遍在... 从家蚕核型多角体病毒镇江株 (BombyxmorinuclearpolyhedrosisvirusZhenjiangstrain ,BmNPV ZJ)基因组DNA中克隆遍在蛋白 (BmVUB)基因 .序列分析结果显示 ,BmVUB基因长 2 34bp ,编码 77个氨基酸 .BmVUB氨基酸序列内有一致HTH序列 ,遍在蛋白保守序列LRLRGG ,参与遍在蛋白 蛋白酶复合体形成的 4个保守性功能位点 (Lys 2 9、Cys 4 8、Cys 6 3、Gly 76 )及保守的Gly Gly X (X是疏水氨基酸残基 )蛋白酶切信号序列 ,在遍在蛋白保守的Gly Gly后多出由一个氨基酸组成的延伸肽 .原核诱导表达表明BmVUB主要以可溶性形式存在 ,表达量占总菌蛋白的 5 0 %以上 .纯化的遍在蛋白浓度为 1 0 3～ 2 4 6 g/L ,制备抗体 ,效价在 3 2× 10 -5以上 .用噬菌体表面展示技术筛选遍在蛋白结合肽 ,所筛选的结合肽可与遍在蛋白特异性结合 ,其中结合肽VAPHHAYAPMRT对细胞增殖有明显的浓度调控作用 ,即低浓度促进细胞生长 ,高浓度强烈抑制细胞的生长 . 展开更多

关键词 结合肽 遍在蛋白 白及 性功能 原核 细胞增殖 细胞生长 诱导表达 氨基酸序列 特异性结合

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家蚕Gar1p基因的克隆表达及生物信息学分析

6

作者 舒特俊 陈健 +4 位作者 聂作明 吕正兵 王丹 吴祥甫 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期387-393,共7页

在对家蚕功能基因筛选中获得一条长844 bp的基因序列,其编码蛋白与一种富含甘氨酸和精氨酸的核仁小分子RNA结合蛋白(glycine and arginine-rich nucleolar protein,Gar1p)的同源性达63%。利用生物信息学方法分析了该基因上游的启动子序... 在对家蚕功能基因筛选中获得一条长844 bp的基因序列,其编码蛋白与一种富含甘氨酸和精氨酸的核仁小分子RNA结合蛋白(glycine and arginine-rich nucleolar protein,Gar1p)的同源性达63%。利用生物信息学方法分析了该基因上游的启动子序列,发现该基因不含内含子,由1个699 bp的单一外显子编码232个残基的蛋白,预测分子量为22.4 kD,等电点11.43。该Gar1p蛋白的疏水性最大值为1.167,最小值为-2.011,其序列的两端各有1个强亲水性的GAR区域,而中间含有5个潜在的磷酸化位点。Gar1p基因已从家蚕基因组中扩增得到,并克隆进表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中得以表达,为研究其功能提供了条件。 展开更多

关键词 家蚕 Gar1p基因 基因克隆 生物信息学

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家蚕泛肽-核糖体蛋白S27a的表达及功能研究 被引量：6

7

作者 叶嘉良 陈健 +6 位作者 吕正兵 聂作明 王丹 王雪冬 沈红丹 吴祥甫 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期394-402,共9页

泛肽(UB)-核糖体蛋白S27a(UBRPS27a)是泛肽和核糖体蛋白的融合蛋白,在真核细胞中表达时,被酶解成UB和核糖体蛋白S27a(RPS27a)。从家蚕蛹cDNA文库中获得了该基因并原核表达了该蛋白,命名为BmUBRPS27a。将纯化的融合蛋白免疫新西兰兔得到... 泛肽(UB)-核糖体蛋白S27a(UBRPS27a)是泛肽和核糖体蛋白的融合蛋白,在真核细胞中表达时,被酶解成UB和核糖体蛋白S27a(RPS27a)。从家蚕蛹cDNA文库中获得了该基因并原核表达了该蛋白,命名为BmUBRPS27a。将纯化的融合蛋白免疫新西兰兔得到抗血清,通过亚细胞免疫荧光定位发现该蛋白存在于细胞核和细胞质。用荧光定量PCR对该蛋白在家蚕中的表达作了初步分析,发现RPS27a在活性增殖细胞中表达量很高。将合成了BmUBRPS27a的dsRNA进行RNAi,用脂质体转染家蚕卵巢上皮细胞Bm5后,细胞的形态发生了变化:细胞由圆形、椭圆形变成了梭形,甚至出现类似神经细胞的突触结构。该基因对维持细胞正常形态具有重要的作用。 展开更多

关键词 家蚕 核糖体蛋白S27a 肿瘤 细胞定位 荧光定量PCR RNA干扰

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家蚕含RRM保守结构域蛋白基因(Bmrrm)的克隆及序列分析与表达研究 被引量：1

8

作者 涂雯婷 郑青亮 +3 位作者 聂作明 陈健 于威 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期499-507,共9页

RRM(RNA recognition motif)是RNA结合蛋白中广泛存在的一种保守结构域。从构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选得到一条含有RRM保守结构域的cDNA,命名为Bmrrm(GenBank登录号:DQ534196)。Bmrrm基因全长1086 bp,开放阅读框大小为894 bp,编码297... RRM(RNA recognition motif)是RNA结合蛋白中广泛存在的一种保守结构域。从构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选得到一条含有RRM保守结构域的cDNA,命名为Bmrrm(GenBank登录号:DQ534196)。Bmrrm基因全长1086 bp,开放阅读框大小为894 bp,编码297个氨基酸残基,蛋白理论分子质量33.2 kD,等电点9.69,预测的三级结构由2个α螺旋和4个β折叠组成。将该基因的PCR扩增产物于原核表达载体pET-28a(+)中表达后经SDS-PAGE检测,在36 kD处的特异性蛋白条带与预期值相符,重组蛋白以可溶的形式表达。将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA检测效价大于1∶6400。采用荧光定量PCR方法对家蚕卵、5龄幼虫、蛹、蛾4个发育时期以及5龄幼虫各组织中Bmrrm的mRNA转录水平进行检测比较,发现在蛹期和5龄幼虫生殖腺、表皮中的转录水平较高。采用免疫印迹方法在家蚕的卵期、5龄幼虫、蛹期,以及5龄幼虫的生殖腺、表皮、脂肪体中检测到BmRRM蛋白有明显表达,但在蛾期及5龄幼虫的其他组织中未检测到该蛋白。以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞化学实验,BmRRM蛋白在整个细胞周期主要分布于细胞核,仅少量分布于细胞质。初步推测BmRRM蛋白参与蚕体内RNA前体的剪接、细胞定位及维持稳定等转录后调控过程。 展开更多

关键词 家蚕 Bmrrm基因 荧光定量PCR 组织表达 亚细胞定位

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极端嗜热菌Thermus thermophilus HB27中腺苷酸激酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究 被引量：1

9

作者 谭志文 刘俊 +2 位作者 张学芳 孟凡国 张耀洲 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期1-6,共6页

目的克隆Thermus thermophilus HB27隆腺苷酸激酶基因并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达并获得了比较高的表达量并对其酶学性质进行分析。方法利用PCR技术从Thermus thermophilus HB27基因组中扩增得到腺苷酸激酶的基因片段,将其克隆到pE... 目的克隆Thermus thermophilus HB27隆腺苷酸激酶基因并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达并获得了比较高的表达量并对其酶学性质进行分析。方法利用PCR技术从Thermus thermophilus HB27基因组中扩增得到腺苷酸激酶的基因片段,将其克隆到pET-28a表达载体上,以PCR\酶切和测序进行鉴定。利用光谱分析测定该重组酶的相关酶学性质。结果成功克隆和高效表达了腺苷酸激酶;重组酶的最适pH是8.5,最适温度是90℃。重组酶对底物ADP的米氏常数Km是68.6μmol/L,VmaxADP为0.294mmol/(L-1·min-1)。将该重组酶在70、80、90、100℃下分别作用7h后,发现仍具有酶活性,显示出高的温度耐受性。腺苷酸激酶的特异性抑制剂AP5A浓度为2.0mmol/L能够抑制重组腺苷酸激酶70%的酶活性,AP5A对重组腺苷酸激酶的抑制类型为竞争性抑制,其抑制常数为46.39μmol/L。结论成功克隆、表达重组腺苷酸激酶,为腺苷酸激酶的进一步应用奠定了基础。 展开更多

关键词 腺苷酸激酶 THERMUS THERMOPHILUS HB27 酶学性质

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家蚕小热休克蛋白基因BmHSP20.8的表达及功能研究

10

作者 赵恩伟 吕正兵 +9 位作者 盛清 陈健 聂作明 王丹 沈红丹 刘立丽 舒建洪 陈剑清 吴祥甫 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期516-522,共7页

小热休克蛋白(small heat shock protein,sHSP)是一类受热处理后诱导产生的蛋白家族。从构建的家蚕蛹cDNA文库中获得了一条全长764 bp的基因序列(GenBank登录号:AAG30944.1),其开放阅读框(ORF)长561 bp,编码186个氨基酸。用生物信息学... 小热休克蛋白(small heat shock protein,sHSP)是一类受热处理后诱导产生的蛋白家族。从构建的家蚕蛹cDNA文库中获得了一条全长764 bp的基因序列(GenBank登录号:AAG30944.1),其开放阅读框(ORF)长561 bp,编码186个氨基酸。用生物信息学方法对此序列进行同源性分析,表明该序列是一条保守性高达85%的家蚕小热休克蛋白20.8(BmHSP20.8),无跨膜结构,主要分布于细胞质。将该序列的ORF与pET-28a(+)载体连接构建重组质粒,并转化到大肠杆菌BL21进行原核表达,纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔获得抗血清。通过亚细胞定位技术研究BmHSP20.8在正常和热激状态下的家蚕卵巢上皮细胞Bm5和BmN中的变化,结果显示热激后BmH-SP20.8蛋白从细胞质往细胞膜方向迁移。有BmHSP20.8表达的大肠杆菌菌株经48℃处理后,其生存率比未表达BmHSP20.8蛋白的菌株高4倍左右,说明BmHSP20.8蛋白在大肠杆菌中表达能够提高细菌体在高温环境下的生存率。 展开更多

关键词 家蚕小热休克蛋白20.8 多克隆抗体制备 亚细胞定位 功能

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家蚕一种富含半胱氨酸蛋白基因BmCRP的原核表达与定位研究

11

作者 陈世慧 张文平 +10 位作者 盛清 吕正兵 陈健 聂作明 王丹 刘丽丽 沈红丹 舒建洪 陈剑清 吴祥甫 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期273-281,共9页

从家蚕蛹cDNA文库中获得一条cDNA序列,经生物信息学分析显示该cDNA序列全长1 011 bp,包括5′-UTR 200 bp和3-′UTR 136 bp,编码224个氨基酸,其编码蛋白质的N-端富含半胱氨酸,将该基因命名为BmCRP(基因登录号:DN985186.1)。该基因编码蛋... 从家蚕蛹cDNA文库中获得一条cDNA序列,经生物信息学分析显示该cDNA序列全长1 011 bp,包括5′-UTR 200 bp和3-′UTR 136 bp,编码224个氨基酸,其编码蛋白质的N-端富含半胱氨酸,将该基因命名为BmCRP(基因登录号:DN985186.1)。该基因编码蛋白主要有α螺旋、β-折叠、无规则卷曲3种二级结构,具有cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点等5种功能位点。构建重组表达载体pET-28 a(+)-BmCRP并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得融合蛋白,用纯化后的目的蛋白免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体与BmCRP有较好的特异性。W estern b lotting检测结果:BmCRP蛋白在家蚕卵、幼虫、蛹、蛾4个发育时期均有表达,蛹期表达量最高;在5龄幼虫的表皮、头部、卵巢、睾丸、马氏管中均有表达。荧光定量RT-PCR检测结果:BmCRPmRNA在家蚕卵、幼虫、蛹、蛾的整个生命周期中,其转录水平呈增加趋势;在5龄幼虫不同组织中的转录水平从高到低依次为表皮、头部、生殖腺、中肠、马氏管、气管、丝腺和脂肪体。细胞定位实验结果显示BmCRP蛋白在Bm5细胞的细胞核和细胞质中均存在,细胞核中的荧光信号比细胞质中的信号强。研究结果有助于进一步探明家蚕BmCRP蛋白的结构和功能。 展开更多

关键词 家蚕 富含半胱氨酸蛋白 基因组结构 细胞定位 组织分布 实时荧光定量PCR

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家蚕脂围蛋白(PLIN)基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究

12

作者 姚斐 许红 +11 位作者 舒特俊 盛清 吕正兵 陈健 聂作明 王丹 刘立丽 沈红丹 舒建洪 陈剑清 吴祥甫 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期737-745,共9页

脂围蛋白(perilipin)与脂肪细胞脂类代谢的调节有关。从家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条cDNA开放阅读框(ORF)序列长度为918 bp的基因,预测其编码305个氨基酸残基,蛋白分子质量约32.5 kD。经NCBI比对发现该蛋白具有部分脂围蛋白的保守结构域... 脂围蛋白(perilipin)与脂肪细胞脂类代谢的调节有关。从家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条cDNA开放阅读框(ORF)序列长度为918 bp的基因,预测其编码305个氨基酸残基,蛋白分子质量约32.5 kD。经NCBI比对发现该蛋白具有部分脂围蛋白的保守结构域,因此将该ORF序列命名为BmPLIN基因。将该基因插入到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a(+)-BmPLIN,并转化大肠杆菌中进行原核表达得到带有His标签的融合蛋白,表达的融合蛋白以包涵体形式存在。用纯化后的融合蛋白为抗原免疫大白兔获得多克隆抗体,ELISA间接法测定抗体的效价达到1∶12 800以上。通过荧光定量PCR和Western blotting技术对BmPLIN基因及其编码蛋白在家蚕5龄幼虫各个组织器官中的转录、表达水平进行分析的结果是:BmPLIN基因mRNA在家蚕5龄幼虫各组织器官中的转录水平由高到低依次为生殖腺(卵巢和睾丸)、脂肪体、肠、表皮、头部、马氏管、丝腺、气门,在家蚕5龄幼虫的生殖腺(卵巢和睾丸)中有明显的BmPLIN蛋白特异条带。以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞实验的结果显示,BmPLIN蛋白在细胞质和细胞核中均有分布。 展开更多

关键词 家蚕 脂围蛋白 蛋白纯化 基因表达 亚细胞定位

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家蚕Mod基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究

13

作者 周秋梅 金勇丰 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期746-753,共8页

已知多数含BTB/POZ结构域的锌指蛋白对生物体的发育、分化及染色体重组等具有重要的调节作用。从已构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条编码MOD(mdg4)蛋白的基因序列(GenBank登录号:DN237077)。该基因序列的ORF长1 080 bp,编码359个氨基... 已知多数含BTB/POZ结构域的锌指蛋白对生物体的发育、分化及染色体重组等具有重要的调节作用。从已构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条编码MOD(mdg4)蛋白的基因序列(GenBank登录号:DN237077)。该基因序列的ORF长1 080 bp,编码359个氨基酸残基,蛋白含有BTB保守结构域和FLYWCH保守结构域,与黑腹果蝇、冈比亚按蚊、赤拟谷盗和埃及伊蚊的MOD多序列比对,其同源性不超过40%。表达、纯化带有His标签的家蚕MOD蛋白(BmMOD),并用纯化的融合蛋白免疫新西兰兔获得多克隆抗体。实时荧光定量PCR显示BmMod基因mRNA转录水平在家蚕蛾期及5龄幼虫的卵巢最高,推测BmMod基因在家蚕生殖腺发育过程中产生一定作用。利用纯化的BmMOD蛋白多克隆抗体进行Western blotting分析也表明该蛋白在家蚕蛾期及5龄幼虫卵巢中的表达量最高,验证了BmMod在家蚕生殖腺发育中的功能。亚细胞定位结果显示BmMOD蛋白几乎完全定位于家蚕卵巢上皮细胞(BmN)的细胞核中。 展开更多

关键词 家蚕 Mod(mdg4)基因 序列分析 原核表达 表达特征 亚细胞定位

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基质蛋白第51位氨基酸缺失的水泡性口炎病毒疫苗载体的研究

14

作者 齐兵 方心葵 +1 位作者 吴祥甫 孙涛 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期44-49,共6页

水泡性口炎由水泡性口炎病毒(VSV)引起,可在全世界范围内对畜牧业造成危害。试验对基质蛋白第51位甲硫氨酸敲除后的重组VSV病毒(VSVAM51)进行了研究,包括病毒致病性及其所激发的体液免疫应答规律。结果表明:相比野生型VSV,VSV△M51对猪... 水泡性口炎由水泡性口炎病毒(VSV)引起,可在全世界范围内对畜牧业造成危害。试验对基质蛋白第51位甲硫氨酸敲除后的重组VSV病毒(VSVAM51)进行了研究,包括病毒致病性及其所激发的体液免疫应答规律。结果表明:相比野生型VSV,VSV△M51对猪的致病性降低,接种野生型VSV的试验猪临床症状评分最高可达4分,而接种VSV△M51病毒动物临床评分不高于2分。VSV△M51可有效地激发抗病毒体液免疫应答,有希望成为理想的疫苗载体。 展开更多

关键词 水泡性口炎病毒 基质蛋白 体液免疫应答

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家蚕孤雌生殖相关蛋白ERp57基因的克隆和分析 被引量：5

15

作者 于威 聂作明 +2 位作者 王丹 陈健 张耀洲 《丝绸》 CAS 北大核心 2007年第8期23-27,共5页

ERp57蛋白是一种二硫化物异构酶,它是目前发现的最为突出的多功能蛋白之一,除了二硫键的异构酶的基本功能外,还具有其他多种生物学功能。应用二维凝胶电泳(2DE)技术研究家蚕孤雌生殖的总蛋白质,通过和正常家蚕卵总蛋白进行比较分析得到... ERp57蛋白是一种二硫化物异构酶,它是目前发现的最为突出的多功能蛋白之一,除了二硫键的异构酶的基本功能外,还具有其他多种生物学功能。应用二维凝胶电泳(2DE)技术研究家蚕孤雌生殖的总蛋白质,通过和正常家蚕卵总蛋白进行比较分析得到家蚕卵中可能与孤雌生殖相关的差异蛋白点,得到了一个与家蚕蛋白折叠相关的钙结合蛋白——ERp57。根据已有的cDNA文库,从家蚕蛹中克隆得到的ERp57基因的cDNA。利用各种生物信息学的方法和工具,对这个基因的核酸水平和蛋白质水平进行了详细的分析,为进一步研究其结构与功能的关系提供参考。 展开更多

关键词 家蚕蛹 孤雌生殖 ERp57 TOF-TOF

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小热休克蛋白的结构和功能 被引量：24

16

作者 夏佳音 张耀洲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期911-915,共5页

小热休克蛋白(small heat shock protein,sHSP)几乎存在于所有生物体中,其主要结构是一个保守的α晶体蛋白(α-crystallin)结构域,由约90个氨基酸残基组成,与其相邻的是可变的N端域.N端域能够调节低聚体形成、亚单位动力学及其与底物的... 小热休克蛋白(small heat shock protein,sHSP)几乎存在于所有生物体中,其主要结构是一个保守的α晶体蛋白(α-crystallin)结构域,由约90个氨基酸残基组成,与其相邻的是可变的N端域.N端域能够调节低聚体形成、亚单位动力学及其与底物的结合.sHSP能够与细胞内各组分(蛋白质、细胞核、细胞骨架元件、膜)进行相互作用,以维持细胞的稳定.小热休克蛋白家族成员的共同特点是特殊丝氨酸残基上的磷酸化,磷酸化作用对于受到胁迫时的细胞非常重要.由MAPKAP激酶2/3和p38参与的级联反应能够诱导sHSP发生磷酸化,从而调节sHSP的低聚体状态,而低聚体状态和sHSP的生物学功能密切相关.本文介绍sHSP的结构特征和细胞内的作用底物,并讨论sHSP被不同的蛋白激酶磷酸化及磷酸化作用对低聚体状态和伴侣活性的影响. 展开更多

关键词 小热休克蛋白 结构特征 磷酸化作用 低聚体 底物

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3种家蚕30K蛋白基因的克隆表达及抗凋亡功能分析 被引量：4

17

作者 于威 陆青玲 +2 位作者 韩剑秋 阚光嫣 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期630-636,共7页

业已明确家蚕30K蛋白不仅作为家蚕生长发育的重要能源物质,还对细胞凋亡具有明显的抑制作用。采用RT-PCR技术从家蚕5龄幼虫脂肪体中克隆了BmLp-C6、BmLip19G1和BmLp-C12p(GenBank登录号分别为X54735、AY568957、NM_001101728)共3种30K... 业已明确家蚕30K蛋白不仅作为家蚕生长发育的重要能源物质,还对细胞凋亡具有明显的抑制作用。采用RT-PCR技术从家蚕5龄幼虫脂肪体中克隆了BmLp-C6、BmLip19G1和BmLp-C12p(GenBank登录号分别为X54735、AY568957、NM_001101728)共3种30K蛋白基因的cDNA序列,并利用Bac-to-Bac系统构建含有3种30K蛋白基因的重组杆状病毒表达载体,转染家蚕BmN培养细胞大量表达3种30K蛋白,3种表达产物纯化后的样品经SDS-PAGE检测到明显的30 kD大小的目的蛋白条带,Western blotting分析3种纯化后的蛋白样品与6×His-tag抗体具有良好的特异性反应。纯化后检测3种表达产物对诱导凋亡的抑制作用。经MTT法检测3种纯化30 K蛋白可明显增强过氧化处理的人血管内皮原代培养细胞(EC)的活力,采用ELISA法检测3种纯化30K蛋白能明显减缓EC细胞中的DNA片段化,显示3种30K蛋白对H2O2诱导的EC细胞的凋亡均具有一定的抑制作用。用生物信息学方法预测3种家蚕30K蛋白的氨基酸序列相似性达43%,三级结构极其相似,推测3种蛋白具有相似的生物学功能。 展开更多

关键词 家蚕 30K蛋白 基因克隆 序列分析 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 抗凋亡活性

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蛋白酶抑制剂的应用进展 被引量：2

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作者 张苗 张耀洲 金勇丰 《农机化研究》 北大核心 2005年第2期202-204,共3页

蛋白酶抑制剂(PI)是在动植物及微生物体内广泛存在的一种对蛋白水解酶活性有抑制作用的小分子量蛋白质。蛋白酶抑制剂在调节蛋白酶活性和蛋白质代谢等方面起着重要的作用,近年来发现它在许多疾病及病理过程中有控制作用。为此,综述了蛋... 蛋白酶抑制剂(PI)是在动植物及微生物体内广泛存在的一种对蛋白水解酶活性有抑制作用的小分子量蛋白质。蛋白酶抑制剂在调节蛋白酶活性和蛋白质代谢等方面起着重要的作用,近年来发现它在许多疾病及病理过程中有控制作用。为此,综述了蛋白酶抑制剂在农业和临床治疗上的应用。 展开更多

关键词 蛋白酶抑制剂 体内 临床治疗 病理过程 调节蛋白 应用进展 抑制作用 酶活性 控制作用 蛋白质

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家蚕脂蛋白基因BmLp-c21的表达分析及蛋白质亚细胞定位 被引量：1

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作者 陈琴 杨丹 +2 位作者 聂作明 陈健 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期434-441,共8页

家蚕30 kD脂蛋白家族在家蚕的生长发育过程中具有重要的生理功能。从家蚕蛹cDNA文库中克隆到一条编码30kD蛋白质的基因cDNA序列,该序列全长2 803 bp,ORF为792 bp,编码含263个氨基酸残基的脂蛋白(low molecular 30K lipo-protein pBmHPC-... 家蚕30 kD脂蛋白家族在家蚕的生长发育过程中具有重要的生理功能。从家蚕蛹cDNA文库中克隆到一条编码30kD蛋白质的基因cDNA序列,该序列全长2 803 bp,ORF为792 bp,编码含263个氨基酸残基的脂蛋白(low molecular 30K lipo-protein pBmHPC-21;GenBank登录号:Q00801),命名为BmLp-c21。将BmLp-c21克隆至原核表达载体pET-28a(+),转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达后通过亲和层析得到纯化的融合蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。亚细胞定位显示BmLp-c21主要存在于细胞质中,呈点状或者片状分布。通过实时荧光定量PCR和Western blotting方法,分别检测到家蚕不同发育时期和5龄幼虫不同组织中BmLp-c21 mRNA的转录水平与蛋白质的表达水平存在较大差异,在蛹期及5龄幼虫血淋巴中的mRNA转录水平和蛋白质表达水平最高。初步推测BmLp-c21在家蚕蛹的变态发育过程以及蚕体脂质的运输方面具有重要的功能。 展开更多

关键词 家蚕 脂蛋白基因BmLp-c21 序列特征 表达特征 多克隆抗体 实时荧光定量PCR 免疫印迹分析 亚细胞定位

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家蚕亲环蛋白A基因(BmCyPA)的克隆与表达分析 被引量：1

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作者 王丹 唐田娟 +9 位作者 刘悦 吕正兵 陈健 盛清 刘立丽 张文平 聂作明 全滟平 吴祥甫 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期792-800,共9页

亲环蛋白(CyP)能与免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)结合而作为CsA的胞内受体。在已构建的家蚕蛹cDNA文库中获得了家蚕亲环蛋白A(BmCyPA)基因的cDNA序列。利用生物信息学方法对此序列的开放阅读框(ORF)和序列同源性等进行分析,并以家蚕蛹总RNA... 亲环蛋白(CyP)能与免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)结合而作为CsA的胞内受体。在已构建的家蚕蛹cDNA文库中获得了家蚕亲环蛋白A(BmCyPA)基因的cDNA序列。利用生物信息学方法对此序列的开放阅读框(ORF)和序列同源性等进行分析,并以家蚕蛹总RNA反转录的cDNA为材料克隆了BmCyPA,通过原核表达目的蛋白后,将纯化的BmCyPA融合蛋白免疫新西兰兔得到抗血清,Western blotting检测目的蛋白在蚕体中得到表达。利用荧光定量PCR方法检测家蚕5龄幼虫各组织中BmCyPA mRNA的转录水平,由高到低依次为脂肪体、丝腺、中肠、马氏管、表皮、头部、气门、卵巢;Western blotting检测BmCyPA在5龄幼虫各组织中的表达水平,由高到低依次为脂肪体、气门、表皮、马氏管、中肠、丝腺、头部和卵巢。亚细胞定位显示Bm-CyPA在细胞质与细胞核中均有分布。推测BmCyPA与家蚕的生长发育以及促进蛋白质折叠和介导免疫应答等有密切联系。 展开更多

关键词 家蚕 亲环蛋白A 基因克隆 组织表达 亚细胞定位

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