家蚕小热休克蛋白22.6基因的生物信息学分析及其原核表达 被引量：1

1

作者 王威 盛清 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2010年第4期625-629,共5页

小热休克蛋白家族成员在结构上变化很大,是细胞或生物体被多种类型的胁迫所诱导新合成的或含量增加的一类蛋白质,目前研究相对较少。从家蚕蛹期cDNA文库中获得一条序列,经过Blast比对和保守结构域分析后发现该蛋白属于家蚕小热休克蛋白... 小热休克蛋白家族成员在结构上变化很大,是细胞或生物体被多种类型的胁迫所诱导新合成的或含量增加的一类蛋白质,目前研究相对较少。从家蚕蛹期cDNA文库中获得一条序列,经过Blast比对和保守结构域分析后发现该蛋白属于家蚕小热休克蛋白,将其命名为BmHSP22.6;通过PCR扩增该基因的ORF序列,将其克隆到pET28a(+)表达载体的BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,获得重组质粒pET-28a-BmHSP22.6。该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),筛选获得工程菌,用终浓度为1 mM的IPTG诱导目的基因表达。用镍柱分离上清裂解液,获得纯化的目的蛋白。 展开更多

关键词 家蚕 小热休克蛋白22.6 原核表达 纯化

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三叶半夏凝集素C端结构域的可溶表达及其活性研究 被引量：2

2

作者 许韶威 刘冰颖 +4 位作者 周炜 高永 杨支力 吕正兵 徐涛 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2014年第4期439-444,共6页

利用pET-32-SUMO表达载体在大肠杆菌中可溶表达三叶半夏凝集素C端结构域(P-D2),并研究其凝血活性、糖结合特异性以及肿瘤抑制活性。实验结果表明,P-D2蛋白的产量为5mg/L。该蛋白具有凝集小鼠红细胞的活性,可以被D-甘露聚糖抑制,但不能... 利用pET-32-SUMO表达载体在大肠杆菌中可溶表达三叶半夏凝集素C端结构域(P-D2),并研究其凝血活性、糖结合特异性以及肿瘤抑制活性。实验结果表明,P-D2蛋白的产量为5mg/L。该蛋白具有凝集小鼠红细胞的活性,可以被D-甘露聚糖抑制,但不能被D-乳糖、D-葡萄糖、D-麦芽糖抑制。P-D2蛋白的体外抗肿瘤活性实验表明其对肝癌细胞Bel-7404以及结肠癌细胞SW-620都有良好的抑制作用。凋亡现象观察实验发现P-D2蛋白可以诱导癌细胞Bel-7404的凋亡。这是首次在大肠杆菌表达系统中表达了可溶的半夏凝集素C端结构域,为其他凝集素的可溶表达提供了新的选择。 展开更多

关键词 P-D2 凝血活性 SUMO Hochest染色 抗肿瘤活性

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家蚕BmLITAF基因的克隆表达及生物信息学分析 被引量：2

3

作者 曹海燕 王丹 张耀洲 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2010年第1期149-154,共6页

在对家蚕蛹cDNA文库进行分析时，发现一条与脂多糖诱导肿瘤坏死因子a的转录激活因子LITAF的保守结构域同源的保守序列。基因序列全长为981bp，由97bp的5’端非翻译区序列（5’UTR）、390bp的开放读码框（ORF）和494bp的3’端非翻译区序... 在对家蚕蛹cDNA文库进行分析时，发现一条与脂多糖诱导肿瘤坏死因子a的转录激活因子LITAF的保守结构域同源的保守序列。基因序列全长为981bp，由97bp的5’端非翻译区序列（5’UTR）、390bp的开放读码框（ORF）和494bp的3’端非翻译区序列（3’UTR）组成。利用生物信息学方法对BmLITAF进行基因结构分析发现，此基因由3个外显子和2个内含子组成，编码129个氨基酸残基；其预测理论分子量为13．9kDa，预测等电点6．47；在90～100位氨基酸残基区域具有较高的疏水性，具有跨膜结构域；定位细胞内的可能性较大。根据BmLITAF的cDNA序列进行PCR扩增获得目的基因，将其克隆到质粒pGEX-4T-3中，测序验证克隆正确。经IPTG诱导，结果发现目的蛋白主要以包涵体的形式存在。 展开更多

关键词 家蚕 BmLITAF 表达 生物信息学分析

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真核细胞蛋白质翻译起始研究进展 被引量：2

4

作者 周培 杨力 +3 位作者 陈佳 李伯良 赵学明 张耀洲 《浙江工程学院学报》 2004年第4期312-315,共4页

在大量有关机制的研究基础上,针对真核蛋白质翻译起始,提出了核糖体沿mRNA滑动识别翻译起始位点的机制和核糖体从mRNA内部识别翻译起始位点的机制。

关键词 蛋白质翻译 真核细胞 研究进展 核蛋白质 核糖体 RNA 机制 起始 研究基础

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利用GST融合多肽制备人源膜受体多抗的研究

5

作者 叶曼 黄宏杰 +2 位作者 何靖 陈剑清 张耀洲 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2010年第4期636-640,共5页

膜受体是一类膜蛋白,而全长的膜蛋白很难通过基因工程获得,这给制备该类蛋白的抗体增加了难度。为了探索一条制备膜受体多克隆抗体的新途径,通过基因重组技术,将膜受体的抗原决定簇与GST标签进行融合表达,然后免疫新西兰兔,获得了相应... 膜受体是一类膜蛋白,而全长的膜蛋白很难通过基因工程获得,这给制备该类蛋白的抗体增加了难度。为了探索一条制备膜受体多克隆抗体的新途径,通过基因重组技术,将膜受体的抗原决定簇与GST标签进行融合表达,然后免疫新西兰兔,获得了相应的多克隆抗体。结果表明,利用融合GST的多肽进行抗体制备的方法是可行的。 展开更多

关键词 GST融合多肽 膜受体 抗原决定簇 抗体

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约氏疟原虫Pys25和Pys48抗原的表达与产物活性初步研究

6

作者 李伟杰 盛稳稳 +5 位作者 陈剑清 于威 吴祥甫 崔立旺 张耀洲 舒特俊 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2014年第6期691-696,共6页

通过家蚕杆状病毒表面展示技术获得约氏疟原虫有性阶段候选抗原Pys25(217AA)和Pys48(455AA),以期建立一种新的鼠疟模型。首先利用大肠杆菌原核表达系统表达这两种抗原,免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,同时利用家蚕杆状病毒表面展示技术,... 通过家蚕杆状病毒表面展示技术获得约氏疟原虫有性阶段候选抗原Pys25(217AA)和Pys48(455AA),以期建立一种新的鼠疟模型。首先利用大肠杆菌原核表达系统表达这两种抗原,免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,同时利用家蚕杆状病毒表面展示技术,并改造pFastBac Dual载体,在其Ph启动子前端加入哺乳动物启动子CMV,并将目的蛋白基因与杆状病毒囊膜蛋白gp64基因片段融合表达,融合蛋白展示在病毒粒子表面。用其免疫Balb/c小鼠,在小鼠体内,CMV启动子启动融合蛋白表达,共同刺激小鼠产生多克隆抗体。通过间接ELISA检测,两种抗原抗体效价均能达到1∶12 800。本实验为后期免疫阻断效应研究、多时期多价疫苗的构建及鼠疫模型的建立提供了实验基础。 展开更多

关键词 Pys25和Pys48 家蚕杆状病毒表面展示技术 CMV启动子 疫苗

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人芳香基硫酸酯酶(HSulf-1)基因的原核表达及酶活初步研究

7

作者 马会彦 陈钊 +3 位作者 李杰 莫敏俐 谢国良 盛清 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2011年第5期789-794,共6页

人芳香基硫酸酯酶(HSulf-1)是一类分泌型蛋白,能在中性条件下改变硫酸肝素蛋白聚糖(HSPGs)的硫酸化状态,从而影响多种信号分子与其相应受体的结合,进而影响细胞信号通路。鉴于HSulf-1具有重要的潜在应用价值,为获得大量纯化蛋白以探索... 人芳香基硫酸酯酶(HSulf-1)是一类分泌型蛋白,能在中性条件下改变硫酸肝素蛋白聚糖(HSPGs)的硫酸化状态,从而影响多种信号分子与其相应受体的结合,进而影响细胞信号通路。鉴于HSulf-1具有重要的潜在应用价值,为获得大量纯化蛋白以探索其功能与应用,文章将HSulf-1功能域基因片段与pGEX-6p-1表达载体连接构建成重组质粒,在原核表达系统BL21中表达、分离纯化了HSulf-1的功能域片段,并以4-Mus为底物用荧光光度法进行了酶活性的测定。结果表明,原核表达能得到电泳纯级的HSulf-1纯化蛋白,但其具有酶活性的条件需要进一步探索。 展开更多

关键词 芳香基硫酸酯酶 HSulf-1 原核表达 酶活性

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水泡性口炎病毒与Monocyte及MoDC的互作研究

8

作者 邹胜利 聂作明 +2 位作者 吴祥甫 方心葵 孙涛 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2016年第5期749-753,共5页

为了探究水泡性口炎病毒（ Vesicular stomatitis virus, VSV）与天然宿主免疫细胞的互作关系,实验用M蛋白第51位甲硫氨酸残基缺失后的重组病毒（ VSVAM 51-GFP ）和第51位甲硫氨酸敲除、第 221位缬氨酸突变为 苯丙氨酸、第226位丝基酸... 为了探究水泡性口炎病毒（ Vesicular stomatitis virus, VSV）与天然宿主免疫细胞的互作关系,实验用M蛋白第51位甲硫氨酸残基缺失后的重组病毒（ VSVAM 51-GFP ）和第51位甲硫氨酸敲除、第 221位缬氨酸突变为 苯丙氨酸、第226位丝基酸突变为精氨酸的重组病毒（ VSV-MT-GFP ）以及野生型重组病毒（VSV-GFP）感染猪单核 细胞（ Monocyte）和单核细胞诱导的树突状细胞（ Monocyte-dcriveddendritic cell, MoDC）,通过空斑实验制作病毒生 长曲线,用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞的感染状况, E LISA 检测细胞培养上清中的细胞因子表达变 化.结果表明, VSV、 VSVAM 51、 VSV-MT 均可感染 Monocyte和 MoDC,且 Monocyte的感染率仅为8.38%.3 种病 毒在 MoDC中可以大量复制,但无法在 Monocyte中扩增.且与野生型VSV相比, VSViM51、VSV-MT 细胞致病性 依次减弱.VSV能有效激活TNF -α、 IL-8、 FN-α 相关免疫细胞因子在MoDC中的表达,且 M 蛋白突变程度越大,病毒激活能力越强. 展开更多

关键词 水泡性口炎病毒 单核细胞 MoDC 互作 基质蛋白M

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家蚕表达人促红细胞生成素口服急性毒性和初步药效学研究

9

作者 李杰 谭淑敏 +4 位作者 王小飞 舒特俊 于威 张耀洲 陈剑清 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2014年第6期728-733,共6页

为了研究家蚕表达的重组人促红细胞生成素(BmrhEPO)口服治疗肾性贫血的疗效并评价安全性,进行了小鼠口服BmrhEPO急性毒性实验,结果显示其对小鼠基本无毒或毒性极低,小鼠口服BmrhEPO最大耐受剂量大于147 882IU/kg。肾性贫血小鼠以剂量为6... 为了研究家蚕表达的重组人促红细胞生成素(BmrhEPO)口服治疗肾性贫血的疗效并评价安全性,进行了小鼠口服BmrhEPO急性毒性实验,结果显示其对小鼠基本无毒或毒性极低,小鼠口服BmrhEPO最大耐受剂量大于147 882IU/kg。肾性贫血小鼠以剂量为62 865IU/kg和20 955IU/kg的两个剂量组连续口服BmrhEPO一周,以小鼠血液网织红细胞数及百分率为药效指标,结果显示口服有药效,并且药效与剂量呈正相关。本实验为开发重组人促红细胞生成素口服药物提供了理论指导和实验基础。 展开更多

关键词 家蚕 EPO 口服 急性毒性 肾性贫血

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家蚕30kDa载脂蛋白19G1前体的生物信息学分析及克隆表达

10

作者 陈晓平 于威 张耀洲 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2009年第5期747-753,763,共8页

从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中发现了一条编码低分子量30 kDa载脂蛋白19G1前体(lowmolecular mass 30 kDa lipoprotein 19G1 precursor)的EST序列(GeneBank登录号:AY568957),在NCBI数据库中比对后得知该基因的ORF长为771 bp,与基因... 从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中发现了一条编码低分子量30 kDa载脂蛋白19G1前体(lowmolecular mass 30 kDa lipoprotein 19G1 precursor)的EST序列(GeneBank登录号:AY568957),在NCBI数据库中比对后得知该基因的ORF长为771 bp,与基因组比对后发现该基因的ORF不含内含子,由单一外显子编码256个氨基酸残基的蛋白质,该蛋白属于家蚕30K蛋白家族,预测分子量约为29.5 kDa,等点电为7.29;信号肽分析显示该蛋白很可能存在信号肽。根据该基因ORF进行引物设计,以家蚕基因组为模板,PCR扩增获得该基因,将其克隆到pET-28a(+)载体中并导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,裂解菌作SDS-PAGE分析,结果表明该蛋白前体成功表达,为研究其功能打下了基础。 展开更多

关键词 家蚕 低分子量30 kDa载脂蛋白19G1前体 30K蛋白 克隆 生物信息学分析

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CTB-InsB融合基因在大肠杆菌中的表达研究

11

作者 徐元力 童富淡 张耀洲 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2007年第4期471-474,共4页

构建了一种霍乱毒素B亚基(CTB)与人胰岛素B链(InsB)的融合基因,并克隆入表达载体pGEX-4T-1中,命名为pGEX-CTB-InsB。该融合蛋白在大肠杆菌中的表达产物以包涵体形式存在,分子量约为43 kDa。包涵体经溶解和复性后,使用GSTrap FF亲和层析... 构建了一种霍乱毒素B亚基(CTB)与人胰岛素B链(InsB)的融合基因,并克隆入表达载体pGEX-4T-1中,命名为pGEX-CTB-InsB。该融合蛋白在大肠杆菌中的表达产物以包涵体形式存在,分子量约为43 kDa。包涵体经溶解和复性后,使用GSTrap FF亲和层析柱纯化得到融合蛋白。经SDS-PAGE和Western免疫印迹分析证实纯化蛋白为重组目的蛋白。 展开更多

关键词 CTB-InsB融合基因 诱导表达 纯化

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家蚕孤雌生殖相关蛋白ERp57基因的克隆和分析 被引量：5

12

作者 于威 聂作明 +2 位作者 王丹 陈健 张耀洲 《丝绸》 CAS 北大核心 2007年第8期23-27,共5页

ERp57蛋白是一种二硫化物异构酶,它是目前发现的最为突出的多功能蛋白之一,除了二硫键的异构酶的基本功能外,还具有其他多种生物学功能。应用二维凝胶电泳(2DE)技术研究家蚕孤雌生殖的总蛋白质,通过和正常家蚕卵总蛋白进行比较分析得到... ERp57蛋白是一种二硫化物异构酶,它是目前发现的最为突出的多功能蛋白之一,除了二硫键的异构酶的基本功能外,还具有其他多种生物学功能。应用二维凝胶电泳(2DE)技术研究家蚕孤雌生殖的总蛋白质,通过和正常家蚕卵总蛋白进行比较分析得到家蚕卵中可能与孤雌生殖相关的差异蛋白点,得到了一个与家蚕蛋白折叠相关的钙结合蛋白——ERp57。根据已有的cDNA文库,从家蚕蛹中克隆得到的ERp57基因的cDNA。利用各种生物信息学的方法和工具,对这个基因的核酸水平和蛋白质水平进行了详细的分析,为进一步研究其结构与功能的关系提供参考。 展开更多

关键词 家蚕蛹 孤雌生殖 ERp57 TOF-TOF

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死亡素在裂殖酵母中的表达 被引量：4

13

作者 钱坤 吕正兵 +1 位作者 文良柱 沈子龙 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期276-278,共3页

目的:在裂殖酵母中表达死亡素。方法:通过PCR方法人工合成死亡素基因,构建重组表达载体pRHZ41Tha,转化到裂殖酵母中,杯碟法检验表达产物活性。结果:重组载体构建成功并且转化到酵母中,外源基因在转化子中得到了表达,表达产物具有抑菌活... 目的:在裂殖酵母中表达死亡素。方法:通过PCR方法人工合成死亡素基因,构建重组表达载体pRHZ41Tha,转化到裂殖酵母中,杯碟法检验表达产物活性。结果:重组载体构建成功并且转化到酵母中,外源基因在转化子中得到了表达,表达产物具有抑菌活性。结论:本研究成功构建了具有抑菌活性的表达产物,为进一步将死亡素研制成添加剂和药物奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 死亡素 裂殖酵母 表达 抑菌

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融合6个组氨酸的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在家蚕幼虫中的表达 被引量：1

14

作者 朱立成 陈健 +2 位作者 林蓉 金勇丰 张耀洲 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期613-616,共4页

将融合6个组氨酸(6×his)序列的hGM-CSF基因插入杆状病毒转移载体pBacPAK8中得到杆状病毒重组转移载体pBacPAKHis-GM-CSF,pBacPAKHis-GM-CSF DNA与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染BmN细胞,获得了表达rhGM-CSF融合蛋白的重组病毒vBac... 将融合6个组氨酸(6×his)序列的hGM-CSF基因插入杆状病毒转移载体pBacPAK8中得到杆状病毒重组转移载体pBacPAKHis-GM-CSF,pBacPAKHis-GM-CSF DNA与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染BmN细胞,获得了表达rhGM-CSF融合蛋白的重组病毒vBacPAKHis-GM-CSF.用重组病毒感染家蚕五龄起蚕,分别在24、48、72、961、20 h和144 h剪腹足取蚕血淋巴,ELISA法测得rhGM-CSF融合蛋白在120 h的蚕血淋巴中表达量最高,约为15μg/mL蚕血淋巴.融合蛋白通过Poly-His Protein Purification Kit纯化.SDS-PAGE和Western blotting分析表明,表达产物是3种糖基化程度不同的,分子量分别约为18、203、1 kD的蛋白质. 展开更多

关键词 hGM—CSF 家蚕杆状病毒表达系统 融合表达

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蛋白酶抑制剂的应用进展 被引量：2

15

作者 张苗 张耀洲 金勇丰 《农机化研究》 北大核心 2005年第2期202-204,共3页

蛋白酶抑制剂(PI)是在动植物及微生物体内广泛存在的一种对蛋白水解酶活性有抑制作用的小分子量蛋白质。蛋白酶抑制剂在调节蛋白酶活性和蛋白质代谢等方面起着重要的作用,近年来发现它在许多疾病及病理过程中有控制作用。为此,综述了蛋... 蛋白酶抑制剂(PI)是在动植物及微生物体内广泛存在的一种对蛋白水解酶活性有抑制作用的小分子量蛋白质。蛋白酶抑制剂在调节蛋白酶活性和蛋白质代谢等方面起着重要的作用,近年来发现它在许多疾病及病理过程中有控制作用。为此,综述了蛋白酶抑制剂在农业和临床治疗上的应用。 展开更多

关键词 蛋白酶抑制剂 体内 临床治疗 病理过程 调节蛋白 应用进展 抑制作用 酶活性 控制作用 蛋白质

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马传染性贫血病毒膜蛋白基因的改造及其在真核细胞中的表达 被引量：1

16

作者 陈新江 孟庆来 +2 位作者 毛洁 张晓燕 张耀洲 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2008年第5期547-553,共7页

以马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)天然膜蛋白基因(gp120)为基础设计的DNA疫苗在马体内的表达量很低,这与密码子使用偏嗜性、RNA剪切位点多和导致RNA不稳定性的腺苷丰富区的大量存在有关。为解决这些问题,合成了... 以马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)天然膜蛋白基因(gp120)为基础设计的DNA疫苗在马体内的表达量很低,这与密码子使用偏嗜性、RNA剪切位点多和导致RNA不稳定性的腺苷丰富区的大量存在有关。为解决这些问题,合成了EIAVgp120基因(Syn-env),使其密码子偏嗜性符合高水平表达的哺乳动物基因。EIAV弱毒疫苗的制备过程中,出现了几个重要而稳定的N-糖基突变位点,以Syn-env为基础,运用重叠延伸PCR定点突变策略获得了6个具有不同N-糖基缺失组合的gp120基因。将突变后的基因克隆到真核表达载体pVRCSV1.0,然后转染Hela细胞,发现这些重组质粒均获得了表达。进而为比较6种质粒诱导机体免疫保护效果,阐明EIAV弱毒疫苗减毒机理奠定了基础。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 GP120 定点突变 N-糖基化位点 真核表达

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马传染性贫血病毒gp90蛋白的表达及其在诊断中的潜在应用

17

作者 陈新江 毛洁 +2 位作者 孟庆来 张晓燕 张耀洲 《科技通报》 北大核心 2009年第3期300-304,共5页

以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90为模板,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Western blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋... 以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90为模板,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Western blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,测定的效价为1∶13,000。 展开更多

关键词 GP90基因 原核表达 纯化 EIAV 诊断

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家蚕杆状病毒(BmNPV)Bm122基因的缺失影响芽生型病毒粒子的形成

18

作者 朱丽萍 于威 +2 位作者 陈滨 何欢 解纯刚 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2016年第2期277-282,共6页

为研究家蚕杆状病毒（BmNPV）编码的Bm122基因的生物学功能,利用Red重组技术和Bac-to-Bac系统分别构建了Bm122-ko-bacmid和Bm122-re-bacmid,实现对Bm122基因的敲除和异位补回。进而将Bm122-kobacmid、Bm122-re-bacmid、wtbacmid（野生... 为研究家蚕杆状病毒（BmNPV）编码的Bm122基因的生物学功能,利用Red重组技术和Bac-to-Bac系统分别构建了Bm122-ko-bacmid和Bm122-re-bacmid,实现对Bm122基因的敲除和异位补回。进而将Bm122-kobacmid、Bm122-re-bacmid、wtbacmid（野生型）分别转染BmN细胞,病毒滴度测定结果显示：Bm122缺失后,病毒无法形成正常水平的芽生型病毒粒子（budded virus,BV）,表明该基因是病毒生成有感染力的BV所必需的基因;透射电子显微镜观察发现,Bm122敲除后细胞内未观察到杆状病毒粒子,进一步证实Bm122的缺失影响了BV的生成。qPCR结果显示,Bm122缺失后病毒DNA复制水平降低。结果表明,Bm122是病毒生成正常水平的BV所必需的基因。 展开更多

关键词 家蚕杆状病毒 Bm122基因 Red重组技术 BAC-TO-BAC系统 病毒复制

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大肠杆菌NrfA蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备

19

作者 何婷婷 龚钢明 高然 《安徽农业科学》 CAS 2012年第10期5786-5788,共3页

[目的]克隆大肠杆菌NrfA基因,构建pET-28a(+)-NrfA表达载体,制备相应的多克隆抗体并对其进行鉴定。[方法]以大肠杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增得到NrfA基因编码区,构建pET-28a(+)-NrfA表达载体;经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白;再免疫新西... [目的]克隆大肠杆菌NrfA基因,构建pET-28a(+)-NrfA表达载体,制备相应的多克隆抗体并对其进行鉴定。[方法]以大肠杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增得到NrfA基因编码区,构建pET-28a(+)-NrfA表达载体;经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白;再免疫新西兰雄兔,制备多克隆抗体;用ELISA方法检测抗体的效价,Western Blotting检测抗体的特异性。[结果]构建的表达载体pET-28a(+)-NrfA在大肠杆菌中诱导后可高效表达NrfA蛋白;免疫获得的多克隆抗体用ELISA检测,其效价为1∶204 900;经Western Blotting分析,抗体的特异性较好。[结论]成功克隆大肠杆菌的NrfA基因,并构建了其表达载体,制备的NrfA多克隆抗体具有较高的效价和良好的特异性,为研究细菌有关NrfA奠定了基础。 展开更多

关键词 NrfA基因 原核表达 多克隆抗体

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Jagged1蛋白抑制神经干细胞向神经元分化的实验 被引量：2

20

作者 樊拥军 崔筱英 +1 位作者 吴树亮 金连弘 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期124-126,F004,共4页

目的:研究Jagged1蛋白对神经干细胞分化的影响。方法:分离小鼠胚胎脑神经干细胞,用Jagged1蛋白、Jagged1蛋白+γ泌肽酶体外诱导神经干细胞分化,观察分化后神经元所占的比例。结果:分离的细胞能持续增殖,并能分化为神经元、星形胶质细胞... 目的:研究Jagged1蛋白对神经干细胞分化的影响。方法:分离小鼠胚胎脑神经干细胞,用Jagged1蛋白、Jagged1蛋白+γ泌肽酶体外诱导神经干细胞分化,观察分化后神经元所占的比例。结果:分离的细胞能持续增殖,并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞;在Jagged1蛋白的影响下,分化后神经元数量明显减少;γ泌肽酶抑制剂能阻断Jagged1蛋白的诱导作用。结论:培养的细胞为神经干细胞,并表达Notch受体;Jagged1蛋白能抑制干细胞向神经元分化,这种分化作用是通过Notch受体实现的。 展开更多

关键词 神经元分化 JAGGED1 蛋白抑制 神经干细胞分化 D1蛋白 Notch 实验 脑神经干细胞 少突胶质细胞 星形胶质细胞 神经元数量 培养的细胞 小鼠胚胎 体外诱导 诱导作用 酶抑制剂 分化作用 分离 受体

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