乳腺生物反应器的研究和产业化进展 被引量：12

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作者 付玉华 周秀梅 钱其军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第8期45-51,共7页

随着转基因技术的发展,利用乳腺生物反应器生产珍贵药用蛋白已成为一种极具潜力的生物技术,它为商业化前景广阔的药用蛋白提供了高产量、低成本的生产方式,开创了基因工程制药的新途径。目前,应用乳腺生物反应器已表达百余种药用蛋白,... 随着转基因技术的发展,利用乳腺生物反应器生产珍贵药用蛋白已成为一种极具潜力的生物技术,它为商业化前景广阔的药用蛋白提供了高产量、低成本的生产方式,开创了基因工程制药的新途径。目前,应用乳腺生物反应器已表达百余种药用蛋白,其中近30种进入临床试验不同阶段,用于治疗抗凝血酶缺乏症的抗凝血酶Ⅲ(ATryn)已上市,乳腺生物反应器生产重组蛋白显示出广阔的产业化前景。作者概述了乳腺生物反应器的原理、优点、国内外研究进展和产业化进程,讨论了其目前存在问题和应对策略。 展开更多

关键词 转基因动物 乳腺生物反应器 重组蛋白 多潜能干细胞

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HSV-tk联合GCV自杀系统对肝癌细胞株Huh-7杀伤作用的研究 被引量：2

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作者 郭国英 谢国良 +2 位作者 何国清 孔彦平 王毅刚 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2011年第2期246-250,共5页

单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessi mplex virus-thymidine kinase,HSV-tk)基因,是目前研究比较多的自杀基因,其与前体药物丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)构成HSV-tk/GCV自杀基因系统。本实验将携带HSV-tk基因的慢病毒转染Huh-7细胞,通过报告... 单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessi mplex virus-thymidine kinase,HSV-tk)基因,是目前研究比较多的自杀基因,其与前体药物丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)构成HSV-tk/GCV自杀基因系统。本实验将携带HSV-tk基因的慢病毒转染Huh-7细胞,通过报告基因反映慢病毒的转染效率;基因组PCR及RT-PCR检测转染Huh-7细胞中的HSV-tk基因的整合及表达;MTT检测不同浓度药物处理后的细胞存活率;最后HSV-tk+与HSV-tk-的Huh-7细胞以不同比例混合,MTT测定GCV作用后细胞的存活率。结果表明,HSV-tk/GCV系统作用于Huh-7细胞后,细胞出现明显的凋亡现象,旁观者效应比较明显。 展开更多

关键词 HSV-TK GCV 肝癌细胞Huh-7 旁观者效应

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K562/ADR细胞的5型腺病毒感染率研究

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作者 牛娜 贾晓渊 +3 位作者 路巧然 李新 陈磊 陈侃 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2010年第5期795-798,804,共5页

腺病毒是目前肿瘤基因治疗研究的常用载体,而5型腺病毒(Ad5)以其复制效率高、载体容量大等优势而被广泛用于基因治疗的相关研究。比较5型腺病毒对人白血病细胞K562及其耐药株K562/ADR的感染效率,并分析引起这种差异的分子机制。流式细... 腺病毒是目前肿瘤基因治疗研究的常用载体,而5型腺病毒(Ad5)以其复制效率高、载体容量大等优势而被广泛用于基因治疗的相关研究。比较5型腺病毒对人白血病细胞K562及其耐药株K562/ADR的感染效率,并分析引起这种差异的分子机制。流式细胞术及荧光显微镜观察,结果显示,5型腺病毒对K562/ADR的感染效率明显高于K562;Real time PCR定量分析表明K562/ADR细胞株表面的CAR表达水平约为K562的1.33倍(P<0.05),而整合素αν表达则是K562的4.36倍(P<0.01)。 展开更多

关键词 5型腺病毒 K562 K562/ADR CAR 整合素αν

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蛋白酶体抑制剂MG132诱导KG-1细胞凋亡的机制研究

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作者 陈磊 范丽 +5 位作者 李新 谢国良 何国清 路巧然 吴欣欣 李恭楚 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2011年第4期597-601,共5页

研究蛋白酶体抑制剂MG132对人急性髓性白血病细胞株KG-1的致凋亡作用及其对细胞内信号传导因子NF-κB与凋亡蛋白PARP表达的影响。采用CCK-8法检测MG132对KG-1细胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色法,从形态学上观察凋亡的KG-1细胞;W... 研究蛋白酶体抑制剂MG132对人急性髓性白血病细胞株KG-1的致凋亡作用及其对细胞内信号传导因子NF-κB与凋亡蛋白PARP表达的影响。采用CCK-8法检测MG132对KG-1细胞增殖的抑制作用;利用Hoechst33342染色法,从形态学上观察凋亡的KG-1细胞;Western blot检测NF-κB活性及与凋亡相关的蛋白变化情况。CCK-8法检测结果表明,MG132能明显抑制KG-1细胞生长,并呈现时间依赖性和浓度依赖性;Hoechst染色和Western blot检测实验证明,MG132诱导KG-1细胞发生凋亡的同时,NF-κB活性明显降低,细胞凋亡蛋白PARP降解为P89蛋白。以上结果显示,MG132能诱导KG-1细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制NF-κB信号转导通路,下调NF-κB表达继而增加凋亡蛋白PARP剪切有关。 展开更多

关键词 蛋白酶体抑制剂 KG-1细胞 细胞凋亡 NF-ΚB PARP

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LPS与巨噬细胞中htra2的表达及相关性研究

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作者 韩文正 武虎 +4 位作者 李晓艳 李红艳 姚韵靓 郭科妮 周秀梅 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2013年第3期383-388,共6页

通过LPS(lipopolysaccharide)分别刺激树突状细胞和巨噬细胞,发现巨噬细胞中HtrA丝氨酸蛋白酶2(HtrA serine peptidase 2,htra2)基因的表达随着刺激时间的延长呈现下调的变化趋势,提示巨噬细胞中的htra2受到LPS的调控。为了进一步证实LP... 通过LPS(lipopolysaccharide)分别刺激树突状细胞和巨噬细胞,发现巨噬细胞中HtrA丝氨酸蛋白酶2(HtrA serine peptidase 2,htra2)基因的表达随着刺激时间的延长呈现下调的变化趋势,提示巨噬细胞中的htra2受到LPS的调控。为了进一步证实LPS刺激的特异性,实验建立VSV(vesicular stomatitis virus)病毒感染巨噬细胞模型,采用荧光定量PCR,免疫荧光方法分别从htra2的蛋白水平和定位上研究htra2的变化与LPS刺激巨噬细胞产生效应的相关性;构建了htra2基因过表达的质粒pKH3-htra2-HA,采用ELISA,Western Blot及荧光定量PCR等方法,检测过表达htra2对巨噬细胞产生和分泌炎症因子IL-6(Interleukin-6)及IL-1b(Interleukin-1b)的影响。实验结果表明:htra2仅在LPS刺激巨噬细胞的体系中受到调控,且过表达的htra2会上调巨噬细胞IL-1b和IL-6的表达水平。 展开更多

关键词 巨噬细胞 LPS VSV 免疫荧光 IL-6

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融合蛋白sCAR-TSP-1原核表达纯化及诱导白血病细胞K562凋亡的研究

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作者 梁天祥 谌贺宽子 +2 位作者 陈磊 武虎 唐斌 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2012年第4期584-588,共5页

根据thrombospondin-1(TSP-1)氨基酸序列(RFYVVMWK),以已有的腺病毒受体sCAR为模板,将8个氨基酸对应基因核苷酸通过PCR扩增于sCAR之后,得到sCAR-TSP-1,连接到表达载体pQE30上,转化大肠杆菌M15后获得工程茵。该菌株经IPTG诱导后,高效表... 根据thrombospondin-1(TSP-1)氨基酸序列(RFYVVMWK),以已有的腺病毒受体sCAR为模板,将8个氨基酸对应基因核苷酸通过PCR扩增于sCAR之后,得到sCAR-TSP-1,连接到表达载体pQE30上,转化大肠杆菌M15后获得工程茵。该菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签以包涵体形式存在的融合蛋白sCAR-TSP-1。包涵体经过尿素变性溶解、PBS稀释复性、Ni离子亲和层析柱纯化,获得目的蛋白。SDS-PAGE分析表明,有一条明显的特异性蛋白条带。同时细胞实验结果表明融合蛋白sCAR-TSP-1对白血病细胞K562有明显凋亡作用。 展开更多

关键词 TSP-1 sCAR-TSP-1融合蛋白 原核表达 白血病细胞

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丁酸钠逆转H460/5-FU肺癌细胞耐药性的研究

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作者 吴欣欣 李晓艳 +2 位作者 武虎 刘海燕 陈侃 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2012年第4期609-613,共5页

肺癌耐药是化疗成功的主要障碍,因此肺癌细胞的耐药逆转研究具重要意义。实验通过流式细胞术检测到对5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)耐受的细胞系H460/5-FU中的SP细胞含量较亲本细胞H460明显升高,经丁酸钠诱导分化后,H460/5-FU对5-FU... 肺癌耐药是化疗成功的主要障碍,因此肺癌细胞的耐药逆转研究具重要意义。实验通过流式细胞术检测到对5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)耐受的细胞系H460/5-FU中的SP细胞含量较亲本细胞H460明显升高,经丁酸钠诱导分化后,H460/5-FU对5-FU的敏感性增加,表现为细胞存活率降低,细胞凋亡率提高,而且这种改变随着丁酸钠浓度的增加而增强。结果提示丁酸钠具备逆转肺癌耐药细胞系H460/5-FU耐药的能力。 展开更多

关键词 肺癌 丁酸钠 SP细胞 耐药逆转

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SIK1在巨噬细胞中调控IL-6及IL-12表达的研究

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作者 娄军 欧阳川 +4 位作者 郑明珠 姚韵靓 王珞 仇庆 周秀梅 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2011年第4期591-596,共6页

通过LPS(lipopolysaccharide)刺激巨噬细胞,发现盐诱导激酶(Salt Inducible Kinase 1,SIK1)基因的表达随着刺激时间呈现一定的变化趋势。提示SIK1在免疫系统中可能具有潜在的功能。实验构建了Sik1基因过表达的腺病毒载体Ad-Sik1,通过感... 通过LPS(lipopolysaccharide)刺激巨噬细胞,发现盐诱导激酶(Salt Inducible Kinase 1,SIK1)基因的表达随着刺激时间呈现一定的变化趋势。提示SIK1在免疫系统中可能具有潜在的功能。实验构建了Sik1基因过表达的腺病毒载体Ad-Sik1,通过感染RAW264.7细胞过表达Sik1基因,采用荧光定量PCR、ELISA及Western Blot等方法,分别从mRNA及蛋白质水平探讨SIK1与免疫炎症因子IL-6(Interleukin-6)及IL-12(Interleukin-12)之间的关系。实验结果表明:SIK1能够上调免疫炎症因子IL-6I、L-12的表达。这将为免疫调节的研究及一些免疫相关疾病的临床诊断与治疗提供一定的理论依据。 展开更多

关键词 SIK1 LPS刺激 IL-6 IL-12

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人芳香基硫酸酯酶(HSulf-1)基因的原核表达及酶活初步研究

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作者 马会彦 陈钊 +3 位作者 李杰 莫敏俐 谢国良 盛清 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2011年第5期789-794,共6页

人芳香基硫酸酯酶(HSulf-1)是一类分泌型蛋白,能在中性条件下改变硫酸肝素蛋白聚糖(HSPGs)的硫酸化状态,从而影响多种信号分子与其相应受体的结合,进而影响细胞信号通路。鉴于HSulf-1具有重要的潜在应用价值,为获得大量纯化蛋白以探索... 人芳香基硫酸酯酶(HSulf-1)是一类分泌型蛋白,能在中性条件下改变硫酸肝素蛋白聚糖(HSPGs)的硫酸化状态,从而影响多种信号分子与其相应受体的结合,进而影响细胞信号通路。鉴于HSulf-1具有重要的潜在应用价值,为获得大量纯化蛋白以探索其功能与应用,文章将HSulf-1功能域基因片段与pGEX-6p-1表达载体连接构建成重组质粒,在原核表达系统BL21中表达、分离纯化了HSulf-1的功能域片段,并以4-Mus为底物用荧光光度法进行了酶活性的测定。结果表明,原核表达能得到电泳纯级的HSulf-1纯化蛋白,但其具有酶活性的条件需要进一步探索。 展开更多

关键词 芳香基硫酸酯酶 HSulf-1 原核表达 酶活性

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卵巢癌病人腹水细胞的培养及其分化研究

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作者 路巧然 吴欣欣 +2 位作者 贾晓渊 陈磊 陈侃 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2011年第5期809-813,共5页

肿瘤干细胞是指能分化出不同表型、自我更新和不断分化的肿瘤细胞群,具有与干细胞相似的特征。文章通过流式细胞术分析从人卵巢癌腹水分离所得的细胞表面蛋白的分化特征,发现这些腹水细胞具有部分干细胞表面标志(CD44+,CD90+,β2M+)蛋白... 肿瘤干细胞是指能分化出不同表型、自我更新和不断分化的肿瘤细胞群,具有与干细胞相似的特征。文章通过流式细胞术分析从人卵巢癌腹水分离所得的细胞表面蛋白的分化特征,发现这些腹水细胞具有部分干细胞表面标志(CD44+,CD90+,β2M+)蛋白,但却不表达CD133和CD34,且体外培养2周后,腹水细胞表面标志发生了变化,这些结果为卵巢癌干细胞研究提出了新的启示。 展开更多

关键词 肿瘤干细胞 卵巢癌病人腹水细胞 表面标志

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AFP与CEA基因的启动子克隆及肿瘤细胞特异性表达的研究

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作者 雷文 王世兵 +3 位作者 马步云 叶静 夏玉龙 王毅刚 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2012年第1期119-124,共6页

为了研究AFP和CEA基因启动子的转录活性与肿瘤特异性,本实验利用PCR技术扩增AFP和CEA基因上游序列,并将其克隆到pGL3-Basic载体中构建pGL3-AFP和pGL3-CEA荧光报告质粒。将构建的pGL3-AFP和pGL3-CEA质粒分别与pRL-TK共转染人结肠癌细胞株... 为了研究AFP和CEA基因启动子的转录活性与肿瘤特异性,本实验利用PCR技术扩增AFP和CEA基因上游序列,并将其克隆到pGL3-Basic载体中构建pGL3-AFP和pGL3-CEA荧光报告质粒。将构建的pGL3-AFP和pGL3-CEA质粒分别与pRL-TK共转染人结肠癌细胞株SW620、肝癌细胞株Huh-7、肺癌细胞株A549、宫颈癌细胞株Hela、人肝正常细胞株QSG-7701、人肺正常细胞株Beas-2b,用双荧光报告系统检测这两种质粒在不同细胞里的荧光活性表达。酶切和测序结果证实成功构建了双荧光素酶报告质粒pGL3-AFP和pGL3-CEA,双荧光素酶报告基因检测结果证明AFP和CEA均具有一定的肿瘤特异性。这些结果表明AFP和CEA均具有一定的肿瘤特异性,为进一步研究AFP和CEA基因的表达调控机制和探讨靶向基因-病毒治疗提供依据。 展开更多

关键词 AFP CEA双荧光素酶报告基因 转录靶向性

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以干细胞特异性转录因子诱导小鼠肝癌细胞Hepa1-6重新编程的研究

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作者 宋波 彭新荣 +3 位作者 刘韬 周秀梅 瞿存业 钱其军 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2010年第1期120-124,共5页

利用逆转录病毒携带小鼠Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc基因介导Hepa1-6小鼠肝癌细胞系重新编程,得到一团自律性跳动的细胞团,及一群形态学上明显类似于小鼠胚胎干细胞的克隆样细胞团。经长期传代,克隆样细胞能保持其形态。检测证实,这些克隆... 利用逆转录病毒携带小鼠Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc基因介导Hepa1-6小鼠肝癌细胞系重新编程,得到一团自律性跳动的细胞团,及一群形态学上明显类似于小鼠胚胎干细胞的克隆样细胞团。经长期传代,克隆样细胞能保持其形态。检测证实,这些克隆样细胞团表达Oct4、Sox2蛋白。证实,Hepa1-6小鼠肝癌细胞可以被携带Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc基因的逆转录病毒感染的方法诱导重新编程。 展开更多

关键词 肝细胞癌 重新编程 转录因子

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利用杆状病毒系统获得携带抗体表达基因的双链AAV的研究

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作者 刘海燕 钱其军 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2013年第6期870-876,共7页

研究使用二杆状病毒-昆虫细胞系统获得携带抗体表达基因的8型双链腺相关病毒(scAAV)。首先利用杆状病毒系统获得ssrAAV8-EGFP和scrAAV8-EGFP,实验表明scrAAV8-EGFP比ssrAAV8-EGFP具有更高的转导效率;然后以同样的方法获得scrAAV8-AT7,... 研究使用二杆状病毒-昆虫细胞系统获得携带抗体表达基因的8型双链腺相关病毒(scAAV)。首先利用杆状病毒系统获得ssrAAV8-EGFP和scrAAV8-EGFP,实验表明scrAAV8-EGFP比ssrAAV8-EGFP具有更高的转导效率;然后以同样的方法获得scrAAV8-AT7,检测其滴度,并感染HEK293细胞以检测抗体的表达情况。蛋白印迹法检测出阿瓦斯汀(Avastin)重轻链已成功表达,ELISA检测出Avastin在体外的表达量可达770ng/mL。该研究表明利用杆状病毒系统所获得8型scAAV具有生物学活性并能实现外源基因的体外表达。 展开更多

关键词 杆状病毒 双链AAV 病毒生产 外源

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组蛋白去乙酰化抑制剂SBHA对急性髓细胞白血病细胞的杀伤作用 被引量：4

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作者 徐燕华 杨春梅 钱文斌 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期491-497,共7页

目的:观察组蛋白去乙酰化抑制剂suberic bishydroxamate(SBHA)对人急性髓系白血病(AML)细胞株的杀伤作用。方法:将不同浓度的SBHA分别作用于对数生长期的AML细胞24 h,MTT比色法检测药物对细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术(FACS)检测... 目的:观察组蛋白去乙酰化抑制剂suberic bishydroxamate(SBHA)对人急性髓系白血病(AML)细胞株的杀伤作用。方法:将不同浓度的SBHA分别作用于对数生长期的AML细胞24 h,MTT比色法检测药物对细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术(FACS)检测细胞凋亡率,Western blot法检测药物处理后Caspase途径和凋亡相关蛋白的改变。结果:SBHA能显著抑制AML细胞株U937、KG-1及Kasumi-1细胞的生长。AnnexinV-PI双标记法及FACS分析结果证实,SBHA能显著诱导白血病细胞的凋亡,激活Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8,下调抗凋亡蛋白Bcl-2及Bcl-xl的表达,下调Survivin、XIAP及cIAP的表达。结论:组蛋白去乙酰化抑制剂SBHA能显著抑制人AML细胞株的增殖、促进其凋亡,对凋亡相关蛋白的调控是其作用机制之一。 展开更多

关键词 白血病 髓样 急性/药物疗法 白血病 髓样 急性/病理学 蛋白激酶抑制剂/化学 细胞凋亡/药物作用 肿瘤细胞 培养的

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蛋白酶体抑制剂MG132诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的机制 被引量：3

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作者 张静 刘锡君 +3 位作者 李伟 孔彦平 章康健 周秀梅 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2010年第5期799-804,共6页

研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的作用与机制。实验采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测和Western印迹分别检测MG132对Hep3B细胞的形态、凋亡小体形成、细胞... 研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)诱导肝癌细胞Hep3B凋亡的作用与机制。实验采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测和Western印迹分别检测MG132对Hep3B细胞的形态、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果表明,MG132能够选择性抑制肝癌细胞生长,对正常肝细胞没有明显影响。此外,MG132可以通过内质网应激途径诱导肝癌细胞Hep3B凋亡,呈现剂量和时间的双重依赖性。提示通过抑制蛋白酶体来达到诱导肿瘤细胞凋亡的方法是可行的,MG132此类药物的研究与应用将为肿瘤治疗提供新的选择。 展开更多

关键词 蛋白酶体抑制剂 肝癌细胞 凋亡 内质网应激 CASPASE-12

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PD-1抗体表达载体的构建以及其功能的探究

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作者 陶雷 黎江 +1 位作者 朱海莉 钱其军 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2014年第6期697-701,共5页

通过构建含PD-1抗体基因的重组腺病毒表达载体Ad35-anti-PD-1,表达的PD-1抗体以探究其对细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)抗肿瘤功能的影响。用ELISA实验检测Ad35-anti-PD-1在293细胞中PD-1抗体的表达量;利用Protein G亲... 通过构建含PD-1抗体基因的重组腺病毒表达载体Ad35-anti-PD-1,表达的PD-1抗体以探究其对细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)抗肿瘤功能的影响。用ELISA实验检测Ad35-anti-PD-1在293细胞中PD-1抗体的表达量;利用Protein G亲和层析法纯化PD-1抗体;通过体外杀伤实验研究PD-1抗体阻断PD-1信号通路的CTL杀伤肝癌细胞能力的变化。显示成功构建重组腺病毒载体Ad35-anti-PD-1,滴度为1×1010 pfu/mL;ELISA实验检测在72h时293细胞上清中PD-1抗体的表达量约在600ng/mL;Westernblotting实验证明PD-1抗体包含正确的重链(50kD)和轻链(25kD);ELISA实验检测从100mL细胞上清中得到1mL浓度在40μg/mL的PD-1抗体;体外杀伤实验证明CTL在添加PD-1抗体的环境中杀伤肝癌细胞的能力显著增强。 展开更多

关键词 CTL PD-1抗体 抗肿瘤 免疫细胞治疗 免疫抑制

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Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T细胞白血病Molt-4细胞周期和凋亡的影响

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作者 李敏 曹慧 钱文斌 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2012年第4期589-593,共5页

为了研究Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4增殖和凋亡的影响,采用MTT法检测了BIIB021对Molt-4细胞增殖的影响,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞术检测药物作用前后细胞周期和凋亡的改变,We... 为了研究Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4增殖和凋亡的影响,采用MTT法检测了BIIB021对Molt-4细胞增殖的影响,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞术检测药物作用前后细胞周期和凋亡的改变,Western blotting检测BIIB021对细胞周期和凋亡相关蛋白的影响。结果显示:BIIB021以时间和剂量依赖性方式抑制Molt-4细胞增殖,48、72h的IC50分别为384.6nmol/L和301.8nmol/L;Hoechst33258染色可观察到细胞内出现凋亡小体,且随着药物浓度增大,凋亡小体的数目也逐渐增多;流式结果同样显示,随着药物浓度升高,细胞凋亡率逐渐上升,400nmol/L BIIB021可诱导细胞凋亡率达34.4%;另外,BIIB021可显著阻滞细胞于G0/G1期;Western blotting显示BIIB021激活Caspase-8、-9、-3和PARP,下调CDK4/6,上调p21和p18,并能明显抑制Akt和p65。由此表明,BIIB021能激活死亡受体途径和线粒体途径诱导Molt-4细胞凋亡,并通过影响CDK4/6和p21、p18使得Molt-4细胞被阻滞于G0/G1期,抑制细胞增殖;BIIB021对Molt-4的Akt和NF-κB也有抑制作用。 展开更多

关键词 HSP90抑制剂 BIIB021 急性T淋巴细胞白血病 细胞凋亡 细胞周期

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冬凌草甲素诱导乳腺癌Bcap37细胞凋亡的探索 被引量：7

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作者 余越美 严巧灵 +2 位作者 章康健 岳学田 周秀梅 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2013年第3期377-382,共6页

探讨冬凌草甲素(oridonin)对人乳腺癌细胞Bcap-37的增殖、凋亡以及引起细胞凋亡机制。以不同浓度的Ori处理Bcap-37细胞,通过MTT法检测细胞生长抑制率;应用流式细胞分析术检测细胞凋亡;Western Blot检测细胞发生凋亡的机制。结果是48～96... 探讨冬凌草甲素(oridonin)对人乳腺癌细胞Bcap-37的增殖、凋亡以及引起细胞凋亡机制。以不同浓度的Ori处理Bcap-37细胞,通过MTT法检测细胞生长抑制率;应用流式细胞分析术检测细胞凋亡;Western Blot检测细胞发生凋亡的机制。结果是48～96μmol/L的Ori可显著抑制Bcap-37细胞的增殖(P<0.05)。48μmol/L的Ori作用24h后,细胞的增值抑制率达到了40%,而96μmol/L的Ori只需处理12h,增值抑制率竟达到了50%。96μmol/L Ori处理24h后,Bcap-37细胞的凋亡率为21.6%。Western Blot检测到了Fas的上调,细胞色素c的释放和随后Caspase 9的激活及其下游信号蛋白Caspase 3和它的底物PARP,ICAD的剪切。进一步检测到Survivin的下调和GADD34的上调。基于这些实验结果,推测冬凌草甲素作为一种潜在的抗乳腺癌制剂,诱导乳腺癌细胞Bcap37发生凋亡的发生可能与Survivin和GADD34相关。 展开更多

关键词 冬凌草甲素 细胞凋亡 乳腺癌 CASPASE SURVIVIN GADD34

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磷酸钙转染法用于第三代自身失活型慢病毒包装的探讨 被引量：4

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作者 杨智 骆菁菁 +1 位作者 钱程 刘立 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2010年第2期303-307,共5页

尝试使用价格低廉的磷酸钙转染法将慢病毒质粒转染进入293T细胞中生产病毒,并与目前广泛使用的脂质体转染法比较,验证该方法用于慢病毒包装的可行性及安全性。实验结果显示:磷酸钙转染法所产病毒产量达到脂质体转染法的一半,但价格却不... 尝试使用价格低廉的磷酸钙转染法将慢病毒质粒转染进入293T细胞中生产病毒,并与目前广泛使用的脂质体转染法比较,验证该方法用于慢病毒包装的可行性及安全性。实验结果显示:磷酸钙转染法所产病毒产量达到脂质体转染法的一半,但价格却不及脂质体转染法的1/100,因此十分适于病毒大规模生产使用。 展开更多

关键词 基因治疗 慢病毒 磷酸钙转染法

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高效表达Smad2蛋白的A549细胞模型的建立 被引量：4

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作者 袁素敬 梁余培 +1 位作者 陈勇毅 章康健 《浙江理工大学学报（自然科学版）》 2013年第3期372-376,共5页

将携带Smad2-Flag基因的慢病毒包装系列质粒转染293T细胞,进行慢病毒包装。用收集并纯化好的慢病毒感染A549细胞,流式分选筛选出GFP阳性的细胞,用Flag抗体和Smad2抗体进行Western blot鉴定。流式分选得到的GFP阳性的A549细胞经Western b... 将携带Smad2-Flag基因的慢病毒包装系列质粒转染293T细胞,进行慢病毒包装。用收集并纯化好的慢病毒感染A549细胞,流式分选筛选出GFP阳性的细胞,用Flag抗体和Smad2抗体进行Western blot鉴定。流式分选得到的GFP阳性的A549细胞经Western blot鉴定能高效表达外源Smad2-Flag融合蛋白,同时空载慢病毒处理的GFP阳性细胞并不表达Smad2-Flag蛋白。结果表明成功构建了高效表达Smad2蛋白的A549细胞系,为进一步研究超级干扰素抗肺癌的分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 A549细胞株 慢病毒 GFP SMAD2

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