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鱿鱼内脏活性物质的制备与功能研究进展
1
作者 刘倩茹 柏圣达 +2 位作者 赵国雨 徐云峰 杨最素 《安徽农业科学》 CAS 2017年第33期90-92,共3页
综述了鱿鱼内脏中生物活性物质的制备和功能研究进展,以期进行回收利用,提高经济价值,并减少下脚料引起的环境污染。
关键词 鱿鱼 内脏 制备 功能
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鳕鱼皮胶原蛋白肽在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制 被引量：6
2
作者 陈锐 丁国芳 +6 位作者 杨最素 余方苗 黄芳芳 唐云平 张小军 陈思 梅光明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第19期154-161,共8页
目的:鳕鱼皮胶原蛋白肽(cod skin collagen peptide,CSCP)对肝损伤具有较好的保护作用,但其吸收机制尚不明确,本实验拟采用人结肠腺癌Caco-2细胞单层模型对CSCP在肠道中的吸收机制进行研究,为CSCP在动物肠道内的吸收机制提供依据。方法... 目的:鳕鱼皮胶原蛋白肽(cod skin collagen peptide,CSCP)对肝损伤具有较好的保护作用,但其吸收机制尚不明确,本实验拟采用人结肠腺癌Caco-2细胞单层模型对CSCP在肠道中的吸收机制进行研究,为CSCP在动物肠道内的吸收机制提供依据。方法:在进行转运实验前,先对CSCP在人工胃、肠液、不同pH值条件及在Caco-2细胞单层中的稳定性进行评价;采用CCK-8(cell counting kit-8)法确定CSCP在转运实验中的最高质量浓度,然后建立Caco-2细胞单层模型并测定跨膜电阻值和碱性磷酸酶活力以检验细胞单层的致密性、完整性和极化现象;考察转运时间、CSCP质量浓度、维拉帕米、MK-571、氧化苯砷和去氧胆酸钠对转运的影响,利用高效液相色谱法检测CSCP质量浓度并计算累积转运量和表观渗透系数。结果:在3h内,CSCP在人工胃、肠液及接近胃肠道pH值环境中基本保持稳定,转运过程中未见多肽发生水解。CSCP的转运具有时间和浓度依赖性,不受维拉帕米和氧化苯砷的影响,去氧胆酸钠和MK-571对CSCP的转运具有非常显著的促进作用(P<0.05)。结论:CSCP跨Caco-2细胞单层转运的机制为细胞旁路途径,其外排受到多药耐药蛋白的介导。 展开更多
关键词 鳕鱼皮 胶原蛋白肽 胃肠道稳定性 CACO-2细胞 转运机制
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青蛤酶解多肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用 被引量：22
3
作者 叶盛旺 杨最素 +5 位作者 李维 唐云平 黄芳芳 张小军 余方苗 丁国芳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第7期185-191,共7页
研究酶解法制备的青蛤多肽(Cyclina sinensis peptides,CSP)对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。以RAW264.7巨噬细胞相对增殖率为指标,选用胃蛋白酶对青蛤肉进行酶解,酶解液经超滤、冷冻干燥后,采用噻唑蓝(methyl thiazolyltetrazolium,... 研究酶解法制备的青蛤多肽(Cyclina sinensis peptides,CSP)对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。以RAW264.7巨噬细胞相对增殖率为指标,选用胃蛋白酶对青蛤肉进行酶解,酶解液经超滤、冷冻干燥后,采用噻唑蓝(methyl thiazolyltetrazolium,MTT)法筛选出增殖活性最高的组分进行免疫调节作用研究。采用MTT细胞增殖实验、倒置显微镜观察、中性红吞噬实验、硝酸根还原酶法及酶联免疫吸附检测法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定CSP-5对RAW264.7巨噬细胞的生长与增殖、细胞形态、吞噬能力、一氧化氮(nitric oxide,NO)分泌能力及细胞因子白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌能力的影响;同时还研究了CSP-5对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于3 kDa的CSP-5对RAW264.7细胞的生长与增殖具有明显的促进作用,且主要作用于G0/G1期,对细胞吞噬能力、NO分泌能力和细胞因子分泌能力的提高具有显著的促进效果;形态学观察结果显示经CSP-5作用后巨噬细胞体积变大且长出较多伪足。由此可知,CSP-5具有激活巨噬细胞增强机体免疫力的潜在作用。 展开更多
关键词 酶解 青蛤多肽 RAW264.7巨噬细胞 免疫调节作用
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双齿围沙蚕多肽的制备及其抗肺癌A549细胞活性 被引量：7
4
作者 贾盈露 丁国芳 +4 位作者 杨最素 余方苗 郑媛媛 吴宗泽 陈锐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第12期27-35,共9页
探讨双齿围沙蚕酶解多肽制备的关键技术及其对肺癌A549细胞的作用。以增殖抑制率为指标,确定最佳酶种并根据单因素试验和正交试验确定其最佳酶解工艺。经超滤获得1~3 ku的酶解液,通过阴离子色谱、凝胶过滤色谱和制备色谱对其进行进一步... 探讨双齿围沙蚕酶解多肽制备的关键技术及其对肺癌A549细胞的作用。以增殖抑制率为指标,确定最佳酶种并根据单因素试验和正交试验确定其最佳酶解工艺。经超滤获得1~3 ku的酶解液,通过阴离子色谱、凝胶过滤色谱和制备色谱对其进行进一步的分离纯化。采用四甲基偶氮唑蓝法测定沙蚕多肽PAP对肺癌A549细胞的增殖抑制率并通过倒置显微镜、吖啶橙/溴化乙锭荧光染色及Hoechst荧光染色观察其细胞形态的变化。实验结果表明最佳酶种是碱性蛋白酶,其最佳酶解条件为:酶解温度50℃、pH 11、料液比1∶1(g/mL)、酶解时间6 h、加酶量300 U/g。经纯化获得的多肽命名为PAP,其氨基酸序列为Ile-Glu-Pro-Gly-Thr-Val-Gly-Met-Met-Phe,且PAP对A549细胞的作用呈时间与剂量依赖关系,作用后细胞出现了凋亡的形态学特征。因此,PAP能明显抑制肺癌细胞A549增殖,可以诱导其发生凋亡而发挥抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 双齿围沙蚕 多肽 抗肿瘤 A549细胞 细胞凋亡
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青蛤多肽的酶法制备及对前列腺癌DU-145细胞的抑制活性 被引量：4
5
作者 张亚茹 闫海强 +3 位作者 杨最素 余方苗 丁国芳 龚戬芳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第11期167-174,共8页
探讨青蛤多肽的制备工艺及体外抗前列腺癌DU-145细胞的活性。以氨基氮含量为检测指标,筛选最优酶种类并进行正交试验以获取最佳酶解青蛤内脏酶解工艺。经超滤截留、琼脂糖凝胶层析、高效液相色谱分离纯化及噻唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazo... 探讨青蛤多肽的制备工艺及体外抗前列腺癌DU-145细胞的活性。以氨基氮含量为检测指标,筛选最优酶种类并进行正交试验以获取最佳酶解青蛤内脏酶解工艺。经超滤截留、琼脂糖凝胶层析、高效液相色谱分离纯化及噻唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)活性筛选得到含有5个氨基酸的多肽(Ile-Leu-Tyr-Met-Pro)。对所得多肽采用MTT法测定DU-145细胞增殖抑制率;采用倒置显微镜、Hoechst 33258染色及透射电子显微镜技术观察细胞形态学变化;采用荧光法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用线粒体膜电位检测DU-145细胞凋亡情况;采用免疫组织化学法检测非转移性克隆23型(nm23H1)蛋白的表达。结果表明:制备青蛤多肽最佳酶是木瓜蛋白酶,最佳酶解条件是料液比1:4、pH 7.0、加酶量1 500 U/g、温度45.0℃、酶解时间4 h;所得多肽对DU-145细胞的增殖具有明显的抑制作用,且呈时间与剂量依赖性;处理后的DU-145细胞出现凋亡的形态学特征;其质量浓度和细胞内ROS的表达量呈正相关关系;线粒体膜电位降低率从4.22%提高到25.07%;免疫组织化学法结果显示nm23H1蛋白的表达量增加。青蛤多肽能明显抑制DU-145细胞的增殖,并通过诱导其发生凋亡而发挥作用。 展开更多
关键词 青蛤 酶解 前列腺癌 细胞凋亡
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双齿围沙蚕抗凝血肽的制备及其抗血栓作用 被引量：3
6
作者 郑媛媛 丁国芳 +4 位作者 杨最素 余方苗 贾盈露 吴宗泽 陈锐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第23期171-177,共7页
目的:探讨双齿围沙蚕抗凝血肽(anticoagulant peptides from Perinereis aibuhitensis,PAAP)的制备及其抗血栓作用。方法:以抗凝活力为检测指标,筛选最佳酶对沙蚕进行酶解。酶解产物经超滤、阴离子交换层析、凝胶过滤层析和反相高效液... 目的:探讨双齿围沙蚕抗凝血肽(anticoagulant peptides from Perinereis aibuhitensis,PAAP)的制备及其抗血栓作用。方法:以抗凝活力为检测指标,筛选最佳酶对沙蚕进行酶解。酶解产物经超滤、阴离子交换层析、凝胶过滤层析和反相高效液相色谱法分离纯化,得到具有最强抗凝活力的沙蚕寡肽,将此肽命名为PAAP并测定其急性毒性作用。采用角叉菜胶所致的小鼠尾部血栓形成实验、三氯化铁所致的大鼠动脉血栓形成实验及二磷酸腺苷(adenonisine disphosphate,ADP)诱导的血小板聚集实验,研究PAAP的抗血栓作用。结果:选取碱性蛋白酶作为最佳酶对沙蚕进行酶解,经过分离纯化后得到一条氨基酸序列:脯氨酸-缬氨酸-谷氨酸-精氨酸-赖氨酸(Pro-Val-Glu-Arg-Lys)。经测定,该寡肽的体外抗凝活力可达(1 320.0±20.3)U/g。PAAP的最大耐受量为11.0 g/(kg·d)且未出现小鼠异常及死亡现象,体内实验表明PAAP对小鼠尾部血栓的形成、大鼠动脉血栓的形成及ADP诱导的血小板聚集均有明显抑制作用。结论:从双齿围沙蚕中提取出的抗凝肽PAAP具有抗血栓作用。 展开更多
关键词 双齿围沙蚕 抗凝血肽 碱性蛋白酶 分离纯化 抗血栓
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响应面法优化日本黄姑鱼鱼肉免疫活性肽的提取工艺 被引量：11
7
作者 胡旭阳 李维 +5 位作者 孔祥东 韩行标 唐云平 余方苗 杨最素 丁国芳 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第17期173-178,共6页
为探讨日本黄姑鱼鱼肉免疫活性肽的提取工艺,本研究以日本黄姑鱼鱼肉为原料,采用5种不同的蛋白酶进行酶解,以酶解多肽对小鼠巨噬细胞RAW264.7的相对增殖率为指标,在单因素实验的基础上,以料液比、pH、酶解温度和酶解时间为考察因素,采用... 为探讨日本黄姑鱼鱼肉免疫活性肽的提取工艺,本研究以日本黄姑鱼鱼肉为原料,采用5种不同的蛋白酶进行酶解,以酶解多肽对小鼠巨噬细胞RAW264.7的相对增殖率为指标,在单因素实验的基础上,以料液比、pH、酶解温度和酶解时间为考察因素,采用Box-Behnken法进行四因素三水平试验设计,确定日本黄姑鱼鱼肉免疫活性肽的最佳提取工艺。结果表明,木瓜蛋白酶为最佳用酶;响应面优化得到的最佳提取工艺参数为:料液比1∶11 g/mL、pH6、酶解温度59℃、酶解时间5.4 h,在此条件下,酶解多肽对RAW 264.7细胞的相对增殖率为61.8%。本研究为日本黄姑鱼鱼肉提取免疫活性肽奠定基础,为进一步研究日本黄姑鱼鱼肉免疫肽的制备工艺提供参考。 展开更多
关键词 日本黄姑鱼 免疫活性肽 响应面 小鼠巨噬细胞RAW264.7
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文蛤寡肽对小鼠急性肝损伤的保护作用 被引量：10
8
作者 王佳佳 赵莎莎 +2 位作者 杨最素 余方苗 丁国芳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第13期190-195,共6页
对文蛤寡肽(Meretrix meretrix oligopeptides,MMO)在小鼠急性肝损伤中的保护作用进行研究。首先通过酶解、超滤、Sephadex G-25柱分离技术从文蛤中分离纯化出具有肝修复作用的文蛤寡肽,经检测该目标肽的氨基酸序列为Gln-Leu-Asn-Trp-As... 对文蛤寡肽(Meretrix meretrix oligopeptides,MMO)在小鼠急性肝损伤中的保护作用进行研究。首先通过酶解、超滤、Sephadex G-25柱分离技术从文蛤中分离纯化出具有肝修复作用的文蛤寡肽,经检测该目标肽的氨基酸序列为Gln-Leu-Asn-Trp-Asp。然后建立四氯化碳(CCl_4)致小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠肝脏指数;检测小鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltransferase,γ-GT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力及甘油三酯(triglyceride,TG)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;苏木精-伊红染色观察肝脏病理学改变;免疫组化法测定肝组织TNF-α、NF-κB蛋白表达量。结果表明:MMO组与模型组比较,小鼠肝指数显著降低(P<0.05);血清中ALT、AST、γ-GT活力显著降低(P<0.05),γ-GT活力最高降幅达到47.16%;SOD活力显著升高(P<0.05);TG、MDA水平显著降低(P<0.05),最高降幅分别达到31.88%和28.83%。;苏木精-伊红染色观察肝组织结构明显好转;TNF-α、NF-κB蛋白表达量显著降低。因此,MMO对CCl_4小鼠急性肝损伤有较为明显的保护作用。 展开更多
关键词 文蛤寡肽 四氯化碳 急性肝损伤
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文蛤寡肽对高脂饮食诱导小鼠肾损伤的修护作用 被引量：2
9
作者 王佳佳 叶蕾 +2 位作者 杨最素 余方苗 丁国芳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第15期145-151,共7页
目的:研究文蛤寡肽(Meretrix meretrix oligopeptides,MMO)对高脂饮食诱导小鼠肾损伤的修护作用。方法:建立高脂饲料致小鼠慢性肾损伤模型,通过MMO灌胃30 d后,测定小鼠肾脏指数,检测小鼠血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total ... 目的:研究文蛤寡肽(Meretrix meretrix oligopeptides,MMO)对高脂饮食诱导小鼠肾损伤的修护作用。方法:建立高脂饲料致小鼠慢性肾损伤模型,通过MMO灌胃30 d后,测定小鼠肾脏指数,检测小鼠血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)浓度,以及小鼠肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,计算小鼠动脉粥样硬化指数(atherosclerosis index,AI),苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠肾脏病理学改变,免疫组化法测定肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转录生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达量。结果:MMO组与模型组比较,小鼠肾脏指数,血清中TG、TC、LDL-C浓度及AI显著下降,HDL-C浓度显著升高,肾组织匀浆中SOD、GSH-Px活力显著升高,MDA含量显著降低,HE染色观察肾组织结构明显好转,免疫组化结果显示MMO可降低肾损伤小鼠α-SMA、TGF-β1蛋白表达水平。结论:MMO对高脂饮食诱导的小鼠肾损伤有较为明显的修护作用。 展开更多
关键词 文蛤寡肽 高脂饲料 肾损伤 修护作用
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响应面法优化青蛤降血压肽酶解制备工艺 被引量：2
10
作者 詹秋桂 李杰煌 +3 位作者 施鹏飞 雷鸣 罗李王 余方苗 《安徽农业科学》 CAS 2018年第5期7-9,24,共4页
[目的]采用响应面法优化青蛤降血压肽的酶解制备工艺。[方法]以青蛤肉为原料,木瓜蛋白酶为酶种,血管紧张素转换酶抑制率为指标,在单因素试验的基础上,选择pH、酶解时间和料液比为影响因素,进行3因素3水平的Box-Behnken试验设计,采用响... [目的]采用响应面法优化青蛤降血压肽的酶解制备工艺。[方法]以青蛤肉为原料,木瓜蛋白酶为酶种,血管紧张素转换酶抑制率为指标,在单因素试验的基础上,选择pH、酶解时间和料液比为影响因素,进行3因素3水平的Box-Behnken试验设计,采用响应面法分析3个因素对青蛤降血压肽制备工艺的影响。[结果]木瓜蛋白酶酶解制备青蛤降血压肽的最佳工艺条件为pH 5.8、酶解时间8.4 h、料液比1∶3.1,该条件下酶解产物对血管紧张素转换酶抑制率达93.58%。[结论]该研究为青蛤的高值化利用和降血压肽的制备提供了新思路。 展开更多
关键词 青蛤 木瓜蛋白酶 降血压肽 响应面法
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