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双酶共表达的条件优化及其硫辛酸中间体制备
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作者 魏婷 姜灵 杨胜利 《发酵科技通讯》 CAS 2024年第4期197-202,共6页
为解决酶法制备硫辛酸关键手性中间体(R)-8-氯-6羟基辛酸乙酯中的辅酶循环再生问题,将羰基还原酶基因Cat_(S126A/R129Q/V194A)和葡萄糖脱氢酶GDH基因构建在同一质粒中,成功构建了3种单质粒共表达载体,筛选出最佳单质粒共表达载体pETDUE... 为解决酶法制备硫辛酸关键手性中间体(R)-8-氯-6羟基辛酸乙酯中的辅酶循环再生问题,将羰基还原酶基因Cat_(S126A/R129Q/V194A)和葡萄糖脱氢酶GDH基因构建在同一质粒中,成功构建了3种单质粒共表达载体,筛选出最佳单质粒共表达载体pETDUET。研究了2个酶在双启动子双表达载体中的顺序,考察了反应中的关键酶Cat_(S126A/R129Q/V194A),选择E.coli BL21(DE3)/pETDUET-GDH-Cat_(S126A/R129Q/V194A)作为生物催化剂。优化该表达系统的表达条件,结果表明:E.coli BL21(DE3)/pETDUET-GDH-Cat_(S126A/R129Q/V194A)的最适诱导温度为25℃,最适诱导剂IPTG浓度为0.1 mmol/L,最适诱导OD_(600)为3.0。优化后的比酶活达20.8 U/mg(湿细胞),较优化前提高了64%。在此基础上,以共表达优化条件下培养的重组菌为催化剂,以8-氯-6-氧代辛酸乙酯(ECOO)为底物,开展100 mL反应体系研究。研究结果表明:质量浓度为100 g/L的重组菌可以在6 h内将220 g/L的ECOO还原成(R)-8-氯-6-羟基辛酸乙酯((R)-ECHO),收率达96%,ee为98%。 展开更多
关键词 生物催化 共表达 表达条件优化
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ESI-Q-TOF-MS/MS用于碳青霉烯类抗生素及其中间体质谱裂解机理研究
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作者 苏凤 孙子晴 +1 位作者 肖钦钦 梁现蕊 《发酵科技通讯》 CAS 2017年第2期70-76,99,共8页
采用电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱(ESI-Q-TOF-MS/MS),在正离子模式下,对美罗培南等碳青霉烯类抗生素及其合成中间体共8种化合物的裂解规律进行了探讨.实验结果显示碳青霉烯类抗生素在该质谱条件下易形成[M+H]^+离子,其合成中间体则... 采用电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱(ESI-Q-TOF-MS/MS),在正离子模式下,对美罗培南等碳青霉烯类抗生素及其合成中间体共8种化合物的裂解规律进行了探讨.实验结果显示碳青霉烯类抗生素在该质谱条件下易形成[M+H]^+离子,其合成中间体则易观察到[M+Na]+离子.该8种化合物裂解途径相似,主要为分子内脱羧基反应、四元内酰胺环裂解反应及侧链结构中C—S键的裂解反应. 展开更多
关键词 碳青霉烯类抗生素 电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱(ESI-Q-TOF-MS/MS) 裂解规律
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无比山药丸对氢化可的松致肾阳虚模型小鼠性功能的影响 被引量:4
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作者 陈青青 单超文 +4 位作者 苏洁 陈炜 朱加明 陈素红 吕圭源 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期697-704,共8页
目的:探讨无比山药丸对氢化可的松致肾阳虚模型小鼠性功能的影响。方法:采用雄性昆明小鼠皮下注射氢化可的松10 d制备肾阳虚模型,灌胃给予无比山药丸(0.91、1.82、2.73 g/kg)连续9周。观察小鼠一般行为学(自主活动、抓力);交配实验检测... 目的:探讨无比山药丸对氢化可的松致肾阳虚模型小鼠性功能的影响。方法:采用雄性昆明小鼠皮下注射氢化可的松10 d制备肾阳虚模型,灌胃给予无比山药丸(0.91、1.82、2.73 g/kg)连续9周。观察小鼠一般行为学(自主活动、抓力);交配实验检测雄鼠性行为(捕捉、骑跨、射精次数及潜伏期);ELISA法测定血清皮质醇、促肾上腺皮质激素、促黄体生成素、促卵泡生成素、雌二醇、睾酮水平;计算肾脏、附睾、睾丸和精囊器官指数;HE染色观察小鼠睾丸组织形态;TUNEL法检测睾丸细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测睾丸组织增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达水平。结果:无比山药丸能提高肾阳虚模型小鼠自主活动次数、抓力及捕捉次数,缩短捕捉潜伏期(均P<0.01);升高血清睾酮、皮质醇、促肾上腺皮质激素水平,降低血清促卵泡生成素水平(P<0.05或P<0.01);提高睾丸指数(P<0.05),改善睾丸病变;抑制细胞凋亡,促进睾丸PCNA蛋白表达。结论:无比山药丸能改善氢化可的松致肾阳虚小鼠性功能障碍,其机制可能与调节下丘脑-垂体-肾上腺轴,促进睾丸组织细胞增殖,抑制细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 肾阳虚 性功能 无比山药丸 小鼠 氢化可的松
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新型细胞活力检测EZMTT法的研究 被引量:1
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作者 张京京 阮奔放 《发酵科技通讯》 CAS 2017年第2期88-91,106,共5页
研究四氮唑盐/甲臜类EZMTT法检测细胞活力和增殖的应用并评价EZMTT法的优势.评价EZMTT法检测细胞增殖的准确性,对比EZMTT法与WST-8的灵敏度、毒性及细胞活力长期跟踪的应用.研究表明:细胞量为3 000~500 000时,在4h内EZMTT法信号值与细... 研究四氮唑盐/甲臜类EZMTT法检测细胞活力和增殖的应用并评价EZMTT法的优势.评价EZMTT法检测细胞增殖的准确性,对比EZMTT法与WST-8的灵敏度、毒性及细胞活力长期跟踪的应用.研究表明:细胞量为3 000~500 000时,在4h内EZMTT法信号值与细胞量成正比,且较现有产品WST-8检测试剂,EZMTT法更灵敏、毒性更低,可实现长达7d的细胞活力跟踪.0.06%十二烷基硫酸钠或50μmol/L盐酸可中止EZMTT反应.EZMTT法有望成为更为优秀的新一代细胞活力检测方法. 展开更多
关键词 EZMTT法 四氮唑盐/甲臜反应 细胞活力检测
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响应面法优化机械力辅助提取千里光酚类
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作者 俞静波 王英瑶 苏为科 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期257-264,共8页
以绿原酸和金丝桃苷为得率指标,考察机械球磨参数和提取参数,通过响应面法优化,获得机械力辅助提取千里光酚类的最佳工艺条件。结果表明:最佳提取工艺参数为填充率27.6%,转速308 r/min,球磨时间11.5 min。随后经单次水提10 min,绿原酸... 以绿原酸和金丝桃苷为得率指标,考察机械球磨参数和提取参数,通过响应面法优化,获得机械力辅助提取千里光酚类的最佳工艺条件。结果表明:最佳提取工艺参数为填充率27.6%,转速308 r/min,球磨时间11.5 min。随后经单次水提10 min,绿原酸得率为(5.040±0.042)mg/g,金丝桃苷得率为(0.485±0.004)mg/g。与乙醇热回流和水煎法相比,机械力辅助提取法能在较低的温度,无需使用有机溶剂下即可快速高效地获得酚类化合物,同时大大提高金丝桃苷的得率,减少提取物中吡咯里西啶类生物碱残留。 展开更多
关键词 千里光 酚类 机械球磨提取 响应面优化
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中链甘油三酯的制备、分析及应用研究进展 被引量:8
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作者 卢宇欣 陈雪帆 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第24期352-358,共7页
中链甘油三酯是指含有长度为C 8~C 12的脂肪酸的甘油三酯,同普通的植物油脂相比,其具有黏度小、表面张力小、氧化稳定性好等独特的理化性质和在人体中代谢速度快等特性。它既可作为治疗脂肪吸收不良、高血脂、肥胖等疾病的功能食品,又... 中链甘油三酯是指含有长度为C 8~C 12的脂肪酸的甘油三酯,同普通的植物油脂相比,其具有黏度小、表面张力小、氧化稳定性好等独特的理化性质和在人体中代谢速度快等特性。它既可作为治疗脂肪吸收不良、高血脂、肥胖等疾病的功能食品,又可作为食品添加剂和化妆品辅料,在食品工业、医药品及日用化工等领域具有广阔的应用前景。该文简述了中链甘油三酯的合成制备途径、分析检测技术以及其在食品、医药、化妆品领域的应用,以期为中链甘油三酯的开发与应用提供进一步研究参考。 展开更多
关键词 中链甘油三酯 制备工艺 检测技术 食品工业
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反式-4-羟基-L-脯氨酸的研究进展 被引量:5
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作者 朱亚娟 彭青 +4 位作者 陈艳 张振宇 柳鹏福 吴杰群 储消和 《发酵科技通讯》 CAS 2018年第2期115-121,共7页
反式-4-羟基脯氨酸是胶原蛋白中特有的一种氨基酸,在动物体内具有重要的生理功能与独特的生物活性,广泛地应用于医药、化工、美容、疾病诊断等领域.介绍了反式-4-羟基脯氨酸的代谢、功能和应用,并着重对反式-4-羟基脯氨酸的生产方法进... 反式-4-羟基脯氨酸是胶原蛋白中特有的一种氨基酸,在动物体内具有重要的生理功能与独特的生物活性,广泛地应用于医药、化工、美容、疾病诊断等领域.介绍了反式-4-羟基脯氨酸的代谢、功能和应用,并着重对反式-4-羟基脯氨酸的生产方法进行综述,在此基础上探讨了生产反式-4-羟基脯氨酸的研究方向,为利用全细胞催化法和发酵法生产反式-4-羟基脯氨酸提供参考依据,同时展望了未来工业化生产反式-4-羟基脯氨酸发展方向. 展开更多
关键词 反式-4-羟基脯氨酸 代谢 功能 生产
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基于荷移反应的高效液相色谱法测定氨基丁醇 被引量:1
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作者 邵梅琪 陈艳 +3 位作者 彭青 柳鹏福 吴杰群 储消和 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期817-821,共5页
建立了一种基于荷移反应的高效液相色谱测定氨基丁醇含量的分析方法。在p H 8.4的硼砂-硼酸缓冲溶液中,氨基丁醇与四氯苯醌于60℃反应60 min,利用高效液相色谱法-紫外检测器进行分析。荷移络合物采用Agilent Ex tend C18色谱柱(250 m m&... 建立了一种基于荷移反应的高效液相色谱测定氨基丁醇含量的分析方法。在p H 8.4的硼砂-硼酸缓冲溶液中,氨基丁醇与四氯苯醌于60℃反应60 min,利用高效液相色谱法-紫外检测器进行分析。荷移络合物采用Agilent Ex tend C18色谱柱(250 m m×4.6 m m,5μm)分离,以0.001%(体积分数)三乙胺甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1 m L/min,检测波长为350 nm。该方法对氨基丁醇的定量限为0.01 g/L,线性范围为0.1~0.6g/L,相关系数(R^2)为0.999 4;方法的加标回收率为98.3%~103.6%,相对标准偏差(RSD)为0.9%~1.6%。该法简便快捷,适用于氨基丁醇含量的快速检测。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 荷移反应 氨基丁醇 四氯苯醌
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