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猫冠状病毒非结构蛋白3的多克隆抗体制备及亚细胞定位
被引量：
1
1
作者
王子仪
金子安
+5 位作者
卢辰赫
乔治
王圣文
颜焰
周继勇
郑肖娟
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期744-754,共11页
冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronaviru...
冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)代表毒株(WSU 79-1683)Nsp3蛋白中抗原性较好的区段(第50—550位氨基酸),随后将其亚克隆到pCOLD-TF原核表达载体上。在低温条件下,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导,成功表达分子量约为130 kDa的His-Nsp3重组融合蛋白。在非变性条件下,采用镍柱亲和层析获得了纯度较高的目的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,制备Nsp3多克隆抗血清(多抗血清),蛋白质印迹法(Western blotting,WB)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示,Nsp3多抗血清能特异性识别FCoV感染细胞中的Nsp3蛋白。采用免疫荧光双标法结合激光共聚焦显微镜对FCoV感染细胞中Nsp3蛋白的亚细胞定位进行分析,结果发现,FCoV感染细胞中Nsp3发生聚集现象,并与内质网存在共定位现象。Nsp3蛋白的特异性抗体制备以及亚细胞定位研究为进一步开展Nsp3蛋白的生物学功能分析奠定了基础。
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关键词
猫冠状病毒
非结构蛋白3
原核表达
多克隆抗体
亚细胞定位
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职称材料
题名
猫冠状病毒非结构蛋白3的多克隆抗体制备及亚细胞定位
被引量：
1
1
作者
王子仪
金子安
卢辰赫
乔治
王圣文
颜焰
周继勇
郑肖娟
机构
浙江大学
动物医学
中心
浙江大学
海南研究院
浙江大学-帕特诺尔联合研发中心
出处
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期744-754,共11页
基金
浙江大学-帕特诺尔联合研发中心项目(K20211327)。
文摘
冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)代表毒株(WSU 79-1683)Nsp3蛋白中抗原性较好的区段(第50—550位氨基酸),随后将其亚克隆到pCOLD-TF原核表达载体上。在低温条件下,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导,成功表达分子量约为130 kDa的His-Nsp3重组融合蛋白。在非变性条件下,采用镍柱亲和层析获得了纯度较高的目的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,制备Nsp3多克隆抗血清(多抗血清),蛋白质印迹法(Western blotting,WB)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示,Nsp3多抗血清能特异性识别FCoV感染细胞中的Nsp3蛋白。采用免疫荧光双标法结合激光共聚焦显微镜对FCoV感染细胞中Nsp3蛋白的亚细胞定位进行分析,结果发现,FCoV感染细胞中Nsp3发生聚集现象,并与内质网存在共定位现象。Nsp3蛋白的特异性抗体制备以及亚细胞定位研究为进一步开展Nsp3蛋白的生物学功能分析奠定了基础。
关键词
猫冠状病毒
非结构蛋白3
原核表达
多克隆抗体
亚细胞定位
Keywords
feline coronavirus
non-structural protein 3
prokaryotic expression
polyclonal antibody
subcellular location
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猫冠状病毒非结构蛋白3的多克隆抗体制备及亚细胞定位
王子仪
金子安
卢辰赫
乔治
王圣文
颜焰
周继勇
郑肖娟
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
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