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香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术研究
被引量：
2
1
作者
梅玲玲
张俊彦
+5 位作者
龚璞
潘军航
占利
张云怡
杨勇
吴嘉南
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期160-164,共5页
目的利用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法,建立一种简便、快速、特异、灵敏的香港海鸥型菌检测方法。方法根据香港海鸥型菌16SrDNA的保守区域设计特异性引物和探针。用不同浓度、不同温度对反应体系引物浓度、探针浓度及退火温度...
目的利用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法,建立一种简便、快速、特异、灵敏的香港海鸥型菌检测方法。方法根据香港海鸥型菌16SrDNA的保守区域设计特异性引物和探针。用不同浓度、不同温度对反应体系引物浓度、探针浓度及退火温度进行优化。用添加已知量的香港海鸥型菌样本验证方法敏感性;用香港海鸥型菌以及大肠杆菌、沙门菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌验证方法特异性和稳定性。结果当25μL反应体系中上、下游引物(10μmol/L)各为0.6μL,探针(10μmol/L)为0.4μL,模板DNA量为5.0μL,反应条件:预变性95℃20s,变性95℃10s,退火57℃40s,40个循环时,香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应Ct值与待检菌浓度对数具有良好线性关系[Ct=-3.538×log(菌浓度)+13.56,r=0.999],方法的最低检测浓度达到36cfu/mL。23株香港海鸥型菌检测Ct值均小于35,而104株非香港海鸥型菌检测Ct值大于35或扩增曲线成一平滑直线。隔天连续5d重复试验Ct值变异系数小于3。20件活鲤鱼、18件活草鱼香港海鸥型菌检测率实时荧光PCR检测技术显著高于常规检测方法(P<0.01,χ2=21.50)。且后者所需时间为5d,前者仅需10h。结论 TaqMan实时荧光定量PCR法是一种快速简便、特异性强、灵敏度高的香港海鸥型菌检测方法,值得推广应用。
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关键词
香港海鸥型菌
TAQMAN-MGB探针
实时荧光PCR
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职称材料
题名
香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术研究
被引量：
2
1
作者
梅玲玲
张俊彦
龚璞
潘军航
占利
张云怡
杨勇
吴嘉南
机构
浙江
省疾病预防控制中心
浙江大学食品科学与工程学院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期160-164,共5页
基金
浙江省医药卫生科技计划项目(No.2013KYB055)资助~~
文摘
目的利用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法,建立一种简便、快速、特异、灵敏的香港海鸥型菌检测方法。方法根据香港海鸥型菌16SrDNA的保守区域设计特异性引物和探针。用不同浓度、不同温度对反应体系引物浓度、探针浓度及退火温度进行优化。用添加已知量的香港海鸥型菌样本验证方法敏感性;用香港海鸥型菌以及大肠杆菌、沙门菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等致病菌验证方法特异性和稳定性。结果当25μL反应体系中上、下游引物(10μmol/L)各为0.6μL,探针(10μmol/L)为0.4μL,模板DNA量为5.0μL,反应条件:预变性95℃20s,变性95℃10s,退火57℃40s,40个循环时,香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应Ct值与待检菌浓度对数具有良好线性关系[Ct=-3.538×log(菌浓度)+13.56,r=0.999],方法的最低检测浓度达到36cfu/mL。23株香港海鸥型菌检测Ct值均小于35,而104株非香港海鸥型菌检测Ct值大于35或扩增曲线成一平滑直线。隔天连续5d重复试验Ct值变异系数小于3。20件活鲤鱼、18件活草鱼香港海鸥型菌检测率实时荧光PCR检测技术显著高于常规检测方法(P<0.01,χ2=21.50)。且后者所需时间为5d,前者仅需10h。结论 TaqMan实时荧光定量PCR法是一种快速简便、特异性强、灵敏度高的香港海鸥型菌检测方法,值得推广应用。
关键词
香港海鸥型菌
TAQMAN-MGB探针
实时荧光PCR
Keywords
Laribacter hongkonggensis
TaqMan-MGB probe
fluorescent real-time PCR
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
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题名
作者
出处
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1
香港海鸥型菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR检测技术研究
梅玲玲
张俊彦
龚璞
潘军航
占利
张云怡
杨勇
吴嘉南
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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