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大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究: 1; 作者全胜夏肖萍胡伟航《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期107-110,共4页; 目的构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位（heat-labile enterotoxin subunitA，LTA）基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统，探讨重组LTKA63（rLTKA63）粘膜免疫佐剂活性的机制。方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA... 展开更多; 关键词大肠杆菌 LTKA63基因克隆/表达载体构建重组蛋白/表达粘膜免疫/佐剂活性 TH1/TH2; 在线阅读下载PDF 职称材料

COL1A1-shRNA表达载体的构建及对胃癌细胞增殖迁移的影响被引量：3: 2; 作者李爱清姒健敏 +3 位作者商燕甘丽红郭磊周天华《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期257-263,共7页; 目的:构建COL1A1特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外评价其对胃癌细胞BGC-823增殖迁移的影响。方法:根据文献获得3个COL1A1的siRNA靶序列,设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencerTM4.1-CMV neo线性质... 展开更多; 关键词胃肿瘤/病理学胶原Ⅰ型/遗传学 RNA干扰受体 CXCR4遗/传学转录遗传遗传载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

RegIα cDNA过表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖凋亡的影响被引量：1: 3; 作者周群燕陆晓凤 +1 位作者王良静姒健敏《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期499-505,共7页; 目的:构建再生蛋白Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒表达载体,在体外评价其对胃癌细胞株增殖及其凋亡的影响。方法:根据RegIαcDNA的全序列设计引物,用RT-PCR的方法从胃黏膜组织的总RNA中获取RegIα的cDNA编码区域的... 展开更多; 关键词胃肿瘤再生/遗传学细胞系肿瘤逆转录聚合酶链反应遗传载体质粒细胞凋亡细胞增殖转染; 在线阅读下载PDF 职称材料

rhEGF激活ERK1/2对人胚胎羊膜细胞株Bcl-2、P53蛋白表达的影响被引量：1: 4; 作者袁庆丰徐立红 +3 位作者陈加平周雯陈淑洁姒健敏《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2265-2267,共3页; 目的:探讨表皮生长因子(EGF)促人胚胎羊膜细胞(FL)增殖时对细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路的影响及其应用安全性。方法:不同浓度重组人EGF(rhEGF)对培养的FL细胞进行刺激,用MTT法检测细胞增殖、Western蛋白印迹法检测磷酸化ERK1/2及Bc... 展开更多; 关键词表皮生长因子细胞培养蛋白质ERK1/2 蛋白质BCL-2 蛋白质P53; 在线阅读下载PDF 职称材料

小RNA干扰对高表达RegIα基因胃癌细胞株增殖的影响被引量：1: 5; 作者陆晓凤王良静 +1 位作者周群燕姒健敏《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期57-63,共7页; 目的:探讨小RNA干扰(small interfering RNA,RNAi)对胃癌细胞株RegIα基因表达的抑制作用及对细胞增殖和凋亡的影响。方法:RT-PCR检测6株胃癌细胞的RegIα基因mRNA表达水平;体外构建RegIα基因小RNA干扰的重组质粒,分别稳定转染RegIα... 展开更多; 关键词 RNA 小分子干扰再生/遗传学基因表达胃肿瘤遗传载体质粒细胞凋亡细胞增殖转染; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究: 1; 作者全胜夏肖萍胡伟航; 机构浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠疾病实验室在读研究生浙江大学附属邵逸夫医院检验科杭州市第一人民医院急诊科; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期107-110,共4页; 文摘目的构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位（heat-labile enterotoxin subunitA，LTA）基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统，探讨重组LTKA63（rLTKA63）粘膜免疫佐剂活性的机制。方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA基因，利用定位突变技术构建LTKA63突变体，T-A克隆后测序。采用无His-tag的原核表达载体pET-15b。构建LTKA63原核表达系统，通过SDS-PAGE鉴定表达产物。采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径。结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA基因条带。与报道的LTA序列比较，所克隆的LTA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99．03％～99．61％和98．33％～99．22％。LTA基因定位突变后获得序列正确的LT-KA63突变体。rLTKA63表达量占细菌总蛋白的15％左右。rLTKA63作用后Th1和Th2细胞较阴性对照组分别增加21．9％和36．2％。结论本文成功地构建了LTKA63原核表达系统，所表达的rLTKA能同时激活Th1和Th2细胞。; 关键词大肠杆菌 LTKA63基因克隆/表达载体构建重组蛋白/表达粘膜免疫/佐剂活性 TH1/TH2; Keywords Escherichia coli LTKA63 gene cloning/expression vector construction recombinant protein / expression Mucosal immunity/ Adjuvant activity Th1/Th2; 分类号 R378.2 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名COL1A1-shRNA表达载体的构建及对胃癌细胞增殖迁移的影响被引量：3: 2; 作者李爱清姒健敏商燕甘丽红郭磊周天华; 机构浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室浙江大学医学院疾病模拟中心; 出处《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期257-263,共7页; 基金国家高技术研究发展计划(863计划)项目资助(N20060102Z4055); 文摘目的:构建COL1A1特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外评价其对胃癌细胞BGC-823增殖迁移的影响。方法:根据文献获得3个COL1A1的siRNA靶序列,设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencerTM4.1-CMV neo线性质粒载体连接,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选获得重组质粒;经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染胃癌BGC-823细胞,利用G418筛选稳定表达COL1A1-shRNA的BGC-823细胞株。通过实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测转染后细胞COL1A1在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法及Transwell法检测COL1A1干扰后胃癌细胞增殖及迁移能力的变化。结果:序列测定表明成功构建3个COL1A1-shRNA表达载体。实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测显示,COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞的COL1A1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);MTT试验及Transwell迁移试验显示,转染后细胞增殖及迁移能力明显降低(P<0.05)。结论:COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞能有效抑制细胞COL1A1的表达及癌细胞的增殖迁移。; 关键词胃肿瘤/病理学胶原Ⅰ型/遗传学 RNA干扰受体 CXCR4遗/传学转录遗传遗传载体; Keywords Stomach neoplasms/pathol Collagen type Ⅰ/genet RNA interference Receptors CXCR4/genetics Transcription genet Genetic vectors; 分类号 R735.2 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名RegIα cDNA过表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖凋亡的影响被引量：1: 3; 作者周群燕陆晓凤王良静姒健敏; 机构浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室浙江大学医学院附属第二医院消化内科; 出处《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期499-505,共7页; 基金浙江省自然科学基金(Y206280) 浙江省教育厅科研项目(Y20070071); 文摘目的:构建再生蛋白Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒表达载体,在体外评价其对胃癌细胞株增殖及其凋亡的影响。方法:根据RegIαcDNA的全序列设计引物,用RT-PCR的方法从胃黏膜组织的总RNA中获取RegIα的cDNA编码区域的全序列,经测序其与目的基因序列一致。将获取的RegIα序列经TA克隆和亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达质粒载体中;将构建的RegIα过表达质粒载体pIRES2-RegIα-EGFP转染胃癌细胞株MKN28,并用空载体pIRES2-EGFP作为对照,利用G418筛选稳定表达pIRES2-RegIα-EGFP的MKN28细胞株。通过RT-PCR及Western blot检测转染后细胞RegIα在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法和流式细胞仪分别检测RegIα过表达后MKN28细胞增殖及拮抗H2O2诱导凋亡的变化。结果:成功构建RegIαcDNA的全序列表达质粒。RT-PCR及Western blot检测显示:转染pIRES2-EGFP质粒的MKN28细胞RegIαmRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);MTT试验显示:转染后细胞增殖能力明显升高(P<0.05),而且拮抗H2O2凋亡的能力增强(P<0.05)。结论:RegIα的过表达能明显增强胃癌细胞MKN28的增殖和拮抗H2O2诱导凋亡的能力。; 关键词胃肿瘤再生/遗传学细胞系肿瘤逆转录聚合酶链反应遗传载体质粒细胞凋亡细胞增殖转染; Keywords Stomach neoplasms Regeneration/gene Cell line tumor Reverse transcriptase polymerase chain reaction Genetic vectors Plasmids Apoptosis Cell proliferation Transfection; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名rhEGF激活ERK1/2对人胚胎羊膜细胞株Bcl-2、P53蛋白表达的影响被引量：1: 4; 作者袁庆丰徐立红陈加平周雯陈淑洁姒健敏; 机构浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠实验室浙江大学医学院生物化学及分子生物学教研室; 出处《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2265-2267,共3页; 文摘目的:探讨表皮生长因子(EGF)促人胚胎羊膜细胞(FL)增殖时对细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路的影响及其应用安全性。方法:不同浓度重组人EGF(rhEGF)对培养的FL细胞进行刺激,用MTT法检测细胞增殖、Western蛋白印迹法检测磷酸化ERK1/2及Bcl-2、P53蛋白水平。结果:剂量-效应关系示rhEGF浓度10μg/L时促细胞增殖率最高(42.4%,P<0.01)。rhEGF浓度在10-60μg/L时p-ERK1/2水平明显升高,各浓度组Bcl-2水平无变化,而60μg/L浓度组P53水平明显下降。结论:rhEGF最佳浓度10μg/L是安全的用量,但超大剂量rhEGF的应用可能会降低促细胞凋亡能力。; 关键词表皮生长因子细胞培养蛋白质ERK1/2 蛋白质BCL-2 蛋白质P53; Keywords Epidermal growth factor Cell culture Protein ERKI/2 Protein Bcl-2 Protein p53; 分类号 R363 [医药卫生—病理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小RNA干扰对高表达RegIα基因胃癌细胞株增殖的影响被引量：1: 5; 作者陆晓凤王良静周群燕姒健敏; 机构浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室浙江省生物治疗重点实验室浙江大学医学院附属第二医院消化科; 出处《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期57-63,共7页; 基金浙江省自然科学基金(Y206280) 浙江省教育厅科研项目(Y20070071); 文摘目的:探讨小RNA干扰(small interfering RNA,RNAi)对胃癌细胞株RegIα基因表达的抑制作用及对细胞增殖和凋亡的影响。方法:RT-PCR检测6株胃癌细胞的RegIα基因mRNA表达水平;体外构建RegIα基因小RNA干扰的重组质粒,分别稳定转染RegIα高表达细胞株MKN45和AGS,并设空载体作为对照组;应用RT-PCR和Western blot测定转染后细胞RegIα基因及其蛋白的表达水平;应用MTT法和流式细胞仪检测RegIα小RNA干扰对细胞增殖抑制率和凋亡的影响。结果:RT-PCR显示:与空载体组相比,转染RegIα小RNA干扰质粒后,MKN45和AGS细胞的RegIαmRNA明显被抑制;Western blot结果显示:MKN45和AGS细胞的RegIα蛋白表达水平分别降低至空载体组的(44±4)%和(25±4)%;MTT结果显示:RegIα小RNA干扰后MKN45和AGS细胞增殖均受到抑制,凋亡率分别为(12.96±0.50)%和(11.59±1.10)%,与空载体组比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小RNA干扰可有效抑制胃癌细胞株中RegIα基因的表达,具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的重要作用。; 关键词 RNA 小分子干扰再生/遗传学基因表达胃肿瘤遗传载体质粒细胞凋亡细胞增殖转染; Keywords RNA small interfering Regeneration/genet Gene expression Stomach neoplasms Genetic vectors Plasmids Apoptosis Cell proliferation Transfection; 分类号 R735.2 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究	全胜夏肖萍胡伟航	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	COL1A1-shRNA表达载体的构建及对胃癌细胞增殖迁移的影响	李爱清姒健敏商燕甘丽红郭磊周天华	《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2010	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	RegIα cDNA过表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖凋亡的影响	周群燕陆晓凤王良静姒健敏	《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	rhEGF激活ERK1/2对人胚胎羊膜细胞株Bcl-2、P53蛋白表达的影响	袁庆丰徐立红陈加平周雯陈淑洁姒健敏	《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心	2007	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	小RNA干扰对高表达RegIα基因胃癌细胞株增殖的影响	陆晓凤王良静周群燕姒健敏	《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2011	1	在线阅读下载PDF 职称材料