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药物分析几种新技术的应用进展
被引量：
5
1
作者
郭常川
曾苏
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期1-6,共6页
评述药物分析的几种新技术,包括时间分辨荧光分析法、流动注射分析和液相色谱?质谱联用技术。其中时间分辨荧光分析法作为一种新的非同位素标记分析技术,具有灵敏度高、选择性好、无放射性污染等优点,能有效消除杂质与背景荧光以提高信...
评述药物分析的几种新技术,包括时间分辨荧光分析法、流动注射分析和液相色谱?质谱联用技术。其中时间分辨荧光分析法作为一种新的非同位素标记分析技术,具有灵敏度高、选择性好、无放射性污染等优点,能有效消除杂质与背景荧光以提高信噪比,目前广泛用于药物含量测定、酶活性测定、DNA检测和时间分辨荧光免疫分析;流动注射分析是一种新型的微量、高速和自动化的分析技术,具有分析速度快、样品和试剂消耗量少、设备与操作简单、分析效率高等特点,可与各种检测器联用,检测手段灵活多样,适用性广泛,目前在药物分析领域主要用于药物含量测定和生物内源性物质的分析;液相色谱-质谱联用技术集液相色谱的高分离效能与质谱的高选择性、高灵敏检测能力于一体,是组分复杂样品和微量/痕量样品分离分析的最有力的研究手段,是药物分析相关领域中不可或缺的重要工具,目前广泛用于药物及天然产物化学成分分析、药物代谢研究、残留物分析等。
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关键词
药用制剂/分析
时间分辨荧光
流动注射
液相色谱-质谱联用
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职称材料
人细胞色素P450 3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18重组酶的异源表达与活性
被引量：
9
2
作者
王晓雯
曾苏
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期456-463,共8页
目的重组表达人细胞色素P450(CYP)3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,为CYP3A4代谢活性的体外研究提供单一酶源。方法应用杆状病毒表达系统构建含有上述各CYP3A4突变体基因序列的重组病毒,将其连同含人源还原型烟酰...
目的重组表达人细胞色素P450(CYP)3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,为CYP3A4代谢活性的体外研究提供单一酶源。方法应用杆状病毒表达系统构建含有上述各CYP3A4突变体基因序列的重组病毒,将其连同含人源还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-P450氧化还原酶(POR)和细胞色素b5基因的重组病毒共同感染昆虫草地夜蛾细胞Sf9得到CYP3A4突变体与POR和细胞色素b5共表达的重组蛋白,分别以高效液相色谱法和荧光分析法测定各重组酶对睾酮和7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素的代谢活性。结果在mRNA分子水平上验证了CYP3A4突变体CYP3A4*3,CYP3A4*4,CYP3A4*5和CYP3A4*18基因在Sf9细胞中的转录。感染了各重组病毒的Sf9细胞裂解液对睾酮和7-苄氧基-4-三氟甲基香豆素有明显代谢。结论应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统在体外成功表达了具有催化活性的人CYP3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,其中CYP3A4.5活性显著低于野生型蛋白,CYP3A4.18活性显著高于野生型蛋白,而CYP3A4.3和CYP3A4.4与野生型蛋白活性近似。
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关键词
细胞色素P450CYP3A4
突变
杆状病毒科
睾酮
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职称材料
利用细菌／杆状病毒系统在昆虫细胞中表达人CYP2E1
被引量：
4
3
作者
路珂
曾苏
姚彤炜
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2008年第2期118-125,共8页
目的:获得人CYP2E1重组酶,并用该重组酶的特征性探针底物对其进行代谢活性研究。方法:以人肝组织RNA为模板,通过RT-PCR得到CYP2E1 cDNA片断,然后与pFastBac质粒连接,得到pFastBac-CYP2E1重组质粒,将其转化E.coli DH 10Bac大肠杆菌,通过...
目的:获得人CYP2E1重组酶,并用该重组酶的特征性探针底物对其进行代谢活性研究。方法:以人肝组织RNA为模板,通过RT-PCR得到CYP2E1 cDNA片断,然后与pFastBac质粒连接,得到pFastBac-CYP2E1重组质粒,将其转化E.coli DH 10Bac大肠杆菌,通过转座作用,获得重组Bacmid-CYP2E1,将其转染草地夜蛾细胞(Sf9)后,产生重组杆状病毒。将该病毒以及分别含有人CYPOR和人CYPb5的病毒共同感染Sf9细胞,收集共表达蛋白,以氯唑沙宗为底物鉴定重组酶的活性。结果:利用细菌/杆状病毒系统得到重组人CYP2E1的表达,其对氯唑沙宗的Km值为(72.4±8.7)μmol.L-1,Vmax值为(2.41±0.10)μmol.min-1.g-1蛋白。结论:利用杆状病毒系统成功表达了有催化活性的人CYP2E1重组酶,其活性与文献报道值相似。
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关键词
杆状病毒科
细胞色素P450酶系统
蛾/细胞学
大肠杆菌/遗传学
重组
遗传
细胞色素P450
杆状病毒
草地夜蛾细胞
氯唑沙宗
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职称材料
题名
药物分析几种新技术的应用进展
被引量：
5
1
作者
郭常川
曾苏
机构
浙江大学药学院药物分析与药物代谢实验室
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期1-6,共6页
基金
国家"十一五"重大科研专项
临床前药物代谢动力学技术平台(2009ZX09304-003)
文摘
评述药物分析的几种新技术,包括时间分辨荧光分析法、流动注射分析和液相色谱?质谱联用技术。其中时间分辨荧光分析法作为一种新的非同位素标记分析技术,具有灵敏度高、选择性好、无放射性污染等优点,能有效消除杂质与背景荧光以提高信噪比,目前广泛用于药物含量测定、酶活性测定、DNA检测和时间分辨荧光免疫分析;流动注射分析是一种新型的微量、高速和自动化的分析技术,具有分析速度快、样品和试剂消耗量少、设备与操作简单、分析效率高等特点,可与各种检测器联用,检测手段灵活多样,适用性广泛,目前在药物分析领域主要用于药物含量测定和生物内源性物质的分析;液相色谱-质谱联用技术集液相色谱的高分离效能与质谱的高选择性、高灵敏检测能力于一体,是组分复杂样品和微量/痕量样品分离分析的最有力的研究手段,是药物分析相关领域中不可或缺的重要工具,目前广泛用于药物及天然产物化学成分分析、药物代谢研究、残留物分析等。
关键词
药用制剂/分析
时间分辨荧光
流动注射
液相色谱-质谱联用
分类号
R917 [医药卫生—药物分析学]
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职称材料
题名
人细胞色素P450 3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18重组酶的异源表达与活性
被引量：
9
2
作者
王晓雯
曾苏
机构
浙江大学药学院药物分析与药物代谢实验室
出处
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期456-463,共8页
基金
国家"重大新药创制"科技重大专项资助项目(2009ZX09304-003)~~
文摘
目的重组表达人细胞色素P450(CYP)3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,为CYP3A4代谢活性的体外研究提供单一酶源。方法应用杆状病毒表达系统构建含有上述各CYP3A4突变体基因序列的重组病毒,将其连同含人源还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-P450氧化还原酶(POR)和细胞色素b5基因的重组病毒共同感染昆虫草地夜蛾细胞Sf9得到CYP3A4突变体与POR和细胞色素b5共表达的重组蛋白,分别以高效液相色谱法和荧光分析法测定各重组酶对睾酮和7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素的代谢活性。结果在mRNA分子水平上验证了CYP3A4突变体CYP3A4*3,CYP3A4*4,CYP3A4*5和CYP3A4*18基因在Sf9细胞中的转录。感染了各重组病毒的Sf9细胞裂解液对睾酮和7-苄氧基-4-三氟甲基香豆素有明显代谢。结论应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统在体外成功表达了具有催化活性的人CYP3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,其中CYP3A4.5活性显著低于野生型蛋白,CYP3A4.18活性显著高于野生型蛋白,而CYP3A4.3和CYP3A4.4与野生型蛋白活性近似。
关键词
细胞色素P450CYP3A4
突变
杆状病毒科
睾酮
Keywords
cytochrome P-450 CYP3A4
mutation
Baculoviridae
testosterone
分类号
R965.1 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
利用细菌／杆状病毒系统在昆虫细胞中表达人CYP2E1
被引量：
4
3
作者
路珂
曾苏
姚彤炜
机构
浙江大学药学院药物分析与药物代谢实验室
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2008年第2期118-125,共8页
基金
浙江省中医药管理局重点项目(2006Z016)
国家杰出青年基金项目(30225047)
浙江省科技厅重大科技攻关项目(2005C13026)
文摘
目的:获得人CYP2E1重组酶,并用该重组酶的特征性探针底物对其进行代谢活性研究。方法:以人肝组织RNA为模板,通过RT-PCR得到CYP2E1 cDNA片断,然后与pFastBac质粒连接,得到pFastBac-CYP2E1重组质粒,将其转化E.coli DH 10Bac大肠杆菌,通过转座作用,获得重组Bacmid-CYP2E1,将其转染草地夜蛾细胞(Sf9)后,产生重组杆状病毒。将该病毒以及分别含有人CYPOR和人CYPb5的病毒共同感染Sf9细胞,收集共表达蛋白,以氯唑沙宗为底物鉴定重组酶的活性。结果:利用细菌/杆状病毒系统得到重组人CYP2E1的表达,其对氯唑沙宗的Km值为(72.4±8.7)μmol.L-1,Vmax值为(2.41±0.10)μmol.min-1.g-1蛋白。结论:利用杆状病毒系统成功表达了有催化活性的人CYP2E1重组酶,其活性与文献报道值相似。
关键词
杆状病毒科
细胞色素P450酶系统
蛾/细胞学
大肠杆菌/遗传学
重组
遗传
细胞色素P450
杆状病毒
草地夜蛾细胞
氯唑沙宗
Keywords
Baculoviridae
Cytochrome P-450 Enzyme System
Moths/cytol
Escherichia coli/genet
Recombination, genetic
Cytochrome P450
Baculovirus
Spodopterafrugiperda （Sfg） insect cells
Chlorzoxazone
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
药物分析几种新技术的应用进展
郭常川
曾苏
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2011
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人细胞色素P450 3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18重组酶的异源表达与活性
王晓雯
曾苏
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
利用细菌／杆状病毒系统在昆虫细胞中表达人CYP2E1
路珂
曾苏
姚彤炜
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2008
4
在线阅读
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职称材料
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