利用家蚕生物反应器生产有用蛋白的研究 被引量：7

1

作者 杨瑞丽 金勇丰 +2 位作者 吴玉澄 张耀洲 吴祥甫 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期173-178,共6页

就家蚕 / Bm NPV表达系统的原理及生产流程、外源基因在该系统中的表达及表达产物的药物开发作了较为详细的阐述 ,介绍了利用家蚕大量生产有用蛋白的技术开发状况 。

关键词 家蚕 BmNPV表达系统 生物反应器 蛋白质 技术开发

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SOD活性和同工酶检测系统中干扰因素的研究 被引量：10

2

作者 胡家恕 邵爱萍 任爱霞 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期179-182,共4页

采用 NBT光化还原反应检测 SOD活性时 ,反应系统中蛋白质含量在 10 0 μg以上将对 SOD活性测定造成严重干扰 ,并且干扰程度随蛋白质含量的增加而加剧 ;连苯三酚自氧化系统受维生素 C的干扰 ,当反应系统中维生素 C的含量在 2 0 μg以上 ... 采用 NBT光化还原反应检测 SOD活性时 ,反应系统中蛋白质含量在 10 0 μg以上将对 SOD活性测定造成严重干扰 ,并且干扰程度随蛋白质含量的增加而加剧 ;连苯三酚自氧化系统受维生素 C的干扰 ,当反应系统中维生素 C的含量在 2 0 μg以上 ,则明显抑制连苯三酚的自氧化 . 展开更多

关键词 超氧物歧化酶 氮兰四唑 连苯三酚 SOD活性 同工酶检测系统 干扰因素

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鸡肠道菌基因组DNA的RAPD分类的研究 被引量：7

3

作者 吴天星 金勇丰 +1 位作者 曹广力 张耀洲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期247-249,共3页

本文以 7种鸡肠道菌为研究对象 ,分别提取基因组DNA ,利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组进行DNA分析 ,筛选出一系列随机引物 ,能在 7种肠道细菌中有较好的多态性 ,可用作分子标记鉴别这

关键词 鸡 肠道菌 基因组DNA RAPD分类的研究

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榨菜胞质雄性不育系和保持系叶绿体多肽电泳比较研究 被引量：2

4

作者 陈学军 陈竹君 +1 位作者 杜广唏 张耀洲 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期88-88,共1页

关键词 榨菜 胞质雄性不育系 保持系 叶绿体多肽 电泳

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东方蜜蜂与西方蜜蜂酯酶同工酶的比较研究 被引量：2

5

作者 童富淡 胡家恕 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期113-113,共1页

关键词 东方蜜蜂 西方蜜蜂 脂酶同工酶 IEF-PAGE 电泳

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吉林大豆在杭州种植适应性的比较研究

6

作者 史锋 汪自强 +1 位作者 俞法明 张耀洲 《浙江农业学报》 CSCD 1999年第4期183-186,共4页

应用植物生长分析、生物化学分析和 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ 技术，对１９９０ 年从吉林省引进，已在杭州分别种植１ 季、６ 季和８ 季的４ 个大豆品种吉林２０ 号、吉林２１ 号、吉林２３ 号、吉林２５ 号进行农艺性状、经济性状和基因组 Ｄ Ｎ Ａ... 应用植物生长分析、生物化学分析和 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ 技术，对１９９０ 年从吉林省引进，已在杭州分别种植１ 季、６ 季和８ 季的４ 个大豆品种吉林２０ 号、吉林２１ 号、吉林２３ 号、吉林２５ 号进行农艺性状、经济性状和基因组 Ｄ Ｎ Ａ 的比较研究。结果表明：各品种在杭州种植６ 季以后，株高增加，百粒重增加，总粒数减少，每荚粒数不变，分枝数减少，蛋白质含量升高，基因组 Ｄ Ｎ Ａ 未见显著变化。吉林２３ 号在杭州的适应性较好。 展开更多

关键词 大豆 适应性 引种 RAPD

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杆状病毒细胞凋亡抑制基因的研究进展 被引量：2

7

作者 于威 吴玉澄 +1 位作者 金勇丰 张耀洲 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期244-248,共5页

细胞凋亡是多细胞生物为维持自身的正常机能而产生的细胞自杀性行为 ,杆状病毒为维持自身的生长繁殖而产生了对抗细胞凋亡的基因 p35和 iap,二者分别作用于细胞凋亡途径的不同部位 ,以抑制细胞的凋亡 .近年来人们对这两种基因的蛋白结... 细胞凋亡是多细胞生物为维持自身的正常机能而产生的细胞自杀性行为 ,杆状病毒为维持自身的生长繁殖而产生了对抗细胞凋亡的基因 p35和 iap,二者分别作用于细胞凋亡途径的不同部位 ,以抑制细胞的凋亡 .近年来人们对这两种基因的蛋白结构及作用机制等方面进行了大量的研究 ,对它们的作用机制有了进一步的了解 。 展开更多

关键词 P35 IAP 细胞凋亡 杆状病毒细胞凋亡抑制基因 蛋白结构

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不同制油方法对油茶籽油品质的影响 被引量：75

8

作者 方学智 姚小华 +1 位作者 王开良 王亚萍 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期23-26,共4页

研究了水酶法、压榨法和浸出法3种制油方法对油茶籽油酸值、过氧化值以及VE、β-胡萝卜素、多酚、磷脂含量的影响。结果表明,在3种制油方法中,水酶法制取的油脂(水酶油)酸值显著高于其他两种制油方法(P<0.05)。3种制油方法所得油脂... 研究了水酶法、压榨法和浸出法3种制油方法对油茶籽油酸值、过氧化值以及VE、β-胡萝卜素、多酚、磷脂含量的影响。结果表明,在3种制油方法中,水酶法制取的油脂(水酶油)酸值显著高于其他两种制油方法(P<0.05)。3种制油方法所得油脂过氧化值均存在显著性差异(P<0.05),其中以压榨法制取的油脂(压榨油)为最高,水酶油最低。VE、β-胡萝卜素含量以水酶油中含量最高,且显著高于压榨油和浸出油(P<0.05)。多酚及磷脂含量以压榨油最高,水酶油最低,仅为4.12μg/g和2.87μg/g,显著低于压榨油和浸出油(P<0.05)。 展开更多

关键词 油茶籽油 水酶法 压榨法 浸出法 品质

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榨菜线粒体DNA的提取 被引量：13

9

作者 陈学军 陈竹君 +1 位作者 张耀洲 金勇丰 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期321-324,共4页

利用蔗糖衬垫法从榨菜胞质雄性不育系及保持系中分离出了线粒体 DNA,琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度分析表明 ,所提取的 DNA可用于后续的研究工作 ,即作为 PCR模板 ,进行榨菜胞质雄性不育相关特异片段扩增及

关键词 榨菜 线粒体DNA 提取 胞质雄性不育

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苦瓜不同器官的蛋白质组分分析 被引量：3

10

作者 胡家恕 汪俏梅 袁高峰 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期529-532,共4页

苦瓜不同器官的蛋白提取物经 SDS- PAGE和 IEF分析 ,结果表明 :在 14 .4～ 116 k D的分子量范围内 ,同一器官中可溶性蛋白的种类较醇溶蛋白更为丰富 ;不同器官中的醇溶蛋白表达存在一定差异 ,但至少有 5种醇溶蛋白为各器官所共有 ;苦瓜... 苦瓜不同器官的蛋白提取物经 SDS- PAGE和 IEF分析 ,结果表明 :在 14 .4～ 116 k D的分子量范围内 ,同一器官中可溶性蛋白的种类较醇溶蛋白更为丰富 ;不同器官中的醇溶蛋白表达存在一定差异 ,但至少有 5种醇溶蛋白为各器官所共有 ;苦瓜各器官中的蛋白质等电点多数小于 7,且主要集中在p H3.75～ 6 .5 5之间 ,但种子。 展开更多

关键词 器官 蛋白质组分分析 苦瓜 醇溶蛋白 可溶性蛋白 SDS-PAGE IEF 药用价值

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超干红花种子耐藏性及抗老化作用 被引量：9

11

作者 胡家恕 曾广文 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期653-656,共4页

红花种子经超干处理能显著提高耐藏性及抗老化能力 .红花未超干种子 ( MC=9.0 1% )经室温贮藏 3年 ,其发芽率 ,活力指数 ,脱氢酶活性 ,过氧化氢酶 ( CAT)活力和超氧物岐化酶 ( SOD)活力均有明显下降 ,而同期室温下贮藏的超干种子 ( MC=2... 红花种子经超干处理能显著提高耐藏性及抗老化能力 .红花未超干种子 ( MC=9.0 1% )经室温贮藏 3年 ,其发芽率 ,活力指数 ,脱氢酶活性 ,过氧化氢酶 ( CAT)活力和超氧物岐化酶 ( SOD)活力均有明显下降 ,而同期室温下贮藏的超干种子 ( MC=2 .18% )其发芽力和活力指数仍保持在原来水平 ;脱氢酶、CAT、SOD活力保持与低温贮藏种子的同等水平 .未超干种子在老化过程中其营养贮藏物较多被消耗 。 展开更多

关键词 超干红花种子 耐藏性 抗老化

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杭州地区番茄苗期猝倒病的8种腐霉的DNA多态性 被引量：2

12

作者 楼兵干 张炳欣 张耀洲 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期607-610,共4页

从 2 8种随机引物中筛选出 2 5种对腐霉属的 10株计 8种腐霉进行 RAPD分析 ,发现腐霉属的DNA多态性是非常丰富的和普遍存在的 ,初步计算了 10株计 8种腐霉的 Nei氏遗传距离 ,利用类平均法得到 UPGMA系统树 ,并对它们的亲缘关系从 DNA分... 从 2 8种随机引物中筛选出 2 5种对腐霉属的 10株计 8种腐霉进行 RAPD分析 ,发现腐霉属的DNA多态性是非常丰富的和普遍存在的 ,初步计算了 10株计 8种腐霉的 Nei氏遗传距离 ,利用类平均法得到 UPGMA系统树 ,并对它们的亲缘关系从 DNA分子水平上进行了初步分析 .结果表明 :在这 8种腐霉中 ,P. kunmingense与 P. irregulare亲缘关系最近 ;P. aphanidermatum与 P. tardicrescens的亲缘关系最近 ;P.ultimum与 P.debaryanum的亲缘关系最近 ;P.debaryanum与 P.dissotocum的亲缘关系最近 .UPGMA的系统树表明这 8种腐霉明显分成三大类 ,P.kunmingense,P.irregulare与 P.spinosum聚成一类 ;P. aphanidermatum与 P. tardicrescens聚成一类 ;P. ultimum,P.debaryanum与P.dissotocum聚成一类 . 展开更多

关键词 番茄 猝倒病 腐霉 DNA多态性

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传染性法氏囊病病毒VP2基因在家蚕中的表达 被引量：1

13

作者 卢觅佳 王莹飞 +2 位作者 李建荣 金勇丰 于涟 《动物医学进展》 CSCD 2002年第6期61-65,共5页

传染性法氏囊病病毒 (IBDV)能引起以淋巴细胞衰竭为特征的免疫抑制性疾病。IBDV的主要结构蛋白 VP2蛋白是主要的宿主保护性抗原 ,在 VP2上的点突变是造成 IBDV抗原漂变的主要原因。为研究 VP2作为 IBDV亚单位疫苗的潜力 ,本实验将 IBDV ... 传染性法氏囊病病毒 (IBDV)能引起以淋巴细胞衰竭为特征的免疫抑制性疾病。IBDV的主要结构蛋白 VP2蛋白是主要的宿主保护性抗原 ,在 VP2上的点突变是造成 IBDV抗原漂变的主要原因。为研究 VP2作为 IBDV亚单位疫苗的潜力 ,本实验将 IBDV JD1株的 VP2基因重组于家蚕杆状病毒转移载体 p Bac PAK8中 ,将重组载体 p Bac PAK-VP2与病毒 Bm-Bac PAK6的线性化 DNA共转染家蚕培养细胞 ,获得重组病毒 Bac PAK-VP2。DIG点杂交表明重组病毒基因组中含有 VP2基因。重组病毒感染家蚕 5龄幼虫后 ,用 EL ISA、SDS-PAGE和 Western blotting检测蚕血淋巴中重组 VP2蛋白的相对表达量及免疫反应性。结果表明重组 VP2蛋白具有免疫反应性 ,感染后 5～ 6 展开更多

关键词 杆状病毒载体 传染性法氏囊病病毒 VP2基因 家蚕 表达

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融合6个组氨酸的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在家蚕幼虫中的表达 被引量：1

14

作者 朱立成 陈健 +2 位作者 林蓉 金勇丰 张耀洲 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期613-616,共4页

将融合6个组氨酸(6×his)序列的hGM-CSF基因插入杆状病毒转移载体pBacPAK8中得到杆状病毒重组转移载体pBacPAKHis-GM-CSF,pBacPAKHis-GM-CSF DNA与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染BmN细胞,获得了表达rhGM-CSF融合蛋白的重组病毒vBac... 将融合6个组氨酸(6×his)序列的hGM-CSF基因插入杆状病毒转移载体pBacPAK8中得到杆状病毒重组转移载体pBacPAKHis-GM-CSF,pBacPAKHis-GM-CSF DNA与线性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染BmN细胞,获得了表达rhGM-CSF融合蛋白的重组病毒vBacPAKHis-GM-CSF.用重组病毒感染家蚕五龄起蚕,分别在24、48、72、961、20 h和144 h剪腹足取蚕血淋巴,ELISA法测得rhGM-CSF融合蛋白在120 h的蚕血淋巴中表达量最高,约为15μg/mL蚕血淋巴.融合蛋白通过Poly-His Protein Purification Kit纯化.SDS-PAGE和Western blotting分析表明,表达产物是3种糖基化程度不同的,分子量分别约为18、203、1 kD的蛋白质. 展开更多

关键词 hGM—CSF 家蚕杆状病毒表达系统 融合表达

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桃ACC氧化酶cDNA片段扩增及其克隆和鉴定(英文) 被引量：1

15

作者 金勇丰 张耀洲 张上隆 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期495-499,共5页

采用“富集ＰＣＲ”方法，用单个特异引物和ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５从桃伤处理叶片ｃＤＮＡ 中扩增出特异性片段⒚将扩增产物分离并克隆筛选到１３ 个重组克隆，其中有６ 个克隆能与ＡＣＣ氧化酶基因组ＤＮＡ 杂交，对其中一个阳性克隆... 采用“富集ＰＣＲ”方法，用单个特异引物和ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５从桃伤处理叶片ｃＤＮＡ 中扩增出特异性片段⒚将扩增产物分离并克隆筛选到１３ 个重组克隆，其中有６ 个克隆能与ＡＣＣ氧化酶基因组ＤＮＡ 杂交，对其中一个阳性克隆ｐＧＥＭＡＣ１２ 作酶切分析，发现其酶切图谱与已报道的桃果实成熟相关的ＡＣＣ氧化酶ｃＤＮＡ 基本一致⒚ＤＮＡ 序列分析表明，插入片段两端ＤＮＡ 序列均是 ５＇端特异引物序列，表明是由５＇端特异引物单个引物扩增出来，全序列分析表明插入片段全长８３３ ｂｐ，是ＡＣＣ 氧化酶ｃＤＮＡ 基因编码区的一部分，５＇端缺少启始密码子ＡＴＧ。 展开更多

关键词 桃 单个特异引物 ACC氧化酶基因 克隆

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芜菁花叶病毒杭州株HC基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1

16

作者 史锋 于晓虹 张耀洲 《浙江农业学报》 CSCD 1999年第2期59-62,共4页

通过反转录ＰＣＲ，经克隆得到１３４７ｂｐ的ＴｕＭＶＨ１的ＨＣ片段，并在大肠杆菌表达载体ｐＧＥＭＥＸ１中得到表达，产物为可融性蛋白，分子量约为８０ｋＤ。

关键词 芜菁花叶病毒 HC基因 大肠杆菌 表达

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家蚕核型多角体病毒p35基因的核苷酸序列分析

17

作者 贡成良 魏育红 +1 位作者 曹广力 薛仁宇 《常熟高专学报》 2000年第4期68-71,共4页

对家蚕核型多角体病毒苏州株 (BmNPVsu)p35基因的序列分析表明 :BmNPVsup35编码序列为 897nt,编码 2 98aa。同源性分析表明 :BmNPVsup35与BmNPVT3、AcNPV、SlNPV在核苷酸水平上同源性分别为 99.5%、95 .1 %、89.3% ,在氨基酸水平上的同... 对家蚕核型多角体病毒苏州株 (BmNPVsu)p35基因的序列分析表明 :BmNPVsup35编码序列为 897nt,编码 2 98aa。同源性分析表明 :BmNPVsup35与BmNPVT3、AcNPV、SlNPV在核苷酸水平上同源性分别为 99.5%、95 .1 %、89.3% ,在氨基酸水平上的同源性分别为 98.7%、89.4 %、76.4% ,显示了杆状病毒p35基因在进化上的保守性。BmNPVT3中位的N1 4 6、S2 0 2 、E2 0 4、K2 44,在Bm NPVsu中分别被G、N、Q、N取代 ,BmNPVT3中S2 2 2 ,在BmNPVsuP35中发生了缺失。 展开更多

关键词 家蚕 核型多角体病毒 P35基因 核苷酸序列

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产2-酮基-D-葡萄糖酸菌Serratia sp. BK-98的分离及其培养条件优化

18

作者 张炜 谢志鹏 张建国 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期264-267,372,共5页

从土壤中分离得到一株2-酮基-D-葡萄糖酸(2-KDG)产生菌,综合16S rDNA序列和系统进化分析确定该菌属于沙雷氏菌属(Serratia),命名为Serratia sp. BK-98。采用Plackett-Burman(PB)实验设计,从影响2-酮基-D-葡萄糖酸生物合成条件的14个因... 从土壤中分离得到一株2-酮基-D-葡萄糖酸(2-KDG)产生菌,综合16S rDNA序列和系统进化分析确定该菌属于沙雷氏菌属(Serratia),命名为Serratia sp. BK-98。采用Plackett-Burman(PB)实验设计,从影响2-酮基-D-葡萄糖酸生物合成条件的14个因素中筛选出具有显著效应的3个因子:装液量、发酵时间和初始pH。在此基础上通过中心组合设计实验(central composite design,CCD)和响应面分析(response surface methodology,RSM)确定了装液量、发酵时间和初始pH的最适值分别为6.6mL、57.9h和5.0。在优化条件下,2-KDG的100mL摇瓶发酵产量达到了187.8g/L,100L发酵罐产量达到了192.2g/L,分别较优化前提高了142.6%和148.3%,这两个实验结果均与模型的预测值191.4g/L非常接近。 展开更多

关键词 培养条件 2-酮基-D-葡萄糖酸 优化 响应面法 SERRATIA sp.BK-98

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