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表达载体pRSET C重组rhTNF-β的表达及其纯化
被引量：
2
1
作者
邱莲女
马志章
+3 位作者
周晴
李芳芳
陈常庆
丁仁瑞
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
1999年第3期167-169,共3页
将hTNFβN端缺失23个氨基酸的基因,克隆在表达载体pRSETC的6个组氨酸序列和肠激酶酶切位点序列的下游。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,rhTNFβ获得了高表达,表达量占细菌总蛋白的26%。其表达产物大部分以可溶性形式存在...
将hTNFβN端缺失23个氨基酸的基因,克隆在表达载体pRSETC的6个组氨酸序列和肠激酶酶切位点序列的下游。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,rhTNFβ获得了高表达,表达量占细菌总蛋白的26%。其表达产物大部分以可溶性形式存在。菌体裂解上清经0.45μm滤膜过滤后,用固定化金属配体亲和柱层析,纯度可达95%左右;经肠激酶酶切后,具有TNFβ的细胞毒活性,此活性为9.8×109U/g。
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关键词
表达载体
pRSET
C
rhTNF-β
表达
纯化
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职称材料
人γ干扰素突变体(hIFNγ135-X14)在大肠杆菌中高效表达
被引量：
1
2
作者
周晴
张惟杰
+2 位作者
马志章
应红宇
丁仁瑞
《浙江大学学报（自然科学版）》
CSCD
1999年第3期271-276,共6页
利用体外重组技术，将人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３－ｈＴＮＦβ１４８，ｈγＴＮＦβ）的基因５′端ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３编码序列取出，添上终止密码子，克隆到ｐＢＶ２２０表达载体ＰＲＰＬ串...
利用体外重组技术，将人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３－ｈＴＮＦβ１４８，ｈγＴＮＦβ）的基因５′端ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３编码序列取出，添上终止密码子，克隆到ｐＢＶ２２０表达载体ＰＲＰＬ串联起动子的下游，构建成人γ干扰素突变体（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１４）表达质粒．在质粒构建过程中，原载体上紧接ＳＤ序列后的ＥｃｏＲ１位点被新引入的Ｘｂａ１位点所取代，重组后的质粒，ＳＤ序列与ＡＴＧ起始密码子之间的核苷酸数达到１０个．经转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，温敏诱导表达，细菌稳定高效地表达了人γ干扰素突变体（１８ｋＤ），表达量约占菌体总蛋白的４２％，表达产物主要以包涵体形式存在．经初步纯化复性后，表达产物的干扰素（ＩＦＮ）抗病毒比活性达到１．１８×１０６Ｕ／ｍｇ蛋白．
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关键词
融合蛋白
γ干扰素突变体
β肿瘤坏死因子
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职称材料
人His6-TNF-β融合表达质粒的构建及其产物一步纯化法研究
3
作者
徐建芬
周晴
+4 位作者
马志章
华明
丁仁瑞
余建法
沈丙辉
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
1999年第4期314-314,共1页
人β-肿瘤坏死因子（tumor mecrosis factor beta,TNF-β）又称淋巴毒素（lymphotoxin,LT）、是最早发现的细胞因子之一.研究表明,它不仅对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用,而且参与免疫和炎症反应的调节,并能诱导多种分化细胞抗原的表达....
人β-肿瘤坏死因子（tumor mecrosis factor beta,TNF-β）又称淋巴毒素（lymphotoxin,LT）、是最早发现的细胞因子之一.研究表明,它不仅对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用,而且参与免疫和炎症反应的调节,并能诱导多种分化细胞抗原的表达.成熟的人TNF-β由171个aa组成,其N端为非功能区,研究发现若N端缺失25个aa,仍可保持其细胞毒活性;若缺失24个aa,则该缺失体的细胞毒作用可提高2～6倍,而对小鼠致死率却降低5倍.TNF-βC端结构的完整性对保持细胞毒活性是必需的,因此可通过构建N端的不同缺失体来重组高抗癌效应和低毒副作用的生物制剂.本文选用融台表达载体来组建人N端缺失体的表达质粒,并且借T（?）-lac启动子、His6-tag等元件,以期获得高效表达和利用Ni<sup>2+</sup>螯合树脂柱来亲和纯化,为进一步研究TNF-β缺失体的生物学活性和TNF-β的开发利用打下基础.
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关键词
肿瘤坏死因子
His6-TNF-β
质粒
纯化
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职称材料
题名
表达载体pRSET C重组rhTNF-β的表达及其纯化
被引量：
2
1
作者
邱莲女
马志章
周晴
李芳芳
陈常庆
丁仁瑞
机构
浙江大学生命科学学院免疫工程实验室
中国
科学
院上海生物
工程
研究中心
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
1999年第3期167-169,共3页
基金
国家自然科学基金!No .39670 81 5
浙江省自然科学基金!No .3970 50
文摘
将hTNFβN端缺失23个氨基酸的基因,克隆在表达载体pRSETC的6个组氨酸序列和肠激酶酶切位点序列的下游。以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,rhTNFβ获得了高表达,表达量占细菌总蛋白的26%。其表达产物大部分以可溶性形式存在。菌体裂解上清经0.45μm滤膜过滤后,用固定化金属配体亲和柱层析,纯度可达95%左右;经肠激酶酶切后,具有TNFβ的细胞毒活性,此活性为9.8×109U/g。
关键词
表达载体
pRSET
C
rhTNF-β
表达
纯化
Keywords
expressionvectorpRSETC rhTNF β expression immobilizedmetalaffinitychromatography
分类号
R392－33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
人γ干扰素突变体(hIFNγ135-X14)在大肠杆菌中高效表达
被引量：
1
2
作者
周晴
张惟杰
马志章
应红宇
丁仁瑞
机构
浙江大学生命科学学院免疫工程实验室
上海交通
大学
生物医学
工程
学系
出处
《浙江大学学报（自然科学版）》
CSCD
1999年第3期271-276,共6页
基金
国家自然科学基金
文摘
利用体外重组技术，将人γ干扰素／β肿瘤坏死因子融合蛋白（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３－ｈＴＮＦβ１４８，ｈγＴＮＦβ）的基因５′端ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１３编码序列取出，添上终止密码子，克隆到ｐＢＶ２２０表达载体ＰＲＰＬ串联起动子的下游，构建成人γ干扰素突变体（ｈＩＦＮγ１３５－Ｘ１４）表达质粒．在质粒构建过程中，原载体上紧接ＳＤ序列后的ＥｃｏＲ１位点被新引入的Ｘｂａ１位点所取代，重组后的质粒，ＳＤ序列与ＡＴＧ起始密码子之间的核苷酸数达到１０个．经转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，温敏诱导表达，细菌稳定高效地表达了人γ干扰素突变体（１８ｋＤ），表达量约占菌体总蛋白的４２％，表达产物主要以包涵体形式存在．经初步纯化复性后，表达产物的干扰素（ＩＦＮ）抗病毒比活性达到１．１８×１０６Ｕ／ｍｇ蛋白．
关键词
融合蛋白
γ干扰素突变体
β肿瘤坏死因子
Keywords
fusion protein
human γ interferon mutant
high expression
分类号
R979.1 [医药卫生—药品]
R730.5 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
人His6-TNF-β融合表达质粒的构建及其产物一步纯化法研究
3
作者
徐建芬
周晴
马志章
华明
丁仁瑞
余建法
沈丙辉
机构
浙江大学生命科学学院免疫工程实验室
浙江
中医
学院
美国希望之城癌症研究中心
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
1999年第4期314-314,共1页
基金
国家自然科学基金(79670815)资助项目
浙江省自然科学基金(397050)资助项目
文摘
人β-肿瘤坏死因子（tumor mecrosis factor beta,TNF-β）又称淋巴毒素（lymphotoxin,LT）、是最早发现的细胞因子之一.研究表明,它不仅对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用,而且参与免疫和炎症反应的调节,并能诱导多种分化细胞抗原的表达.成熟的人TNF-β由171个aa组成,其N端为非功能区,研究发现若N端缺失25个aa,仍可保持其细胞毒活性;若缺失24个aa,则该缺失体的细胞毒作用可提高2～6倍,而对小鼠致死率却降低5倍.TNF-βC端结构的完整性对保持细胞毒活性是必需的,因此可通过构建N端的不同缺失体来重组高抗癌效应和低毒副作用的生物制剂.本文选用融台表达载体来组建人N端缺失体的表达质粒,并且借T（?）-lac启动子、His6-tag等元件,以期获得高效表达和利用Ni<sup>2+</sup>螯合树脂柱来亲和纯化,为进一步研究TNF-β缺失体的生物学活性和TNF-β的开发利用打下基础.
关键词
肿瘤坏死因子
His6-TNF-β
质粒
纯化
分类号
Q516.03 [生物学—生物化学]
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达载体pRSET C重组rhTNF-β的表达及其纯化
邱莲女
马志章
周晴
李芳芳
陈常庆
丁仁瑞
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
1999
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人γ干扰素突变体(hIFNγ135-X14)在大肠杆菌中高效表达
周晴
张惟杰
马志章
应红宇
丁仁瑞
《浙江大学学报（自然科学版）》
CSCD
1999
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
人His6-TNF-β融合表达质粒的构建及其产物一步纯化法研究
徐建芬
周晴
马志章
华明
丁仁瑞
余建法
沈丙辉
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
1999
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
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参考文献
引证文献
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