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福尔马林固定白鱀豚标本DNA提取及其遗传多样性的初步研究
被引量：
13
1
作者
许黎美
万秋红
王丁
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期272-278,共7页
福尔马林固定标本是宝贵的遗传资源,但是如何有效利用其中的遗传信息一直存在问题。本文尝试从标本预处理、消化、PCR扩增各方面综合考虑和优化改进,成功提取并扩增21头福尔马林固定白豚标本线粒体DNA控制区410bp片段。采用了3种预处...
福尔马林固定标本是宝贵的遗传资源,但是如何有效利用其中的遗传信息一直存在问题。本文尝试从标本预处理、消化、PCR扩增各方面综合考虑和优化改进,成功提取并扩增21头福尔马林固定白豚标本线粒体DNA控制区410bp片段。采用了3种预处理方法尽量去除固定标本中残存的甲醛,从试验结果来看,从酒精梯度+临界点干燥处理的标本中提取的DNA在扩增时具有明显优势。通过蛋白酶K消化过程中对于酶的浓度、温浴时间的比较试验,发现随着采用大幅提高酶浓度、延长消化时间等高强度的蛋白酶消化操作后,DNA的质量和产量均得到显著提高。针对标本DNA降解严重的特点,设计特异性好且长度合适的引物以及使用巢式引物扩增,均提高了标本DNA扩增的特异性和灵敏度。通过对所测得的21头白鱀豚线粒体DNA控制区部分序列的对比,发现全部个体在该片段上的序列完全一致,说明白豚遗传多样性极低。
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关键词
福尔马林固定标本
DNA提取
白暨豚
遗传多样性
极度濒危物种
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职称材料
传染性支气管炎病毒疫苗株H52的全基因组克隆与分析
被引量：
1
2
作者
肖朝庭
时莉
+3 位作者
宋翥远
刘然
阿合买提.买买提
周继勇
《中国动物传染病学报》
CAS
2009年第2期17-23,共7页
采用RT-PCR方法克隆测定传染性支气管炎病毒（Infections Bronchitis Virus，IBV）疫苗株H52全基因组序列，并与其它已知全基因组序列的我国分离株进行比较分析，以分析我国IBV地方分离株与疫苗株的分子遗传关系。结果表明，H52基因组...
采用RT-PCR方法克隆测定传染性支气管炎病毒（Infections Bronchitis Virus，IBV）疫苗株H52全基因组序列，并与其它已知全基因组序列的我国分离株进行比较分析，以分析我国IBV地方分离株与疫苗株的分子遗传关系。结果表明，H52基因组全长为27630bp（不包括polyA），A＋T含量为61．8％，它与我国IBV分离株全基因组同源性在83．9％～95．2％之间，其中与KQ6的同源性最高（95．2％），与其余株均在88％以下。在基因组内基因的同源性中，以S1、S2与E变异最大，除KQ6外，其余各株（含台湾株）与H52在S1蛋白上的同源性只有72．4％～80．7％，在S2蛋白上的同源性为85．5％～88．1％，E蛋白为82．9％～93．3％。系统进化分析表明，国内分离株，除KQ6外，在进化分支中已独立于H52和其它Massachusetts型衍生毒株。H52与我国地方分离株存在较大的分子遗传差异，这些差异可能导致单纯Massachusetts型疫苗（如H120，H52）不能有效地免疫保护我国的鸡群。
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关键词
传染性支气管炎病毒
疫苗株H52
克隆
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职称材料
猪圆环病毒2型Rep蛋白在真核细胞中的表达与定位
被引量：
1
3
作者
张鑫
尹伟
+3 位作者
金玉兰
何嘉玲
颜焰
周继勇
《中国动物传染病学报》
CAS
2009年第1期1-6,共6页
为了构建Rep蛋白真核表达质粒,研究PCV2复制过程中的亚细胞分布。本研究借助PCR方法扩增PCV2的Rep基因,并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C3中,并转染PK15细胞和Vero细胞。结果显示,重组的pEGFP-PCV2-Rep融合蛋白能够在PK15细胞和Vero...
为了构建Rep蛋白真核表达质粒,研究PCV2复制过程中的亚细胞分布。本研究借助PCR方法扩增PCV2的Rep基因,并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C3中,并转染PK15细胞和Vero细胞。结果显示,重组的pEGFP-PCV2-Rep融合蛋白能够在PK15细胞和Vero细胞中表达。结论认为pEGFP-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞和Vero细胞后48h,PCV2的Rep蛋白主要定位在PK15细胞和Vero细胞的细胞核。
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关键词
猪圆环病毒2
REP蛋白
细胞定位
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职称材料
题名
福尔马林固定白鱀豚标本DNA提取及其遗传多样性的初步研究
被引量：
13
1
作者
许黎美
万秋红
王丁
机构
中国科学院水生生物研究所
浙江大学濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室
出处
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期272-278,共7页
基金
国家自然科学基金(30170142)
中国科学院重要创新方向项目(KSCX2-SW-118)
中国科学院创新领域前沿项目(220103)资助。
文摘
福尔马林固定标本是宝贵的遗传资源,但是如何有效利用其中的遗传信息一直存在问题。本文尝试从标本预处理、消化、PCR扩增各方面综合考虑和优化改进,成功提取并扩增21头福尔马林固定白豚标本线粒体DNA控制区410bp片段。采用了3种预处理方法尽量去除固定标本中残存的甲醛,从试验结果来看,从酒精梯度+临界点干燥处理的标本中提取的DNA在扩增时具有明显优势。通过蛋白酶K消化过程中对于酶的浓度、温浴时间的比较试验,发现随着采用大幅提高酶浓度、延长消化时间等高强度的蛋白酶消化操作后,DNA的质量和产量均得到显著提高。针对标本DNA降解严重的特点,设计特异性好且长度合适的引物以及使用巢式引物扩增,均提高了标本DNA扩增的特异性和灵敏度。通过对所测得的21头白鱀豚线粒体DNA控制区部分序列的对比,发现全部个体在该片段上的序列完全一致,说明白豚遗传多样性极低。
关键词
福尔马林固定标本
DNA提取
白暨豚
遗传多样性
极度濒危物种
Keywords
DNA extraction
Formalin-fixed tissues
Genetic diversity
Baiji
分类号
Q959.841 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
传染性支气管炎病毒疫苗株H52的全基因组克隆与分析
被引量：
1
2
作者
肖朝庭
时莉
宋翥远
刘然
阿合买提.买买提
周继勇
机构
浙江大学
农业部
动物
疫病病原学与免疫控制
重点
开放
实验室
浙江大学
传染病诊治国家
重点
实验室
浙江大学濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室
新疆农业
大学
动物
医学院
湖南农业
大学
动物
医学院
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
2009年第2期17-23,共7页
基金
国家科技支撑计划资助(2006BAD06A03)
国家自然科学基金项目(30625030)
文摘
采用RT-PCR方法克隆测定传染性支气管炎病毒（Infections Bronchitis Virus，IBV）疫苗株H52全基因组序列，并与其它已知全基因组序列的我国分离株进行比较分析，以分析我国IBV地方分离株与疫苗株的分子遗传关系。结果表明，H52基因组全长为27630bp（不包括polyA），A＋T含量为61．8％，它与我国IBV分离株全基因组同源性在83．9％～95．2％之间，其中与KQ6的同源性最高（95．2％），与其余株均在88％以下。在基因组内基因的同源性中，以S1、S2与E变异最大，除KQ6外，其余各株（含台湾株）与H52在S1蛋白上的同源性只有72．4％～80．7％，在S2蛋白上的同源性为85．5％～88．1％，E蛋白为82．9％～93．3％。系统进化分析表明，国内分离株，除KQ6外，在进化分支中已独立于H52和其它Massachusetts型衍生毒株。H52与我国地方分离株存在较大的分子遗传差异，这些差异可能导致单纯Massachusetts型疫苗（如H120，H52）不能有效地免疫保护我国的鸡群。
关键词
传染性支气管炎病毒
疫苗株H52
克隆
Keywords
Infections bronchitis rirus
raccine strain H52
clone
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
Q7 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
猪圆环病毒2型Rep蛋白在真核细胞中的表达与定位
被引量：
1
3
作者
张鑫
尹伟
金玉兰
何嘉玲
颜焰
周继勇
机构
浙江大学
农业部
动物
疫病病原学与免疫控制
重点
开放
实验室
浙江大学
传染病诊治国家
重点
实验室
浙江大学濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
2009年第1期1-6,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(30625030)
国家"863"计划课题(2007AA100606)
文摘
为了构建Rep蛋白真核表达质粒,研究PCV2复制过程中的亚细胞分布。本研究借助PCR方法扩增PCV2的Rep基因,并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C3中,并转染PK15细胞和Vero细胞。结果显示,重组的pEGFP-PCV2-Rep融合蛋白能够在PK15细胞和Vero细胞中表达。结论认为pEGFP-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞和Vero细胞后48h,PCV2的Rep蛋白主要定位在PK15细胞和Vero细胞的细胞核。
关键词
猪圆环病毒2
REP蛋白
细胞定位
Keywords
Porcine circovirus 2
Rep protein
cellular distribution
分类号
S858.282.659.2 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
福尔马林固定白鱀豚标本DNA提取及其遗传多样性的初步研究
许黎美
万秋红
王丁
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
13
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
传染性支气管炎病毒疫苗株H52的全基因组克隆与分析
肖朝庭
时莉
宋翥远
刘然
阿合买提.买买提
周继勇
《中国动物传染病学报》
CAS
2009
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
猪圆环病毒2型Rep蛋白在真核细胞中的表达与定位
张鑫
尹伟
金玉兰
何嘉玲
颜焰
周继勇
《中国动物传染病学报》
CAS
2009
1
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职称材料
已选择
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引证文献
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