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10-23 DNA enzyme对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的切割活性
被引量：
2
1
作者
侯伟
沃健儿
+1 位作者
刘克洲
李敏伟
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2006年第5期507-511,共5页
目的:探讨10-23 DNA enzym e对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的特异切割活性。方法:设计并合成3种能针对乙型肝炎病毒C基因开放阅读框A1816UG的特异性脱氧核酶,分别命名为D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9。应用体外转录的方法获得相应的...
目的:探讨10-23 DNA enzym e对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的特异切割活性。方法:设计并合成3种能针对乙型肝炎病毒C基因开放阅读框A1816UG的特异性脱氧核酶,分别命名为D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9。应用体外转录的方法获得相应的底物RNA,观察D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9对其的体外切割效应。以D rzBC-9为例,观察不同浓度的M gC l2对体外切割效率的影响,根据L inew eaver Burk作图法,计算相关的酶动力学参数Km、K cat和K cat/Km。结果:通过体外转录获得用于切割反应的底物RNA,其大小为300 nt。在特定的切割条件下,D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9均能对相应的底物RNA进行有效的切割,切割产物分别为109 nt和191 n。t以D rzBC-9为例,在切割反应体系中缺乏M gC l2时,未见有切割反应。M gC l2浓度在150 mm o.lL-1时达到最高切割效率,再提高M gC l2的浓度,切割效率未见明显增大。酶动力学参数Km、K cat和K cat/Km分别为1.4×10-9m o.lL-1,1.6 m in-1和1.1×109m o.lL-1.m in-1。结论:针对乙型肝炎病毒C基因的10-23 DNA enzym e在体外对相应的转录产物有特异切割作用。
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关键词
DNA催化性
DNA
单es
链
肝炎病毒
乙型/遗传学
基因组
病毒/遗传学
重组
遗传
转染
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职称材料
IFN-γ与HIV-1gp120融合蛋白的表达及其免疫调节作用
被引量：
2
2
作者
赵刚
吴南屏
姚航平
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2006年第6期610-614,共5页
目的:研究gamm a干扰素(IFN-γ)对人类免疫缺陷病毒(H IV-1)gp120蛋白免疫小鼠后效果的调节作用。方法:利用分子生物学技术,构建表达中国流行株H IV-1gp 120 N端片段基因的原核质粒p et44b-gp 120,及共表达H IV-1gp 120 N端片段基因与I...
目的:研究gamm a干扰素(IFN-γ)对人类免疫缺陷病毒(H IV-1)gp120蛋白免疫小鼠后效果的调节作用。方法:利用分子生物学技术,构建表达中国流行株H IV-1gp 120 N端片段基因的原核质粒p et44b-gp 120,及共表达H IV-1gp 120 N端片段基因与IFN-γ基因的原核质粒p et44b-gp 120/IFN-γ,在E.coli BL 21(DE 3)细胞中进行低温诱导蛋白表达,然后经纯化后免疫BALB/c小鼠。实验设皮下注射gp120/IFN-γ组、gp120组和PBS三组,以检测H IV-1gp120诱导的T细胞增殖能力,CTL杀伤作用以及Th1型细胞因子(IL-2,IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4,IL-10)的表达情况。结果:通过PAGE和W estern b lot检测,证实上述两种蛋白在DE 3细胞中得到表达。免疫学实验表明,针对H IV-1 gp120的特异性T淋巴细胞增殖作用、特异性CTL杀伤作用,以及Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ表达在三组之间均有显著性差异(P<0.05),gp120/IFN-γ组高于gp120组,gp120组高于PBS组(P<0.05)。反映体液免疫反应的Th2型细胞因子IL-4和IL-10的表达在三组之间没有显著性差异(P>0.05)。结论:协同应用IFN-γ基因可明显加强H IV-1gp 120基因的细胞免疫反应。
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关键词
干扰素Ⅱ型
HIV包膜蛋白质gp120/代谢
佐剂
免疫
HIV
GP120
IFN-Γ
融合表达
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职称材料
题名
10-23 DNA enzyme对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的切割活性
被引量：
2
1
作者
侯伟
沃健儿
刘克洲
李敏伟
机构
浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2006年第5期507-511,共5页
基金
国家自然科学基金(No.30271183No.30471539)
文摘
目的:探讨10-23 DNA enzym e对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的特异切割活性。方法:设计并合成3种能针对乙型肝炎病毒C基因开放阅读框A1816UG的特异性脱氧核酶,分别命名为D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9。应用体外转录的方法获得相应的底物RNA,观察D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9对其的体外切割效应。以D rzBC-9为例,观察不同浓度的M gC l2对体外切割效率的影响,根据L inew eaver Burk作图法,计算相关的酶动力学参数Km、K cat和K cat/Km。结果:通过体外转录获得用于切割反应的底物RNA,其大小为300 nt。在特定的切割条件下,D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9均能对相应的底物RNA进行有效的切割,切割产物分别为109 nt和191 n。t以D rzBC-9为例,在切割反应体系中缺乏M gC l2时,未见有切割反应。M gC l2浓度在150 mm o.lL-1时达到最高切割效率,再提高M gC l2的浓度,切割效率未见明显增大。酶动力学参数Km、K cat和K cat/Km分别为1.4×10-9m o.lL-1,1.6 m in-1和1.1×109m o.lL-1.m in-1。结论:针对乙型肝炎病毒C基因的10-23 DNA enzym e在体外对相应的转录产物有特异切割作用。
关键词
DNA催化性
DNA
单es
链
肝炎病毒
乙型/遗传学
基因组
病毒/遗传学
重组
遗传
转染
Keywords
DNA, catalytic
DNA, single-stranded
Hepatitis B virus/genet
Genome, viral/genet
Recombination,genetic
Transfection
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
IFN-γ与HIV-1gp120融合蛋白的表达及其免疫调节作用
被引量：
2
2
作者
赵刚
吴南屏
姚航平
机构
浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2006年第6期610-614,共5页
基金
国家"十五"攻关项目(0004BA719A10)
文摘
目的:研究gamm a干扰素(IFN-γ)对人类免疫缺陷病毒(H IV-1)gp120蛋白免疫小鼠后效果的调节作用。方法:利用分子生物学技术,构建表达中国流行株H IV-1gp 120 N端片段基因的原核质粒p et44b-gp 120,及共表达H IV-1gp 120 N端片段基因与IFN-γ基因的原核质粒p et44b-gp 120/IFN-γ,在E.coli BL 21(DE 3)细胞中进行低温诱导蛋白表达,然后经纯化后免疫BALB/c小鼠。实验设皮下注射gp120/IFN-γ组、gp120组和PBS三组,以检测H IV-1gp120诱导的T细胞增殖能力,CTL杀伤作用以及Th1型细胞因子(IL-2,IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4,IL-10)的表达情况。结果:通过PAGE和W estern b lot检测,证实上述两种蛋白在DE 3细胞中得到表达。免疫学实验表明,针对H IV-1 gp120的特异性T淋巴细胞增殖作用、特异性CTL杀伤作用,以及Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ表达在三组之间均有显著性差异(P<0.05),gp120/IFN-γ组高于gp120组,gp120组高于PBS组(P<0.05)。反映体液免疫反应的Th2型细胞因子IL-4和IL-10的表达在三组之间没有显著性差异(P>0.05)。结论:协同应用IFN-γ基因可明显加强H IV-1gp 120基因的细胞免疫反应。
关键词
干扰素Ⅱ型
HIV包膜蛋白质gp120/代谢
佐剂
免疫
HIV
GP120
IFN-Γ
融合表达
Keywords
Interferon type Ⅱ
HIV envelope protein gp120/metab
Adjuvants, immunologic
Human immunodeficiency virus
gp120
Interleukin-γ
Recombinant expression
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
10-23 DNA enzyme对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的切割活性
侯伟
沃健儿
刘克洲
李敏伟
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2006
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
IFN-γ与HIV-1gp120融合蛋白的表达及其免疫调节作用
赵刚
吴南屏
姚航平
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
2006
2
在线阅读
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